ЛФ, ФИУ, ПФ. Практический навык




 

  1. Приготовление мазка из культуры, выросшей на плотной питательной среде:

1. обезжирить предметное стекло с помощью кусочка мыла;

2. бактериологической петлёй нанести на предметное стекло каплю воды;

3. зажечь спиртовку;

4. взять в разные руки пробирку с культурой и бактериологическую петлю;

5. простерилизовать петлю прокаливанием;

6. возле огня спиртовки открыть пробирку с культурой и обжечь её горлышко;

7. дотронуться петлёй до внутренней поверхности стенки пробирки;

8. дотронуться петлёй до бактериальной культуры с таким расчётом, чтобы на петле оказалось минимальное количество бактериальной массы;

9. вынув из пробирки петлю, обжечь горлышко пробирки и закрыть её пробкой;

10. поставить пробирку в штатив;

11. дотронуться бактериальной петлёй с культурой до капельки воды на предметном стекле с таким расчётом, чтобы капелька помутнела;

12. сжечь оставшуюся на петле бактериальную массу в огне спиртовки;

13. охладить петлю;

14. гомогенизировать каплю на предметном стекле;

15. равномерно распределить гомогенизированную каплю каплю по поверхности предметного стекла до формирования растянутого овала;

16. простерилизовать петлю прокаливанием и поставить её в штатив;

17. подсушить мазок;

18. зафиксировать мазок.

 

  1. Приготовление мазка из культуры, выросшей на жидкой питательной среде:

1. обезжирить предметное стекло с помощью кусочка мыла;

2. зажечь спиртовку;

3. взять в разные руки пробирку с культурой и бактериологическую петлю;

4. простерилизовать петлю прокаливанием;

5. возле огня спиртовки открыть пробирку с культурой и обжечь её горлышко;

6. дотронуться петлёй до внутренней поверхности стенки пробирки;

7. взять петлёй каплю бактериальной культуры;

8. вынув из пробирки петлю, обжечь горлышко пробирки и закрыть её пробкой;

9. поставить пробирку в штатив;

10. дотронуться бактериальной петлёй с культурой до предметного стекла с таким расчётом, чтобы перенести на него каплю бактериальной культуры;

11. равномерно распределить каплю бактериальной культуры по поверхности предметного стекла до формирования растянутого овала;

12. простерилизовать петлю прокаливанием и поставить её в штатив;

13. подсушить мазок;

14. зафиксировать мазок.

 

  1. Окраска мазка метиленовым синим:

1. метиленовый синий (на фиксированный мазок), 2-4 мин.;

2. промыть водой;

3. просушить фильтровальной бумагой.

 

  1. Окраска мазка водным фуксином:

1. водный фуксин (на фиксированный мазок), 1-2 мин.;

2. промыть водой;

3. просушить фильтровальной бумагой.

 

  1. Микроскопия мазка с использованием иммерсионной системы:

1. установить правильное освещение, используя малое увеличение;

2. нанести на мазок каплю иммерсионного масла;

3. поместить препарат на предметный столик микроскопа;

4. опустить иммерсионный объектив в каплю иммерсионного масла до момента касания объективом стекла;

5. глядя в окуляр, медленно поднимать объектив с помощью макровинта до момента обнаружения мазка;

6. с помощью микровинта добиться максимально резкого изображения.

 

  1. Окраска мазка по Граму:

1. генцианвиолет (на фиксированный мазок), 1-2 минуты;

2. раствор Люголя, 1-2 минуты;

3. промыть водой;

4. спирт, 20 секунд;

5. водный фуксин, 2 минуты;

6. промыть водой;

7. просушить фильтровальной бумагой.

 

  1. Идентификация по мазку стафилококка:

точки, располагающиеся грудами.

 

  1. Идентификация по мазку стрептококка:

кокки, располагающиеся цепочками.

 

  1. Идентификация по мазку палочковидной бактерии:

палочки без каких-либо дополнительных отличительных признаков.

 

  1. Окраска мазка по Цилю-Нильсену:

1. фуксин Циля (на фиксированный мазок), нагреть до парения, но не допускать кипения, 5 минут;

2. охладить стекло;

3. промыть водой;

4. кислота, 5 секунд;

5. промыть водой;

6. метиленовый синий, 4 минуты;

7. промыть водой;

8. просушить фильтровальной бумагой.

 

  1. Идентификация по мазку бацилл:

крупные палки, образующие цепочки.

 

  1. Идентификация по мазку капсульных бактерий:

на окрашенном фоне – неокрашенные ореолы вокруг бактериальных клеток.

 

  1. Идентификация по мазку стрептомицетов:

ветвящиеся нити.

 

  1. Идентификация по мазку плесневой формы микроскопического грибка:

гифы (на малом увеличении).

