Использование цоликлонов

Определение групп крови

Группа крови - описание индивидуальных антигенных характеристик эритроцитов, определяемое с помощью методов идентификации специфических групп углеводов и белков, включённых в мембраны эритроцитов животных.

В мембране эритроцитов человека содержится более 300 различных антигенных детерминант, молекулярное строение которых закодировано соответствующими генными аллелями хромосомных локусов. Количество таких аллелей и локусов в настоящее время точно не установлено.

Термин «группа крови» характеризует системы эритроцитарных антигенов, контролируемых определенными локусами, содержащими различное число аллельных генов, таких, например, как A, B и 0 в системе AB0. Термин «тип крови» отражает её антигенный фенотип (полный антигенный «портрет», или антигенный профиль) - совокупность всех групповых антигенных характеристик крови, серологическое выражение всего комплекса наследуемых генов группы крови(смотри рисунок 1).

Группу крови можно назвать идентификатором личности, так как она не изменяется, как и отпечатки пальцев. Самым главным является то, что различие между всеми людьми нашей планеты состоит не в этническом происхождении, а в составе крови.

Рисунок 1 ‒ Графическое изображение групп крови человека

Две важнейшие классификации группы крови человека - это система AB0 и резус-система.

Известно также 46 классов других антигенов, из которых большинство встречается гораздо реже, чем AB0 и резус-фактор.

Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов (агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Существуют два групповых агглютиногена - А и В и два агглютинина - ά и β. Разные сочетания данных антигенов и антител образуют четыре группы крови: О_άβ (I), А_β (II), В_ά (III), АВ_о (IV).

Для установления группы крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Использование стандартных сывороток. Для работы необходимы: стандартные сыворотки крови групп О (I), А (II) и В (III), двух различных серий для каждой группы; изотонический раствор натрия хлорида; белая пластина со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные палочки.

Результаты реакций с сыворотками трех групп О (I), А (II), В (III) могут давать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (см.табл.1).

Ход работы

Под соответствующим обозначением группы крови на пластину нанести по одной капле стандартной сыворотки групп О,А,В. Стандартные сыворотки берут двух различных серий для каждой группы, поэтому всего получится шесть капель, которые образуют два ряда. Рядом с каждой каплей сыворотки нанести по капле крови. Затем перемешать сухой стеклянной палочкой сыворотку и кровь. Причем для каждой пары (капля сыворотки и капля крови) необходимо использовать свою палочку. После перемешивания пластину необходимо покачать и оставить на 1-2 минуты в покое. В течение 3-5 минут наблюдать за ходом реакции изогемагглютинации. После полного наступления агглютинации добавить к смеси эритроцитов с сывороткой по капле изотонического раствора и перемешайте. Реакция изогемагглютинации может быть положительной или отрицательной. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы, но разных серий должны совпадать. При наличии агглютинации с сыворотками всех трех групп провести дополнительное исследование с сывороткой группы АВ для исключения агглютинации, вызванной антиэритроцитарными аутоантителами. Результат должен быть отрицательный!

Рисунок 2 Графическое изображение реакции агглютинации в зависимости от группы крови

группа кровь резус агглютиноген агглютинин

Так как агглютинация произошла в двух местах: в емкостях с сывороткой О и сывороткой В. Из этого следует, что в данной крови отсутствует антиген А. Следовательно, при проведении опытов выяснилось, что кровь имеет вторую группу.

Таблица 1 ‒ Интерпритация результатов определения группы крови системы АВО с использованием стандартных сывороток

Использование цоликлонов

В клинической практике определяют группы крови с помощью моноклональных антител. При этом эритроциты испытуемого смешивают на тарелке или белой пластинке с каплей стандартных моноклональных антител (цоликлоны анти-А и цоликлоны анти-B, а при нечеткой агглютинации и при AB(IV) группе исследуемой крови добавляют для контроля каплю изотонического раствора. Результат реакции оценивают через три минуты.

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови системы АВО человека вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток. Определение группы крови при помощи цоликлонов анти-А и анти-В позволяет выявить наличие антигенов (агглютиногенов) А и В. Наличие антител (агглютининов) ά и β определяется в плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами.

Цоликлоны анти-А анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов. Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирущих АВО-сывороток.

Для работы необходимы: цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ; белая пластина (планшет) со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные палочки.

Таблица 2 ‒ Интерпретация результатов определения группы крови системы АВО с использованием цоликлонов