· Метод Цейсслера. Исследуемый материал сеют штрихами по поверхности плотной среды. Создают анаэробные условия. И инкубируют при 37 градусах 24-72ч. Изолированные колонии анаэробов пересевают на среду контроля стерильности или среду Китта-Тароцци.
· Метод Вейнберга. Несколько капель исследуемого материал вносят в пробирку с 4-5мл изотонического раствора. Перемешивают запаянным капилляром переносят в пробирку с охлажденным до 45-50 градусов сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. После перемешивания этим же капилляром засевают еще две пробирки с сахарным агаром и быстро охлаждают под струей воды. Выросшие в глубине колонии пересевают на СКС или среду Китта-Тароцци.
· Метод Перетца. Готовят разведение материала, как указано выше. Содержимое пробирки с соответствующим разведением выливают в чашку Петри, на дне которой на двух палочках лежит стеклянная пластина 6х6см. среду заливают так, что бы она заполнила пространство между пластиной и дном чашки. При появлении роста пластинку поднимают и чистые колонии пересевают.
Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:
1. Механическим разобщением бактериальных клеток;
2. Действии физических и химических факторов, оказывающих избирательное действие;
3. Способности некоторых бактерий размножаться в организме.
Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).
2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.
II этап.
1. Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции колонии.
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму).
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным ога-ром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признакам клетки). Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам фагочувствительности токсигенности и другим признакам
В практике находят применение следующие физические методы стерилизации.
1. Стерилизация сухим жаром. Стерилизуемый объект нагревают в сушильном шкафу при температуре 180 °С в течение-20-60 мин или при 200 °С в течение 10-30 мин. Сухим жаром стерилизуют стеклянную и фарфоровую посуду, жиры, вазелин, глицерин, термоустойчивые порошки (каолин, стрептоцид, тальк, кальция сульфат, цинка окись и др.).
В сушильных шкафах нельзя стерилизовать водные растворы в склянках, так как вода при высоких температурах превращается в пар и склянка может быть разорвана.
2. Стерилизация влажным жаром. При использовании этого способа стерилизации комбинируются воздействие высокой температуры и влажности. Если сухой жар вызывает главным образом пирогенетическое разрушение микроорганизмов, то влажный жар — коагуляцию белка, требующую участия воды.
На практике стерилизацию влажным жаром производят при температуре 50-150 °С и осуществляют следующими способами.
Кипячение. Этим способом стерилизуют резиновые предметы, хирургический инструментарий, стеклянную посуду. Применять кипячение для стерилизации инъекционных растворов не рекомендуется, так как по эффективности оно значительно уступает стерилизации паром.
Стерилизация текучим паром. Текучим называете» насыщенный водяной пар (без примеси воздуха), имеющий давление 760 мм рт. ст. и температуру 100 °С. Стерилизацию текучим паром осуществляют в паровом стерилизаторе или автоклаве при 100 °С в течение 30-60 мин в зависимости от объема раствора. Это один из распространенных методов стерилизации инъекционных растворов в аптеках.
Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Осуществляется в автоклавах разной конструкции.. Автоклав представляет собой герметически закрывающийся сосуд, состоящий из толстостенной стерилизационной камеры и кожуха (рис. 36). На автоклаве имеются предохранительный клапан, обеспечивающий выход пара при избыточном давлении, и манометр. При каждом автоклаве должны быть инструкция по его эксплуатации и уходу, а также паспорт котлонадзора.
Стерилизуемый объект помещают внутрь паровой камеры. Водяную камеру подвергают нагреванию. Вначале автоклав нагревают при открытом кране до тех пор, пока пар не пойдет сильной сплошной струей и не вытеснит находящийся в автоклаве воздух, который значительно снижает теплопроводность водяного пара (при содержании в водяном паре 5% воздуха она уменьшается на 50 %)
3. Дробная стерилизация. При дробной стерилизации объект (обычно водный раствор) нагревают текучим паром при 100 °С в течение 30 мин, затем раствор выдерживают при комнатной температуре 24 ч, после чего снова стерилизуют в тех же условиях (30 мин при 100 °С). Описанный цикл повторяют 3- 5 раз. При первом нагревании погибают вегетативные формы микроорганизмов, при последующих — вновь появившиеся вегетативные формы. Вследствие длительности этот способ в аптеках применяется редко.
4. Пастеризация — однократное нагревание объекта при температуре 60 °С в течение 1 ч или при температуре 70-80 °С в течение 30 мин. Позволяет уничтожить вегетативные формы микробов (кроме термофильных), но не споры.
5. Тиндализация (дробная пастеризация). При тиндализации объект нагревают при температуре 60-65 °С по 1 ч ежедневно-в течение 5 дней или при 70-80 °С в течение 3 дней. Это надежный и бережный способ стерилизации термолабильных: лекарственных веществ. Однако вследствие длительности он мало пригоден для аптек и в последних почти не используется.