 

  1. Идентификация по мазку дрожжей и дрожжеподобных грибков:

овальные и круглые большие клетки разного размера (с гетерогенностью внутри).

 

  1. Окраска мазка по Нейссеру:

1. синька Нейссера (на фиксированный мазок), 1-2 минуты;

2. раствор Люголя, 1-2 минуты;

3. промыть водой;

4. везувин, 1-2 минуты;

5. промыть водой;

6. просушить фильтровальной бумагой.

 

  1. Идентификация по мазку коринебактерий (окрашенные по Нейссеру или по Леффлеру):

палочки с точками.

 

18. Засев патологического материала на пластинчатый МПА петлей с целью получения отдельных колоний:

1. зажечь спиртовку;

2. взять в разные руки бактериологическую петлю и пробирку с патологическим материалом;

3. простерилизовать петлю прокаливанием;

4. возле огня спиртовки открыть пробирку и обжечь её горлышко;

5. дотронуться петлёй до внутренней поверхности стенки пробирки;

6. взять каплю патологического материала;

7. вынув из пробирки петлю, обжечь горлышко пробирки и закрыть её пробкой;

8. поставить пробирку в штатив;

9. взять чашку Петри с пластинчатым агаром;

10. приоткрыв чашку Петри, нанести петлёй параллельные штрихи на ¼ поверхности агара, после каждого штриха отрывая петлю от поверхности агара;

11. вынуть петлю, закрыть чашку Петри и простерилизовать петлю;

12. приоткрыв чашку Петри, охладить петлю о внутреннюю поверхность крышки;

13. повернув чашку Петри под прямым углом к засеянному сектору, нанести петлёй параллельные штрихи, после каждого штриха отрывая петлю от поверхности агара;

14. повторить пп. 11-13 для засева третьего и четвёртого секторов, в последнем случае – штрихи не доводить до области засева первого сектора;

15. вынуть петлю, закрыть чашку Петри и простерилизовать петлю.

 

19. Индикация типа колоний (S- или R-) на пластинчатом МПА:

Гомогенные, с ровным краем, влажные – S-колонии; гетерогенные, с неровным краем, сухие – R-колонии.

 

20. Пересев части колонии на скошенный МПА:

1. простерилизовать бактериологическую петлю;

2. приоткрыв чашку Петри с изолированным ростом, охладить петлю о внутреннюю поверхность крышки;

3. коснуться петлёй нужной колонии, не дотрагиваясь до остальных;

4. вынуть петлю и закрыть чашку Петри;

5. взять пробирку со скошенным агаром;

6. возле огня открыть пробирку и прожечь её горлышко;

7. внести петлю в пробирку и густыми штрихами (или круговыми движениями) засеять поверхность скошенного агара снизу вверх;

8. вынуть петлю из пробирки, прожечь её горлышко и закрыть пробкой;

9. поставить пробирку в штатив;

10. простерилизовать петлю.

 

 

21. Пересев бактериальной культуры со скошенного МПА на среду Гисса:

1. взять в разные руки пробирку с культурой на скошенном агаре и бактериологическую петлю;

2. простерилизовать петлю прокаливанием;

3. возле огня спиртовки открыть пробирку и обжечь её горлышко;

4. внести петлю в пробирку, дотронуться ею до внутренней поверхности стенки пробирки;

5. коснуться петлёй бактериальной культуры;

6. вынуть петлю из пробирки, обжечь горлышко пробирки и закрыть её пробкой;

7. поставить пробирку с культурой в штатив и взять пробирку со средой Гисса;

8. возле огня открыть пробирку и обжечь её горлышко;

9. внести петлю в пробирку и засеять среду Гисса уколом, не доводя его до дна пробирки;

10. вынуть петлю, прожечь горлышко пробирки и закрыть её пробкой;

11. простерилизовать петлю и поставить её в штатив;

12. поставить пробирку с засеянной средой Гисса в штатив.

 

22. Расчёт концентрации бактериофага по методу Грациа:

1. подсчитать количество «бляшек»;

2. умножить на разведение;

3. умножить на 10 (т.к. засевается 0,1 мл);

4. полученное число – количество фаговых частиц в 1 мл исходного материала (т.е. – титр фага).

Пример. Засев 0,1 мл из разведения 10-5 дал 75 «бляшек»; 75 ∙ 105 10 = 75 ∙ 106.

 

23. Обнаружение бактерий в препарате «раздавленная капля».

1. приспустить конденсор для притемнения поле зрения с целью увеличения контрастности;

2. можно использовать как обычный (40х), так иммерсионный (90х, 100х) объективы;

3. бактерии видны, словно нарисованные простым карандашом.

