Выполнил студент 3 курса 4 группы
Лечебного факультета
Майорова Маргарита
Волгоград – 2018
Содержание.
Введение………………………………………………………………….…3
Прямые методы диагностики………………………………………….…..5
Заключение…………………………………………………………….….12
Используемая литература………………………………………………...13
Введение.
Инфекционно-воспалительные заболевания урогенитального тракта являются одной из основных причин снижения качества жизни и нарушения репродуктивной функции человека. Из многообразия микроорганизмов, способных вызывать такие заболевания, доказана роль Treponemapallidum, Neisseriagonorrhoeae, Chlamydiatrachomatis, Trichomonasvaginalis, относящихся к группе возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (ИППП). В последние годы накопилось большое количество данных, свидетельствующих о самостоятельной этиологической роли Mycoplasmagenitalium. Особую проблему представляет генитальный герпес, рост которого отмечается в последнее десятилетие и роль которого в формировании патологии, в т. ч. врожденной, значительно возросла. Наряду с этим, в связи с ростом рака шейки матки внимание специалистов привлекает папилломавирусная инфекция (возбудитель – Humanpapillomavirus).
Лабораторные методы играют важную роль в диагностике урогенитальных инфекций, а при организации скрининга на сифилис – решающую роль.
Методы лабораторной диагностики подразделяют на две основные группы:
· прямые методы, направленные на выявление возбудителя (бактериоскопический, вирусологический или бактериологический метод), его антигенов (иммунофлюоресцентный метод) или генетический материал (ДНК) (полимеразная цепная реакция – ПЦР);
· непрямые (серологические) методы, направленные на выявление антител в сыворотке крови, плазме, спинномозговой жидкости, а также в другом биологическом материале (в моче, перитонеальной жидкости, околоплодных водах и др.). Из группы серологических реакций чаще используется иммуноферментный анализ – ИФА, который имеет достаточно высокую специфичность и чувствительность. Его применяют для скрининговых исследований (с целью выделения групп высокого риска заболевания) и диагностических исследований (с целью подтверждения диагноза, установления фазы инфекционного процесса), а также для оценки эффективности терапии.
· реже используются реакция прямой (РИФ, ПИФ) и непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) и латекс-агглютинация, однако эти методы достаточно информативны и доступны для многих лабораторий. Перспективно использование тест-систем на основе биочипов, позволяющих проводить оперативную и комплексную диагностику заболеваний.
с правильностью взятия биоматериала на долабораторном этапе. Именно на этом этапе выявляется самое большое количество ошибок.
Прямые методы диагностики.
Микроскопические (бактериоскопические) исследования
Цель исследования: оценка наличия и степени выраженности воспалительной реакции, постановка предварительного диагноза, выявление возбудителя инфекции.
При взятии биоматериала следует использовать одноразовый инструментарий и предметные стекла (лучше – однократного применения, например, готовые к применению тонкие обезжиренные стекла компании «HeinzHerenz»). При взятии биоматериала следует использовать одноразовые стерильные зонды-тампоны промышленного производства с волокнистой головкой (индивидуально упакованные), отдавая предпочтение изделиям, качество которых подтверждено наличием сертификата М-40 и т. п. Также взятие материала можно проводить с помощью желобоватового зонда или маленькой ложечкой. Минимальная схема обследования женщины должна включать бактериоскопическое исследование мазков из трех биотопов:
· уретра (диагностика инфекций, передаваемых половым путем);
· задний свод влагалища (оценка состояния влагалищного биоценоза, диагностика вагинозов и вагинитов);
· цервикальный канал (диагностика инфекций, передаваемых половым путем).
Наиболее часто объектом исследования является материал из влагалища и цервикального канала.
Бактериологические исследования
Цель исследования: исследование на микрофлору для установления биотопа, выявление дисбиоза (вагиноза), возбудителя инфекции, определение чувствительности к антибиотикам и антимикотикам, контроль эффективности терапии.
Перед взятием материала после обработки половых органов теплой водой или изотоническим раствором удаляют свободно стекающие выделения. При взятии биоматериала для его качественного отбора и минимальной травматизации слизистой следует использовать одноразовые стерильные зонды-тампоны с волокнистой головкой индивидуально упакованные или в пробирке (тубсеры). Зонд-тампон помещают в транспортную среду. Оптимальной для бактериологического посева на микрофлору является среда Эймс или Стюарт. Если планируется посев с целью выделения гонококков, оптимально использовать транспортную среду Эймс с активированным углем, а в случае ее отсутствия – дакроновые тампоны, тампоны с альгинатом кальция либо ватные тампоны, импегрированные углем, поскольку хлопковая вата может быть токсичной для этих микроорганизмов. При использовании систем со средой Эймс с активированным углем материал должен быть доставлен в лабораторию в течение 48 ч, а при использовании иных транспортных сред – в течение 12 ч; не допускается его охлаждение до температуры ниже 30 °С. Для определения микоплазм биоматериал оптимально забирать в специальные жидкие транспортные среды. Хранение биоматериала не более 48 ч при температуре 4–8 °С.
