ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ
ТЕМА: ГЕМОГЛОБИН, ЦВЕТОВОЙ ПОКАЗАТЕЛЬ
ЦЕЛЬ: Определить количество гемоглобина с помощью гемометра Сали. Рассчитать цветовой показатель.
ХОД РАБОТЫ:
Гемометр Сали представляет собой стойку с тремя гнездами, в два крайних гнезда вставлены запаянные пробирки со стандартной цветной жидкостью, в среднее гнездо вставлена градуированная пробирка для испытуемой крови. Цифры деления шкалы выражают количество НВ и %. К гемометру прилагается капиллярная система на 0,02 мл крови, пипетка для воды, стеклянная палочка.
Градуированная пробирка заполняется до нижней кольцевой отметки 0,2 н раствором НС1. В капиллярную пипетку набирают 0,02 мл крови из пальца. Кончик пипетки опускают на дно пробирки с раствором НС1 и выдуваем кровь так, чтобы верхний слой НС1 остался неокрашенным. Не вынимая пипетки споласкивают ее соляной кислотой. Содержимое перемешать и оставить стоять на 5-6 мин, пока идет образование соляно - кислого гематина. Затем к раствору добавляют по каплям диет, воду до тех пор, пока цвет испытуемого раствора не совпадает со стандартным. Цифра, стоящая на уровне полученного раствора показывает содержание НВ в испытуемой крови.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦВЕТОВОГО ПОКАЗАТЕЛЯ
Соотношение между количеством НВ и числом эритроцитов носит название цветового показателя. Он позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Высчитывают его по формуле:
Ц.П.= Найденное кол-во НВ х Найденное число эритроцитов
Нормальное кол-во Нв х Нормальное число эритроцитов
Упрощенный метод:
Формула определения Ц.П. = Кол-во НВ г% х 3
АВ
АВ -первые три цифры числа эритроцитов (например 4,2x1012 => 420). В норме Ц.П. колеблется от 0,85 до 1,1. Если Ц.П. выше 1,1 гиперхромия, ниже 0,8 - гипохромия.
ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ
ТЕМА: ФИЗИОЛОГИЯ ЭРИТРОЦИТОВ
ЦЕЛЬ: Подсчитать количество эритроцитов в периферической крови пробирочным методом.
ХОД РАБОТЫ:
Перед началом в тетрадях для протоколов начертить счетную сетку камеры Горяева, состоящей из 15 х 15=225 больших квадратов, 25 из которых поделены на 16 малых.
В пробирку точно отмеряют 4 мл 3% р-ра NaСl. Кровь для анализа забирают из пальца левой руки, предварительно обработанного спиртом. Укол нужно делать сбоку пальца, где капиллярная сеть гуще, на глубину 3 мм. Забор крови осуществляется капиллярной пипеткой Сали, промытой 3% раствором NаСl. Кровь взять до круговой отметки капилляра (0,02 мл) и осторожно продуть в пробирку с разводящей жидкостью, промывая последней пипетку. Пробирку закрыть большим пальцем и перевернуть, перемешивая таким образом содержимое пробирки. Получили разведение крови 1:200. Подсчет эритроцитов ведется в счетной камере Горяева. Перед заполнением камеры необходимо ее и покровное стекло притереть к камере так, чтобы появились радужные кольца по краям покровного стекла.
Разбавленную кровь встряхнуть несколько раз. Концом стеклянной
палочки взять из пробирки взвешенную каплю крови и опустить у края
покровного стекла со стороны счетной камеры. После заполнения
оставить камеру в покое на 1 минуту для оседания эритроцитов.
Эритроциты считать под большим увеличением в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (5x16) = 80, расположенных по диагонали. Счету подлежат те эритроциты, которые находятся внутри квадрата и на верхней и на левой его границах. Результаты подсчета заносят в тетрадь на предварительно начерченную сетку. Вычисление количества форменных элементов в 1 мм кубическом производят по следующей формуле:
Х= А х 4000 х Б
С
Где х - кол-во эритроцитов в 1 мм кубическом,
А - кол-во эритроцитов в 80 малых квадратах,
Б - степень разведения (1:200),
С - кол-во малых квадратов (80), 1/4000 - объем малого квадрата.
Чтобы получить количество эритроцитов в 1 литре нужно полученную цифру умножить на 1 000 000 (1 мм3 = 1 мкл., в 1 л - 10 000 000 мкл).
ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ
ТЕМА: СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ
ЦЕЛЬ: Определение скорости оседания эритроцитов ХОД РАБОТЫ:
При стоянии стабилизированной крови эритроциты в силу своей тяжести оседают. При некоторых физиологических состояниях и при целом ряде заболеваний оседание эритроцитов бывает значительно ускоренным.
Для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) применяется прибор Панченкова, состоящий из штатива, в котором могут быть фиксированы в вертикальном положении специальные капилляры, градуированные в мм. Метка 0 стоит на расстоянии 100 мм от конца. На этом же уровне находится метка К.
