Принцип метода: При взаимодействии сульфатной кислоты с азотисто-кислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая реагируя со связанным билирубином сыворотки даёт розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности его судят о концентрации билирубина, вступающего в прямую реакцию.
Методика выполнения: В две пробирки опытную и контрольную добавляют по 0,5 мл исследуемой сыворотки. В опытную добавляют 1,75 мл физраствора и 0,25 мл диазосмеси. В контрольную — 2,0 мл физраствора. Пробы колометрируют и расчёт ведут по калибровочной кривой.
Предполагаемые результаты:
Выполняется обсуждение результатов и делаются выводы.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2
Определение желчных пигментов в исследуемой моче
Принцип метода; Желчный пигмент билирубин, окисляясь дает соединения зеленного, синего и желтого цвета.
Методика выполнения: 1. Проба Гмелина. В пробирку вносят 10-15 капель азотной кислоты и по стенке — 5 капель мочи. В пробирке образуется два слоя. На границе слоев возникает осадок белка и желчных кислот и цветные кольца — зелёное, синее, фиолетовое, красное и желтое.
1. Проба Розенбаха. Исследуемую мочу — 5 капель, вносят в пробирку, добавляют уксусную кислоту — 1 каплю и 5 капель раствора Люголя. Возникает зелёное окрашивание.
Результаты оформляют в виде вывода.
Предполагаемые результаты:
определить типы желтух (1, 2, 3).
|
| (мкмоль/л) прямой билирубин (мкмоль/л) | ||||
| Моча: прямой билирубин (мг/сут) | ||||
| уробилин (мг/сут) | следы | |||
| Кал: Стеркобилин (мг/сут) | следы |
Какие дополнительные исследования могут потребоваться для уточнения диагноза?
Выполняется обсуждение результатов и делаются выводы.
II. Перечень вопросов для проверки исходного уровня
Знаний
1. Что такое хромопротеиды, представители, подклассы.
2. Функции хромопротеидов.
3. Где синтезируется гемоглобин, условия?
4. Как усваивается железо в желудочно-кишечном тракте?
5. Изобразить схему синтеза.
6. Как и где расщепляется гемоглобин? Отобразить таблицу.
7. Что такое вердоглобин?
8. Понятие «прямого» и «непрямого» билирубина.
9. Как определить прямой билирубин в крови?
10. Судьба непрямого билирубина, пути обезвреживания его в гепатоците.
11. Образование уробилирубина, стеркобилиногена, его судьба.
12. Сколько в норме содержание общего билирубина в крови?
III. IIepeчeнь вопросов для проверки конечного уровня знаний
1. Как и где идёт синтез гема?
2. Особенности усвоения Fe2+ в желудочно-кишечном тракте.
3. Где разрушается в организме гемоглобин?
4. Написать схему распада гемоглобина.
5. Как образуется непрямой билирубин?
6. Обезвреживание билирубина в печени.
7. Судьба глюкуронидов (моно — ди).
8. Как определить концентрацию билирубина в крови?
9. Что такое уробилин, где образуется?
10. Сколько в норме за сутки выделяется стеркобилиногена?
11. Каковы причины гипербилирубинемии?
12. Желтухи, их классификация.
13. Биохимические нарушения при надпеченочной желтухе.
14. Как изменяются биохимические показатели при печеночной желтухе?
15. Указать основные причины развития подпеченочной желтухи.
16. Назвать основные биохимические нарушения при обтура- ционной желтухе.
Дополнительные вопросы для педиатрического факультета.
Особенности синтеза и распада гемоглобина в детском возрасте.
Гемолитические желтухи новорожденных.
IV. Хронокарта учебного занятия
1. Общий бюджет времени: 3 часа (135).
2. Перекличка 5 минут.
3. Разбор основных вопросов темы 60 минут.
4. Тестовый опрос 20 минут.
5. Проведение лабораторной работы.
6. Оформление протоколов 10 минут.
V. Самостоятельная работа студентов
1. Обмен железа в процессе метаболизма гемоглобина.
2. Основные этапы синтеза гема.
VI. Список используемой литературы
Основная:
1. Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин «Биологическая химия», Москва, 2007
2. Е.С. Северин «Биохимия», Москва 2003
3. Е.С. Северин «Биохимия с упражнениями и задачами», Москва 2010, «ГЭОТАР - медия»
4. Ф.С. Дзугкоева, Э.А. Каряева, А.Е. Гурина, Н.М. Амбарцумянц, С.Г.Дзугкоев «Биохимия основных процессов обмена веществ и гормональная регуляция» тестовые задания по курсу биологической химии, Владикавказ 2007
5. Ф.С. Дзугкоева, Э.А. Каряева, А.Е. Гурина, Н.М. Амбарцумянц, И.В. Можаева, С.Г. Дзугкоев, Е.А.Такоева «Руководство к практическим занятиям по биологической химии», в 4 т., Владикавказ 2008
Дополнительная:
1. Е.А.Строев. Биологическая химия, Москва 1986
2. Ленинджер Л. «Биохимия» Москва, 1976
3. Ленинджер Л. «Биохимия».1986
4. Е.С. Северин, Т.Л. Алейникова, Е.В. Осипов «Биохимия», Москва 2000
5. Гринстейн Б., Гринстейн А. Наглядная биохимия, Москва 2000
6. Элиот В., Элиот Д., Биохимия и молекулярная биология, Москва 2000, стр. 23-36
7. под ред. Д.М. Зубаирова, «Биохимия» тестовые вопросы, «ГЭОТАР - медия», 2008
8. У. Мак-Мюррей «Основы учения о взаимодействии биохимии с физиологией и патологией», 1980
9. Страйер Л. Биохимия. В 3-х томах. 1984 год
10. Досон и др. Справочник биохимика, 1991
11. Мусил Я., Новикова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах, 2-е изд. 1984 год
12. Марри Р., Греннер Д., Мейес П. Биохимия человека
13. Николаев А. Я. Биологическая химия