Учитывая возможность ассоциаций условно-патогенных микроорганизмов, целесообразно использовать инновационные бактериологические методы с быстрым получением результата (в течение 48 ч), позволяющие определять широкий ряд возбудителей и их чувствительность к наиболее распространенным антибактериальным препаратам. Например, широко используемая в России комплексная система «AF Genitalsystem» производства компании «Liofilchem» (Италия) позволяет одновременно обнаружить в урогенитальном образце 12 потенциальных патогенов: Ureaplasmaurealyticum(полуколичественное определение), Mycoplasmahominis, Trichomonasvaginalis, Escherichiacoli, Proteus, Pseudomonas, Gardnerellavaginalis, Staphylococcusaureus, Streptococcusfaecalis, Neisseriagonorrheae, Streptococcusagalactiae, Candida. Эта система может быть использована и для посева околоплодных вод.
Комплексное использование подобной системы наряду с ПЦР-диагностикой (для выделения ДНК труднокультивируемых внутриклеточных паразитов – Chl. trachomatis, M. genitalium, Herpessimplexvirus, Humanpapillomavirus) позволяет оптимизировать диагностику заболеваний урогенитального тракта и значительно сокращает время анализа.
ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций (мазки, соскобы)
Цель исследования: выделениеДНК возбудителей урогенитальных инфекций (в качественном и количественном варианте), контроль эффективности терапии.
Используется для выделения ДНК прежде всего внутриклеточных патогенов (Chl. trachomatis, M. genitalium, Herpessimplexvirus, Humanpapillomavirus).
Перед взятием материала после обработки половых органов теплой водой или изотоническим раствором удаляют свободно стекающие выделения и удаляют слизь. Взятие материала следует проводить с помощью специальных цитощеток, желобоватового зонда или маленькой ложечкой Фолькмана и помещают в микропробирку с физиологическим раствором, лизирующим буфером. При этом зонд несколько раз вращают в пробирке для снятия материала с его поверхности. Срок хранения материала при температуре 2–4 °С не более 48 ч, при минус 18–20 °С – до 1 мес. Транспортировка осуществляется в сумках-холодильниках (желательно с пенополиэтиленовымтермоизолятором и полужесткими моющимися стенками), термоконтейнерах, термосах с термопакетами (мягкими гелевыми аккумуляторами холода), льдом или сухим льдом.
Диагностическая ценность ПЦР-исследования повышается при сочетании с серологическими методами.
Преимуществами ПЦР-исследования являются:
- высокая чувствительность метода;
- выявление персистирующих, латентных и рецидивирующих форм инфекций;
- возможность исследования биологического материала на наличие ДНК одного или нескольких возбудителей;
- ранняя диагностика инфекционных заболеваний;
- возможность количественной оценки результатов исследования в режиме «реального времени» («Real-Time»);
- возможность генотипирования (вирусы папилломы человека высокого риска);
- уточнение сомнительных результатов серологических исследований;
контроль эффективности терапии;
- эпидемиологические исследования;
- определение резистентности к лекарственным препаратам.
ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций (кровь)
Показания к проведению исследования: диагностика сифилиса, герпеса.
Цель исследования: выявление ДНК возбудителя для установления активности инфекционного процесса.
Цельную венозную кровь следует забирать в пробирку с ЭДТА (пробирка маркирована сиреневой крышкой).
Забирать кровь в пробирку с гепарином нельзя (гепарин ингибирует реакцию).
Содержимое пробирки перемешивают вращательными, покачивающими и переворачивающими движениями, избегая образования пены. Пробы следует доставить в лабораторию в течение 2 ч с момента взятия. Пробирки с кровью можно хранить при температуре 4–8 °С в течение 48 ч. Не замораживать!
Серологические исследования (РПГА, ИФА, иммуноблот)
Показания к проведению исследования: скрининг и диагностика сифилиса, урогенитального хламидиоза, герпеса
Цель исследования: выявление специфических антител.
1. Для взятия венозной крови следует использовать одноразовые замкнутые вакуумные системы, которые состоят из двусторонней иглы, закрытой защитными колпачками, держателя и стерильных одноразовых пробирок с дозированным содержанием вакуума и различными реактивами–наполнителями.
2. Для взятия крови из труднодоступных мест и из «проблемных» вен используются «иглы-бабочки» с забором крови в пластиковые пробирки.
3. Для взятия капиллярной крови применяют ланцеты скарификаторы - копье или безопасные стерильные одноразовые пластиковые ланцеты по типу «Vitrex».
Специальной подготовкине требуется, однако накануне следует исключить прием жирной пищи. Забор крови проводится натощак или через 2 ч после приема пищи (можно проводить в течение дня).
Для серологических исследований цельную венозную кровь из вены (обычно в объеме 3–5 мл) следует забрать в пробирку, предназначенную для получения сыворотки (пробирка с красной или желтой крышкой). Возможно исследование плазмы в случае забора крови в пробирку с ЭДТА (с сиреневой крышкой) либо с гепарином (с зеленой крышкой). Кровь рекомендуют перемешивать во всех типах пробирок. Пробы следует доставить в лабораторию в течение одного рабочего дня, хранить не более 3 сут при температуре 4–8 °С. В случае необходимости замораживания или длительной транспортировки в лабораторию сыворотку либо плазму следует слить в пробирку типа Эппендорф, либо использовать для забора крови пробирку с разделительным гелем с последующим центрифугированием.