Капилляр промывают раствором цитрата натрия, затем набирают 25 мм этого раствора и выдувают в пробирку. В тот же капилляр набирают кровь до метки К и выдувают в приготовленную пробирку с цитратом натрия. Хорошо смешивают, насасывают в капилляр до метки К-О, ставят в штатив и засекают время. Полученное соотношение крови и цитрата натрия 1:4.
Через час отсчитывают по делениям на капиллярной пипетке величину отстоявшегося столбика плазмы.
В норме скорость оседания эритроцитов равна:
у женщин – 8-15 мм/ч
у мужчин – 6-12 мм/ч
у новорожденных - до 2 мм/час.
ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ
ТЕМА: ГРУППЫКРОВИ
ЦЕЛЬ: 1. Определить группу крови.
2. Провести пробу на индивидуальную совместимость.
ХОД РАБОТЫ: МЕТОД СЫВОРОТОК
На планшет для определения группы крови в 4 углубления нанести по капле сыворотки I, II, III, IV групп крови. Делают прокол пальца и стеклянной палочкой в каждую каплю сыворотки вносят небольшую каплю крови, каждый раз, тщательно протирая палочку. Крови должно быть в 3-4 раза меньше, чем сыворотки.
Кровь и сыворотку размешивают до равномерного окрашивания смеси. Через 5-7 минут при наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в комочки и крупинки.
В зависимости от того, с какими сыворотками агглютинирует кровь, различают группы крови:
I- агглютинация отсутствует,
II - агглютинация происходит с сыворотками из I и III групп,
III- агглютинация происходи с сыворотками из I и II групп,
IV- агглютинация происходит с сыворотками из I, II и III групп.
МЕТОД ЦОЛИКЛОНОВ
В настоящее время для определения групп крови пользуются моноклональными антителами против агглютиногенов А и В, получивших название цоликлоны. Обычно раствор цоликлонов анти-А окрашен в розовый цвет, а анти-В в голубой. Порядок определения группы крови тот же, как и при методе сывороток, только при проведении анализа растворы цоликлонов добавляются в две лунки. Результаты считывают в течение 3-х мин.
При этом если агглютинация не происходит, то группа крови I. Если агглютинация происходит с обеими цоликлонами (анти-А и анти-В), то группа крови IV. Если агглютинация выявляется с моноклональными антителами против агглютиногена А, то это II группа крови. При наличии агглютинации с цоликлоном анит-В группа крови III. Определите группу крови, зарисуйте полученные данные. Объясните их.
Поместите в лунку планшета каплю цитрата натрия, а в нее внесите по капле крови от 2-х испытуемых. Тщательно перемешайте. Проследите, наступит ли реакция агглютинации, объясните полученные данные.
ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ
ТЕМА: СОСТАВ, КОЛИЧЕСТВО И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
КРОВИ
ЦЕПЬ: Определить границы осмотической стойкости эритроцитов и вязкость крови.
ХОД РАБОТЫ.
Известно, что в гипотонических растворах эритроциты набухают и лопаются, в результате чего гемоглобин выходит в окружающую среду. Это явление называется гемолизом. В крови человека имеются эритроциты, обладающие различной устойчивостью к действию гипотонических растворов. Необходимо определить максимальную концентрацию хлористого натрия, при которой начинается (минимальная осмотическая стойкость) и заканчивается (максимальная осмотическая стойкость) гемолиз. С этой целью из рабочего (1%) раствора хлорида натрия готовится серия разведений по следующей схеме:
| Вода (мл) | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,55 | 0,6 | 0,62 | 0,65 | 0,7 |
| 1%р-р NаСl (мл) | 0,9 | 0,3 | 0,7 | 0,6 | 0,5 | 0,45 | 0,4 | 0,38 | 0,35 | 0,3 |
| Полученная концентрация (%) | 0,9 | 0,8 | 0,7 | 0,6 | 0,5 | 0,45 | 0,4 | 0,33 | 0,35 | 0,3 |
В каждую пробирку вносится по капле крови, которую тотчас же перемешивают с раствором и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10 мин. Для здоровых людей верхняя (минимальная) граница осмотической стойкости соответствует 0,42-0,48% NаСl. При этом разрушаются наименее устойчивые к осмотическому давлению эритроциты. Полный же гемолиз (максимальная граница стойкости) происходит при 0,30-0,34% NаСl. Определите минимальную и максимальную границу стойкости эритроцитов. Проанализируйте полученные данные и сделайте выводы.
2. Определение вязкости крови
На фильтровальную бумагу наносят капилляром Панченкова равные по объему капли дистиллированная воды и крови и следят за тем, насколько обе капли растекутся по бумаге. Сравниваются диаметры пятна капли воды и капли крови. В норме диаметр водяного пятна в 4-5 раз больше пятна от капли крови (вязкость крови у здоровых людей равна 4-5). Вязкость увеличивается при полицитемии, отравлении некоторыми газами, после больших ожогов. Уменьшается при анемии.
ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