Количественное определение глюкозы крови арсено – молибденовым методом

Принцип метода: Принцип метода основан на способности глюкозы окисляться в щелочной среде и восстанавливать Си(ОН)₂ до СиОН в соответствии с реакцией:

Н – С =О СООН

| I

Н - С – ОН Н – С – ОН

I |

НО-С - Н + 2Си (ОН)₂ → НО-С – Н + 2 СиОН + 2Н₂О

I |

Н – С – ОН Н – С – ОН

I |

Н – С – ОН Н – С – ОН

I |

СН₂ ОН СН₂ОН

Образовавашийся гидрат закиси меди вступает в реакцию с арсено-молибденовым реактивом (реактивом Нельсона), который при этом восстанавливается. По мере увеличения концентрации глюкозы в крови цвет раствора меняется от желто- зеленого до зелено-синего. Интенсивность окраски измеряется фотометрически.

Материальное обеспечение: изотонический раствор, 0,2% р-р вольфрамата натрия, стандартный раствор глюкозы, медный реактив А, медный реактив Б, арсено-молибденовый реактив, пробирки, штативы, водяная баня, фотоэлектроколориметр.

Ход работы:

В центрифужную пробирку наливают 3,7мл изотонического раствора, добавляют 0,1мл крови и 0,2 мл раствора вольфрамата натрия, во вторую пробирку добавляют те же реактивы, но вместо 0,1 мл крови берут 0,1 мл стандартного раствора глюкозы. Обе пробирки центрифугируют 10 минут.

Для дальнейшего исследования берут по 1 мл центрифугата и добавляют по 1 мл медного реактива (медный реактив готовят перед опытом, смешивая 5мл медного реактива А и 0,2 мл медного реактива Б) для окисления глюкозы, закрывают пробирки ватой и кипятят 10 минут на водяной бане. Пробирки затем охлаждают под струей воды. Далее осторожно по стенке, встряхивая, добавляют 3 мл арсено-молибденового реактива (реактив Нельсона). Колориметрируют обе пробирки при красном светофильтре в кювете толщиной 1 см против контрольной пробы.

Е_{оп ·} 5,6

Содержание глюкозы в крови определяют по формуле: С = ---------------- (ммоль/л),

Е_ст

где:

Еоп - экстинкция опытной пробы,

Ест - экстинкция стандартной пробы,

5,6 ммоль/л – концентрация стандартного раствора глюкозы

Содержание глюкозы в норме 3,3-5,5 ммоль/л.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1

Граф логической структуры

		САХАРНЫЙ ДИАБЕТ

Тема 3.7. Гормональная регуляция уровня глюкозы. Построение сахарных кривых. Гормоны надпочечников

Актуальность темы

Глюкоза является основным энергетическим субстратом. Наиболее важными нарушениями гомеостаза глюкозы являются сахарный диабет, характеризующийся непереносимостью глюкозы и, следовательно, гипергликемией, и различные состояния, вызывающие патологически низкую концентрацию глюкозы в крови, т.е. гипогликемию.

Резкое снижение концентрации глюкозы в крови вызывает развитие гипогликемического шока. Гипергликемии могет быть панкреатического и внепанкреатического происхождения. Особого внимания заслуживают панкреатические, поскольку 5% населения развитых стран страдают сахарным диабетом и примерно столько же людей предрасположены к этой болезни.

В связи с этим клинический интерес представляет выполнение стандартного теста на толерантность к глюкозе, который позволяет получить уточненные данные о состоянии углеводного обмена у пациента со скрытой формой сахарного диабета.

Теперь ознакомьтесь с целями заняття.

Общая цель.

Уметь интерпретировать состояние гормональной регуляции углеводного обмена на основании выполнения перорального теста на толерантность к глюкозе.

Конкретные цели: Цели исходного уровня:

Для проверки исходного уровня Вам предлагается выполнить ряд заданий.