 

24. Определение вирулентности бактериальной культуры по косвенным признакам (наличие гемолитической активности, наличие лецитиназной активности, наличие плазмокоагулазной активности).

1. гемолитическая активность – зелёный ободок (α-гемолиз) или зона просветления (β-гемолиз) вокруг колонии, выросшей на кровяном агаре;

2. лецитиназная активность – мутный ободок вокруг колонии, выросшей на желточном агаре;

3. плазмокоагулазная активность – образование сгустка в цитратной плазме.

 

25. Метод дисков для определения устойчивости бактериальной культуры к антибиотикам (проведение и учёт).

1. засев испытуемого штамма на пластинчатый агар газоном;

2. размещение на поверхности засеянного газоном агара дисков с антибиотиками;

3. термостатирование;

4. учёт: чем больше зона задержки роста вокруг диска, тем выше чувствительность к данному антибиотику испытуемого штамма.

 

26. Метод серийных разведений для определения устойчивости бактериальной культуры к антибиотикам (алгоритм проведения, вычисление МИК и МБК).

1. последовательное разведение антибиотика в жидкой питательной среде;

2. засев пробирок с последовательно уменьшающейся концентрацией антибиотика в питательной среде испытуемым штаммом;

3. термостатирование;

4. учёт опыта с определением МИК – наибольшего разведения (т.е. наименьшей концентрации) антибиотика в питательной среде, при которой отсутствует рост тестируемого штамма;

5. засев материала из тех пробирок, в которых нет роста, на пластинчатый агар без антибиотика;

6. термостатирование;

7. учёт опыта с определением МБК – наибольшего разведения (т.е. наименьшей концентрации) антибиотика в питательной среде, при которой тестируемого штамм теряет способность к росту на среде без антибиотика.

 

27. Определение титра лизоцима в слюне (алгоритм проведения и оценка результата):

1. последовательное разведение слюны в МПБ;

2. засев этих разведений чувствительным к лизоциму бактериальным штаммом.

3. термостатирование.

4. учёт опыта – титр лизоцима равен максимальному разведению, препятствующему росту тест-штамма.

 

28. Вычисление по мазку фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса:

1. смешивание крови с тест-культурой (например, стафилококка);

2. термостатирование в течение 30 минут;

3. приготовление и окраска мазка;

4. микроскопия мазка с подсчётом

а. фагоцитарного числа (среднего числа микробов, поглощённого одним нейтрофилом, для чего в определённом числе попавших в поле зрения нейтрофилов подсчитывается количество микробных тел, и эта сумма делится на число просмотренных нейтрофилов),

б. фагоцитарного индекса (относительное количество нейтрофилов, в %, участвующих в фагоцитозе – для его вычисления количество нейтрофилов, содержащих в цитоплазме тест-микробы, выражают в процентах к общему числу просмотренных нейтрофилов).

 

  1. Определение активности системы комплемента (алгоритм проведения и оценка результата).

1. последовательное разведение раствора, содержащего комплемент (например, сыворотки крови);

2. добавление в каждое разведение гемсистемы (эритроцитов барана и инактивированной сыворотки кролика, иммунизированного эритроцитами барана);

3. термостатирование в течение 30 минут;

4. учёт реакции – титр (=активность) комплемента равен максимальному его разведению, в котором наблюдается гемолиз.

 

  1. Проведение и учёт пластинчатой реакции агглютинации на стекле.

На предметное стекло наносят каплю диагностической сыворотки.

В ней гомогенизируют идентифицируемую культуру.

Учёт:

положительная реакция – формируется агглютинат;

отрицательная реакция – капля остаётся гомогенно-мутной.

 

  1. Проведение и учёт объёмной реакции агглютинации для определения титра антител.

1. приготовление двукратных разведений испытуемой сыворотки (титрование), не обязательно беря начальным 1:2, например – 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1: 1600 и т.д.;

2. добавление во все разведения 2 капель диагностикума;

3. термостатирование;

4. учёт – при наличии агглютинатов в разведениях сыворотки реакция считается положительной, а наибольшее разведение с наличием агглютината равно титру сыворотки (т.е. концентрации в ней антител против антигена диагностикума).

 

  1. Проведение и учёт реакции преципитации по Асколи.

в пробирке на диагностическую сыворотку медленно и осторожно, по каплям, наслаивается идентифицируемый антиген;

учёт – в положительном случае на границе сыворотки и раствора антигена появляется мутная полоска/кольцо.

 

  1. Учёт реакции преципитации по Манчини.

на специальное стекло тонким слоем наносится гель с одним из компонентов реакции;

в слое геле делаются микролунки;

в лунки вносится исследуемый раствор с вероятным содержанием второго компонента реакции;

учёт – в положительном случае вокруг лунки появляется зона преципитации, диаметр которой прямо пропорционален количеству внесённого в данную лунку компонента реакции.

