Обычно пользуются камерой Горяева с двумя сетками, разграниченными глубокой поперечной канавкой (рис. 24.2, 1руководства по практич. занятиям). Сбоку от сеток находятся стеклянные прямоугольные пластинки, к которым притирают специальные шлифованные покровные стекла. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 х 15).
Большие квадраты, расчерченные вертикально и горизонтально на 16 малых квадратов, чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями, и квадратами чистыми, без линий. Глубина камеры равна 1/10 мм, сторона малого квадрата - 1/20 мм; таким образом, объем малого квадрата равен 1/4000 мм. Большие квадраты, состоящие каждый из 16 малых, служат при счете ориентирами.
Перед заполнением камеру и шлифованное покровное стекло вымойте и высушите. Покровное стекло притирайте к камере так, чтобы появились радужные кольца (только при этих условиях соблюдается правильный объем камеры). Каплю разведенной крови внесите пипеткой под притертое покровное стекло камеры. После заполнения камеру оставьте на 1-2 мин в покое для оседания форменных элементов, затем приступайте к подсчету при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения (диафрагма прикрыта и несколько опущен конденсор).
Эритроциты считайте в пяти больших квадратах (5 * 16 = 80 малых квадратов), расположенных по диагонали, поскольку распределение клеток в камере может быть неравномерным. Для этого под микроскопом отыщите левый верхний большой квадрат (разграфленный), подсчитайте количество находящихся в нем эритроцитов, затем по диагонали вниз и направо найдите следующий разграфленный квадрат и т. д. (рис. 24.2, руководства к практич. занятиям).
Найденное в каждом квадрате число эритроцитов заносите в протокол опыта.
Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуйтесь следующим правилом: подсчитывайте все эритроциты, находящиеся внутри малого квадрата; нa разграничительных линиях подсчитывают их только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадрата. Клетки, пересеченные разграничительной линией пополам, подсчитывайте лишь на двух сторонах квадрата - левой и верхней; клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считайте. Результаты подсчетa эритроцитов в каждом из 5 больших квадратов записывайте отдельно и суммируйте. Для расчета количества эритроцитов в 1 л пользуйтесь следующей формулой:
Х 
* 
где х- количество эритроцитов в 1 л крови; а - сумма эритроцитов, подсчитанных в определенном количестве мальrx квадратов; 4000 - множитель, приводящий результат к объему 1 мкл крови, поскольку объем малого квадрата 1/4000 мкл; б - степень разведения крови (200 раз); в - число мальrx квадратов, в которых считались эритроциты; 
- количество микролитров в 1 л.
При подсчете в 5 больших (80 малых) квадратах и при разведении крови в 200 раз формула для определения количества эритроцитов в 1 мкл крови приобретает следующий вид:
Х= 
Для получения более точного результата производите подсчет в двух сетках и используйте для подсчета средний арифметический результат.
О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а. 1. Произведите подсчет согласно инструкции или рассчитайте по формуле количество эритроцитов в 1 л крови.
2. Зарисуйте камеру Горяева.
3. Сделайте заключение о соответствии полученных результатов нормативным.
Задача 2. Определение концентрации гемоглобина
Важнейшими методами являются колориметрические.
О с н а щ е н и е: гемометр Сали, 0,1% раствор HCI, дистилированная вода, капилляр.
С о д е р ж а н и е р а б о т ы.
Гематиновый метод (метод Сали). Основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина коричневого цвета. Используют гемометр Сали, состоящий из трех пробирок одинакового диаметра.
Одна (средняя) порбирка – пустая, две другие содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски. В градуированную пробирку до нижней метки наливают 0,1% раствор хлористоводородной кислоты. В капиллярную пипетку до линейки 0,1 набирают кровь и медленно выпускают ее под слой кислоты. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 5—10 мин. Затем полученный раствор хлорида гематина темно-коричневого цвета разводят водой до цвета стандарта, интенсивность окраски которого соответствует идеальной норме – содержанию гемоглобина 166,7 г/л (16,67г%). Как только цвет исследуемой жидкости полностью сравняется с цветом стандартов в гемометре Сали, отмечают, какому делению шкалы градуированной контрольной пробирки соответствует нижний мениск жидкости: это и будет искомое количество гемоглобина. В настоящее время метод считается рутинным, в клиниках применяется редко.
Цианметгемоглобиновый фотометрический метод является наиболее точным. Основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови специального реактива (раствор Драбкина). Показания фотоэлектроколориметра соответствует определенному содержанию в крови гемоглобина.
О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а. 1) Определите концентрацию гемоглобина в образце крови, предлагаемой для исследования. 2) Занесите данные в тетрадь:
3) Сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативным.
Заключение