В основе метода лежит образование комплекса антиген–антитело на твердой фазе полистирольных планшет и дальнейшая трансформация ферментной метки в соответствующий сигнал, регистрируемый с помощью спектрофотометра.
Основные преимущества метода:
- высокая чувствительность и специфичность;
- возможность одновременного исследования большого количества проб;
выявление суммарных антител (например, при сифилисе) и антител различных классов:IgМ, IgА, IgG;
- позволяет исследовать сыворотку (плазму) крови и ликвор (например, диагностика нейросифилиса);
- объективная оценка результатов с помощью спектрофотометра, простота постановки и возможность внутреннего контроля при каждой постановки.
Причины ложноположительных реакций следует разделить на следующие группы:
- ошибки на преаналитическом этапе, связанные с нарушением правил взятия биоматериала, гемолиз, бактериальное обсеменение крови или сыворотки (имеет место в случае нарушения температурного режима при хранении или транспортировки) пробирок с биоматериалом;
- ошибки на аналитическом этапе при нарушении технологического процесса, повторном использовании расходных материалов (наконечников, пробирок типа Эппендорф и иммунологических планшетов для разведения образцов), предназначенных для однократного применения; ряд ошибок связано с низким качеством тест-систем и квалификацией персонала;
- ошибки на постаналитическом этапе (зависят от компетенций персонала).
Особо следует выделить причины ложноположительных результатов, не зависящие от сотрудников лаборатории. Наиболее часто ложноположительный или сомнительный результат при сифилисе и хламидиозе встречается при определении специфических антител класса IgМ и может быть обусловлен наличием ревматоидного фактора, гиперпродукцией IgM при беременности, перекрестной реакцией с антигенами других возбудителей, аутоиммунным процессом, нарушением обмена веществ, липидемией и др. В данном случае использование ряда лабораторных приемов позволяют получить достоверный результат анализа. К ним следует отнести: удаление ревматоидного фактора из сыворотки с помощью иммуносорбента, использование на первом этапе постановки или последующее тестирование образцов на высокоспецифичных тест-системах, обследование пациента в динамике либо применение в качестве подтверждающего теста иммуноблота (или лайн-блота), направленного на выявление антител именно класса IgM к отдельным антигенам возбудителя. Обнаружение ДНК возбудителя или появление антител других классов в результате переключение синтеза антител в динамике позволяют верифицировать диагноз.
При детекцииIgG-антител ложноположительный результат может быть связан с перекрестным реагированием антигенов (например, между цитомегаловирусом и вирусом простого герпеса; между различными видами хламидий: Chl. trachomatis, Chl. pneumoniae и Chl. psittaci) и напрямую зависящий от специфичности тест-систем. Для уточнения лабораторного диагноза и исключения ложноположительного результата следует применять иммуноблот, предназначенный для обнаружения IgG к отдельным высокоспецифичным белкам патогена.
Заключение.
Лабораторные методы играют важную роль в диагностике урогенитальных инфекций.
Особую значимость в получении достоверного результата имеет преаналитический этап. Для рациональной диагностики особое значение имеют: полнота сбора данных, оценка клинических данных, выбор адекватных методов исследования, процедура получения клинического материала, хранение и доставка образцов биоматериала в лабораторию.
На аналитическом этапе имеется прямая зависимость качества исследований от правильной организации работы, технической оснащенности, автоматизации процесса, компетенций персонала.
На постаналитическом этапе решающую роль приобретают компетенции специалистов лабораторной медицины в оценке результатов и взаимосвязь с врачами клинического профиля.
Используемая литература:
1. Рекомендации по ведению преаналитического этапа микробиологических лабораторных исследований / Под ред. А.Г. Бойцова. Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2008. 64 с.
2. Вагорас А., Савичева А., Гален А., Домейка М. основы микроскопии мазков мочеполового тракта. Каунас: Издательство студия «КАТА», 2011. 42 с.
3. Гомберг М., Ковалык В.П. Хламидиоз и простатиты // Инфекции, передаваемые половым путем. 2008. № 4. С. 3–9.
4. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. – Москва: Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2009. 336 с.
5. Долгих Т.И. Современная лаборатория: диагностический потенциал и мониторинг актуальных инфекционных заболеваний. Омск: 2010. 58 с.
6. Кишкун А.А. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2009. 712 с.
7. ПЦР «в реальном времени» / Под ред. Д.В. Ребрикова. М.: Бином. Лаборатория знаний, 2011. 223 с.
8. Савичева А. М., Соколовский Е.В., Домейка М. Краткое руководство по микроскопической диагностике инфекций, передаваемых половым путем. СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2007. 128 с.
9. Савичева А.М., Соколовская Е.В., Домейка М. Порядок проведения микроскопического исследования мазков из урогенитального тракта. СПб.: Изд-во Н.Л, 2007. 64 с.