Задание № 1. Определение групп крови у человека по стандартным сывороткам.

Для определения групп крови используются стандартные сыворот­ки I, II, III иIV группы.

Порядок определения следующий: на четыре предметных стекла наносятся по одной большой капле (величина с 10-копеечную монету) стандартные сыворотки и смешивают её с небольшой каплей крови испытуемого. Для смешивания сыворотки с кровью можно воспользоваться различными уголками предметного стекла. Реакция агглютинации читается через 5 минут. По истечении пяти минут рекомендуется в каждую каплю смеси добавить и смешать по одной капле физиологического раствора.Физиологический раствор усиливает истинную и устраняет ложную агглюти­нацию.

ХОД ОПЫТА

	αβ β α - - -		Агглютинация везде отсутствует - кровь I группы (0)
		αβ β α + + +		Агглютинация присутствует везде - кровь IV группы

Итак, по стандартным сывороткам, т.е. по заранее известным агглю­тининам (α и β) определяют неизвестные агглютиногены (А и В), т.е. группы крови. При переливании крови у донора учитываются агглютиногены (эритроциты), а у реципиента - агглютинины (плазма). Агглютинины донора не учитываются потому, что они инактивируются высоким разведением плазмы реципиента.

РЕАКЦИЯ НА СОВМЕСТИМОСТЬ

Сущность реакции состоит в том, что смешиваются эритроциты донора с плазмой реципиента. Если в этом случае эритроциты до­нора не склеиваются плазмой реципиента, то кровь донора совмес­тима с кровью реципиента.

Существуют различные методы определения совместимости крови донора и реципиента (капельные, пробирочные методы).

Задание № 2. Проба Клемансо (капельный метод).

Ход работы. На предметное стекло наносится одна капля цитрата, затем, прибавляется одна большая капля крови реципиента и 2-3 капли хлоро­форма (для разрушения эритроцитов реципиента). После испарения хлороформа прибавляется небольшая капля крови донора. Реакция читается через 8-10 минут,

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОБА

Сущность биологической пробы сводится к тому, что кровь, пред­назначенную для целей переливания реципиенту, вводят не всю сразу, а дробными частями в кровеносное русло. После введения первой небольшой порции за реципиентом наблюдают, если его состояние резко ухудшается – это значит, что кровь несовместима.

Задание № 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АГЛЮТИНАЦИОННОГО ТИТРА СЫВОРОТКИ

АГГЛЮТИНАЦИОННЫМ ТИТРОМ СЫВОРОТКИ называется пре­дельное разведение, при котором сыворотка сохраняет еще свою активность, т.е. способна вызвать склеивание эритроцитов в случае несовместимости группы. ТИТР - это агглютинационная сила сыворотки.

В норме у здорового человека агглютинационный титр сыворотки равен 1:10, 1:30, редко 1:64, как исключение - 1:24000 и выше. У лошадей чаще всего титр сыворотки 1:4 или 1:16, а у свиней и крупного рогатого скота еще ниже. У них при определении групп крови берется 1 часть крови и 2 части сыворотки (у людей 1 часть крови и 10 частей сыворотки).

Ход работы. На 7 предметных стекол наносят по равной капле физиологи­ческого раствора (пипеткой от аппарата Панченко набирают до ме­тки «Р»). К первой капле физиологического раствора на первом предметном стекле, добавляют той же пипеткой такую же каплю испытуемой сыворотки, тщательно размешивают, затем одну каплю смеси переносят в каплю на втором предметном стекле, перемешивают и переносят на следующее предметное стекло и т.д. С последнего предметного стекла одну каплю удаляют. Таким образом, получаем сыворотку с разведением: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32. 1:64.

К каждой капле полученного разведения сыворотки добавляют по одной капле (маленькой) крови из пальца руки или одну каплю 10% эмульсии неотмытых эритроцитов в физиологическом растворе размешивают все капли углом предметного стекла (для каждой капли разный угол предметного стекла) и, покачивая стекло, наб­людают реакцию в течение 8 минут. Устанавливают предельное разведение сыворотки, при котором наступила агглютинация, что и будет являться агглютинационным титром испытуемой сыворотки.

ПРИМЕЧАНИЕ: 10% эмульсия неотмытых эритроцитов в физиоло­гическом растворе готовится так: в меланжер с меткой "II" (для лейкоцитов) до метки "1" набирают кровь, до метки "II" - физиологический раствор.