 

  1. Постановка и учёт реакции связывания комплемента.

А. Формирование тест системы.

№ пробирки/лунки              
назначение опыт положит. контроль отрицат. контроль контроль исп. сыворотки контроль антигена контроль комплемента контроль гем. системы
1 объём исп. сыв-ка положит. сыв-ка отрицат. сыв-ка исп. сыв-ка физ. р-р физ. р-р физ. р-р
2 объём Ag Ag Ag физ. р-р Ag физ. р-р физ. р-р
3 объём С С С С С С физ. р-р

термостатирование

Б. Визуализация реакции.

добавление гемсистемы гем. система гем. система гем. система гем. система гем. система гем. система гем. система

термостатирование

В. Учёт реакции.

наличие гемолиза +/– + + + +
РСК –/+  

 

  1. Расшифровка показателей иммунограммы.
Показатель Характеристика  
 
CD3 количество Т-лимфоцитов  
CD4 количество Т-хелперов  
CD8 количество ЦТЛ и др. Т-лимфоцитов CD8-субпопуляции  
CD16 количество NK-клеток  
CD19 (CD20, CD22) количество В-лимфоцитов  
CD25 количество активированных лимфоцитов  
CD95 количество терминально активированных лимфоцитов, готовых к апоптозу  
ИРИ CD4/CD8 удельное содержание Т-хелперов среди всех Т-лимфоцитов  
ФЧ поглотительная способность нейтрофилов  
ФИ количество фагоцитирующих нейтрофилов (фагоцитарная активность нейтрофилов)  
CH50 количество/активность комплимента  
ЦИК активность фагоцитов, склонность к развитию аллергии III типа  
НСТ-тест завершённость фагоцитоза  
IgM количество иммуноглобулинов класса М  
IgG количество иммуноглобулинов класса G  
IgA количество иммуноглобулинов класса А  
  РБТЛ ФГА пролиферативная активность Т-лимфоцитов  
ЛПС пролиферативная активность В-лимфоцитов  
КонА пролиферативная активность Т-лимфоцитов  

 

Расшифруйте сокращения:

CD - кластеры дифференциации (CD-молекулы)

ИРИ - иммуно-регуляторный комплекс

ФЧ - фагоцитарное число

ФИ - фагоцитарный индекс

CH50 - гемолитическая активность сыворотки

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

НСТ - тест с нитро синим тетразолием

Ig - иммуноглобулины (антитела)

РБТЛ - реакция бласт-трансформации лимфоцитов

ФГА - фитогемагглютинин

ЛПС - липополисахарид

КонА - конканавалин А

 

  1. Учёт реакции иммунофенотипирования лимфоцитов.

1. Кровь обрабатывается моноклональным антительным диагностикумом к определяемой CD-молекуле.

2. При микроскопии мазка подсчитывается количество лимфоцитов, на которых адсорбированы три и более эритроцита.

3. Такие лимфоциты являются носителями определяемой CD-молекулы.

 

  1. Иммунопрепараты.

Ориентироваться по надписям на коробке, самих ампулах/флаконах, вложенных инструкциях и т.п.

 

38. Выявление в мазке из уретрального гноя гонококка или в мазке из осадка ликвора – менингококка.

Клетки с кокками в цитоплазме.

 

39. Алгоритм проведения и учёт фаготипирования бактериальной культуры.

1. засев газоном

2. нанесение в соответствующие подписанные квадраты капель типовых фагов

3. термостатирование

4. к тем фагам, в местах нанесения которых видны бляшки (отсутствие роста), культура чувствительна; перечень этих фагов – фаготип.

 

40. Дифференциация лактозопозитивных и лактозонегативных колоний на дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина, Плоскирева).

Лактозопозитивные – цветные, лактозонегативные – бесцветные (под цвет среды).

 

41. Засев скошенного агара по Щукевичу.

Засев в каплю конденсационной воды, не касаясь петлёй поверхности агара; если есть протей – он поднимется почти до самой верхней точки поверхности скошенного агара (по типу запотевания).

 

 

42. Обнаружение в мазках из мокроты, окрашенных по Цилю-Нильсену, микобактерий.

Красные бактерии в окружении всего синего.

 

 

43. Идентификация клостридий по мазку.

Палочки с пузырьками.

 

 

44. Учёт реакции непрямой гемагглютинации.

«розетка» – положительная,

«пуговка» – отрицательная.

 

 

45. Учёт реакции гемагглютинации.

«розетка» – положительная,

«пуговка» – отрицательная.

 

46. Учёт реакции торможения гемагглютинации.

«розетка» – отрицательная,

«пуговка» – положительная.



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2016-04-26 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: