Реакция Видаля
Приготовить 2 ряда разведений исследуемой сыворотки в объёме 1мл (1:100, 1:200, 1:400, 1:800). В пробирки 1-го ряда внести 2-3 капли О-диагностикума, в пробирки 2-го ряда – Н-диагностикума, встряхнуть пробирки и инкубировать в термостате.
Реакцию Видаля нельзя считать основным диагностическим методом, т.к. существуют случаи ложноположительных результатов:
1. В случае ранее перенесенного заболевания (анамнестический Видаль).
2. В случае ранее проведенной вакцинации (прививочный Видаль).
3. В случае проживания пациента в эндемическом по брюшному тифу и паратифам регионе (эндемический Видаль).
4. При лихорадочных состояниях, беременности (неспецифический Видаль).
Плазмокоагулаза
Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5.
Проба Шика
Для оценки уровня противодифтерийного иммунитета применяется проба Шика: внутрикожно детям вводят 1/40 Dlm токсина для морской свинки в V=0,2 мл. При отсутствии антитоксического иммунитета через 24-48 ч на месте введения появляется краснота и припухлость d > 1 см.
Определение токсигенности C.diphtheriae
Метод преципитации в геле: полоску стерильной фильтровальной бумаги размером 1,5 х 8 см смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 500 АЕ в 1 мл, и наносят на поверхность питательной среды в чашке Петри. Чашку подсушивают в термостате 15—20 мин. Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от бумажки. На одну чашку засевают несколько штаммов, один из которых, заведомо токсигенный, служит контролем. Чашки с посевами инкубируют при 37°С, результаты учитывают через 24—48 ч. Вследствие встречной диффузии в геле антитоксина и токсина в месте их взаимодействия образуется четкая линия преципитации, которая сливается с линией преципитации контрольного токсигенного штамма. Полоски неспецифической преципитации (они образуются, если в сыворотке кроме антитоксина присутствуют в небольшом количестве другие антимикробные антитела) появляются поздно, выражены слабо и никогда не сливаются с полоской преципитации контрольного штамма.
Ускоренная реакция на стекле (качественная) – реакция Хеддльсона:
На обезжиренное сухое стекло (9х12) на расстоянии 3-4 см друг от друга наносят исследуемую сыворотку в дозах 0,04; 0,02; 0,01 мл (опытные капли) и 0,02 мл (контр. капля). К трём первым каплям сыворотки добавляют по 0,03 мл бруцеллёзного диагностикума (Аг), к последней – 0,03 мл физ. раствора. Готовят контроль Аг – 0,03 мл Аг и 0.03 мл физ. раствора. Сыворотку и Аг смешивают стеклянной палочкой и подогревают над пламенем спиртовки. В положительном случае не позднее 8 минут появляются хлопья. Диагностическое значение имеет наличие агглютинации в дозах сыворотки 0,02-0,01 мл.
Развёрнутая реакция агглютинации (количественная) – реакция Райта:
Проводится в пробирках в V 1 мл с разведениями сыворотки 1:50; 1:100; 1:200; 1:400; 1:800 и единым бруцеллёзным диагностикумом. Пробирки встряхивают и инкубируют при 370С в течение 24 ч. Реакция положительная, если агглютинация происходит в пробирках, начиная с разведения 1:100
Аллергическая диагностика бруцеллёза (проба Бюрне)
Вводят бруцеллин (фильтрат 3-дневной убитой нагреванием бульонной культуры бруцелл) внутрь кожи ладонной поверхности предплечья. При положительной реакции на месте пробы появляется папула через 1-3 суток размером 6-7 мм.
Принцип определения сероварианта С.botulinum
С.botulinum образует 8 типов токсинов, которые различаются по своей антигенной структуре. Для выявления типа токсина проводят реакцию нейтрализации на мышах. Смешивают сыворотку больного с антитоксическими сыворотками различных типов и через 40-45 минут вводят мышам. При совпадении типа токсина и антитоксина происходит реакция нейтрализации и животное не погибает. Зная тип токсина, можно использовать для специфической терапии моновалентную сыворотку.