Бактериологическая диагностика при стафило-, стрептококковой, синегнойной, шигеллезной инфекциях.
бакскопич-мазки, бактериологичич-посевы.
В 2этапа
1-выдел-е в чист культ
2-идентификация
1 день-мазок окраска по Грамму-тинкториальн и морфол св-ва.Посев на пит среду
2день-описание культ св-в(высота, величина,цвет, пов-ть,прозр, края, консистенция),Приготовл мазка из чист колоний Накопление ч. культ на скош агаре
3день-описание хар-ра роста чист культ. Посев на пестр ряд
4день-учет биохим св-в и заключение
Это информативный метод, чувств, опред чувств к антибиот, но долго и дорого
Синегнойная палочка-при сепсисе беру материал из раны, при гангрене из раны, мазок по грамму –палочка, на среде накопленя-мясо-пептонном агаре, образуются колонии малоактивные, плохо ферментируют глюкозу, хорошо-белки, есть пигмент пиоцианин имеется запах земляничного мыла, облигатный аэроб, гемолизин-растворяет эритроциты, желатиназа, лецитиназа, экзотоксин А, патогенность обусловлена слизью капсулоподобного в-ва защищающего от фагоцитоза, чувствителен к антибиотикам. Шигеллы –на среду Плоскирева, гр- палочки, ферментирует манит, глюкозу и сахарозу-шигеллозоны, дифференцирует на роды. Стафилококки –бывают коагулазо+(St. aureus) и –(St. Hominis intermedius haemolyticus). есть капсула, белок А-против фагоцитоза, лейкоцидин-уничтожает макрофагов, гемолизин- альфа и бета активность, энтеротоксин-вызывают, плазмокоагулаза-сгусток вокруг микроба, лецитиназа- расщепляют лецитин оболочки эритроцитов, гиалуронидаза-действует на соединительные ткани, фибринолизин- лизирует сгусток плазмы. Определяют видовую принадлежность, для ауреус –плазмокуагулазу, гемолизин, А-протеин.Стрептококки –гной, слизь из зева, моча- окраска по грамму, посев на кровяной агар, классифицруют по отутствию или наличию гемолиза, идентификация по Аг св-вам в р-и преципитации к серотипам A B D, при подозрении на сепсис посевы крови. Серологическое исследование для подтверждения ревматизма- определяют наличие ат к О-стрептолизину в РСК или преципитеции, а также С-реактивного белка.
Микроскопический метод диагностики при менингококковой, гонорейной инфекции, туберкулезе, при гнойно-воспалит заболеваниях (клебсиелла, синегнойная палочка, протей, кишечная палочка)
Менингит- спинно-мозовая жидкость или слизь из носоглотки при обследовании на бактерионосительство, кровь-сепсис, органы умерших от инфекции. Материал нужно как можно быстрее на исследование т.к. менингококки лабильны. Спинно-мозг жидкость –2 мазка из жидкисти со дна при стоянии, 1-метилен синим-2 по грамму. По грамму не красится,метилен. синим-гр-диплококки, неподвижны, не имеет спор, не образует капсул. Гонорея-отделяемое уретры, метиленоаой синью и по грамму.гр- диплококки внутри лейкоцитов. Туберкулез-1)микроскопия-DS не ставится на его основании и даже при обнаружении в материале нужен рентген, только в случае открытой формы обнаружат. Делают микроскопию, но при количестве в 1мл 10 в 5 степени не обнаружится этим методом. Использую р-ю гомогенизации т.е. с помощью 1% едкого натра. Р-ю флотации после гомогензации прогревают 30 мин температура-55, добавляют дистиллированную воду, встяхивают, отстаивают и исследуют всплывший материал красят по цилю-нильсену. 2)бактериологический-на среде Ленштейна-Енсена рост от 3 нед до 3 мес. Колонии сухие, морщинистые, изучают биохим св-ва. 3) биологический метод-заражают материалом морских свинок т.к. они восприимчивы к 1 туб. палочке.4) иммуноферментный анализ. 5) генетические методы-ЦПД и ДНК-зондирование. Гнойно-воспалит. –красятпо грамму.
Определение чувствительности к химопрепаратам и антибиоткам методом бумажных дисков и серийных разведений.
На культуру бактерий накладывают бумажные диски, пропитанные разными антибиотиками и там б где появилось зона гемолиза более 1 см-чувствителен. Серийные разведения-часто после бум.дисков,например ряд пазведений пенициллина и добавляют определенное количество бактерий, на сутки в термостат.
Иммунологические реакции при серологической диагностике инфекционных заболеваний: РСК, РНГА, РТГА, инфекционный и поствакцинельный Видаль, реакция Вассермана.
РСК- не протекает в организме. Использ. для обнаруж Ат. Опытная система-Аг Ат и С. Индикаторная система-гем сыв и эр барана. титр Аг-наиб кол Аг при котором гемолиз. Титр С –мин кол-во при котором полн гемолиз.Исполз для клещ энцеф.Если р-я при 0.2-это титр а 0.25-рабочая доза, т.е. 25% от титра. При наличии свобод С-гемолиз, а положит рез-т отстствие видимых измен. Интенсивность задержки гемолиза обозначают знаками ++++.Реакция специфична и чувств, использ для серодиагност.
РНГА(непрямой)-нагружают эритроциты, можно латекс или уголь и белок А стафилококка., ищут Ат. Нагруженные Аг эритроциты+исследуемая сыв=агглютинация.
РТГА (торможение) для обнаружения Ат в сыворотке вольного и типа вируса. Сыв разводят 1:5 +в каждую по 0,25 мл суспензии вируса, содержащей 4 гемагглютинирующие дозы вируса(1 ед-наибольшее разведение которое возвают полную агглютинацию эритроцтов.) +эритроциты. Если сыв нейтр. вирус то + р-я задержки.
Видаль- берут 4 ряда пробирок по 6 в каждом. По 1 мл сыв разведения 1:100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1:200 во ворую, 1:400, и т.д. в шестую-1 мл физиологич р-ра. Во все пробирки 1 ряда по 1-2 капле брюшнотфозного Н-диагностикума, 2 по брюшнотифозного О –дагностикума, 3-А-паратифозеой и В- паратифозый диагносткуумы. В термостат на 2 часа. Взбудитель-тот котрый агглютинирует, р-я положит если агглют-я хотя бы в 1:100.если агглют-я с несколькими то возбудитель тот где агглют-я с большим разведением.если агг-я с одинаковыми титрами, тонужна р-я адсорбции аглюининов по методу Кастеллани. Для дифферинциации прививочного и анамнестического прибегают к повторной постановке через 5-6 дней, если болен-то кол-во Ат увеличится, если нет останется прежним. Вассерман –сифилис, сыв больного(Ат)+известный Аг(липоидные экстракты из ор-в животных)+комплемент + гемолит сыв+эр барана+физ раствор. Неспецичич Аг-вытяжки из органов, неспецифич Аг-из больного органа. Если нет гемолиза то,,+,, и чем больше плюсов тем боьше вероятность болезни.