Выращивание культуры водорослей
Водоросли выращивают в люминостате. Температура в люминостате должна поддерживаться в пределах от +22 °С до +25 °С, освещенность - 3000 - 10000 лк, световой период - 24 ч. В течение суток культуру водорослей 1 - 2 раза встряхивают.
Таблица Б.1 - Состав питательных сред для культивирования водорослей
Компоненты среды | Концентрация | |||
Успенского № 1 | Прата | |||
в среде для культивирования, г/дм3 | концентрированные растворы для приготовления среды, г/100 см3 | в среде для культивирования, г/дм3 | концентрированные растворы для приготовления среды, г/100 см3 | |
KNO3 | 0,025 | 2,5 | 0,10 | 10,0 |
MgSO4×7Н2O | 0,025 | 2,5 | 0,01 | 1,0 |
Ca(NO3)2×4H2O | 0,144 | 14,4 | - | |
K2HPO4×3H2O | - | - | 0,01 | 1,0 |
КН2РO4×3Н2O | 0,025 | 2,5 | ||
К2СO3 | 0,0345 | 3,45 | - | |
FeCI3×6H2O | - | 0,001 | 0,1 |
Питательные растворы готовят на дистиллированной воде (допускается приготовление питательной среды для водорослей на бидистиллированной воде, при этом нельзя пользоваться аппаратами с ионообменными смолами).
Чтобы избежать образования осадка в питательной среде, каждый ее компонент предварительно готовят в концентрированном виде отдельно в 100 см3 дистиллированной воды. Полученные растворы концентрированных солей кипятят каждый по 30 мин, охлаждают, после чего их используют для приготовления среды в течение месяца при условии хранения при температуре от +2 °С до +4 °С. Каждый сосуд с питательными веществами должен быть подписан с указанием состава, концентрации, времени приготовления и плотно закрыт притертой пробкой во избежание высыхания и концентрирования.
Для приготовления среды для культивирования водорослей добавляют по 1 см3 каждого концентрированного раствора (кроме солей железа) в колбу вместимостью 1 дм3, заполненную до половины дистиллированной водой (рН 7,0 - 7,5), поочередно, в последовательности как указано в таблице Б.1, доводят до метки 1 дм3 дистиллированной водой, тщательно перемешивают, кипятят раствор 30 мин, охлаждают и после этого добавляют 1 см3 концентрированного раствора соли железа и отдельно приготовленные растворы микроэлементов*.
|
* Растворы А и В готовят отдельно, раствор А (Н3ВO3 - 2,86 г/дм3, MnCI2×4Н2O - 1,81 г/дм3, ZnSO4×7H2O - 0,222 г/дм3) и раствор В (МоO3 - 17,64 мг/дм3, NH4VO3 - 22,96 мг/дм3). Затем отдельно стерилизуют каждый раствор 30 мин кипячением, охлаждают, плотно закрывают притертой пробкой и хранят в холодильнике при температуре от +2 до +4 °С до трех месяцев.
Растворы солей железа или микроэлементов можно добавлять во все среды независимо от того, указано это в прописи их состава или нет.
Для предупреждения выпадения в осадок железа и других микроэлементов дополнительно во все среды добавляют хелатирующее вещество, образующее с ионами металлов устойчивые комплексные соединения в форме, доступной для питания водорослей. С этой целью используют стерильный раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли (трилон Б) с массовой концентрацией 0,037 г/дм3. Раствор готовят в 100 см3 дистиллированной воды совместно с солью железа. Соли железа и трилона Б отдельно растворяют в 30 см3 дистиллированной воды, смешивают, доводят дистиллированной водой до 100 см3, кипятят 30 мин, охлаждают и добавляют в охлажденную среду для культивирования водорослей 1 см3 на 1 дм3 среды.
Например, для приготовления среды Успенского растворяют 2,5 г KNO3; 2,5 г MgSO4×7H2O, 14,4 г Ca(NO3)2×4H2O, 2,5 г КН2РO4×3Н2O и 3,45 г К2СO3 в 100 см3 дистиллированной воды в отдельных склянках каждой соли. Отдельно растворяют 3,7 г трилона Б и 0,3 г Fe2(SO4)3 в 100 см3 дистиллированной воды.
|
Все шесть склянок кипятят 10 - 15 мин, охлаждают и, соблюдая условия стерильности, (над пламенем горелки или спиртовки) переносят в колбу на 1 дм3 по 1 см3 из каждой склянки (кроме раствора железа и трилона Б) в 0,5 дм3 дистиллированной воды, смешивают, доводят до метки 1 дм3 дистиллированной водой. Полученную смесь кипятят 30 мин, охлаждают и добавляют после охлаждения 1 см3 смеси солей железа и трилона Б и по 1 см3 каждого раствора микроэлементов (А и В) на 1 дм3 среды. Готовые среды не хранят. Таким образом приготовленная среда Успенского используется для культивирования водорослей.
Приложение В
(рекомендуемое)
Регистрация результатов измерений (прямой счет водорослей)
Таблица В.1 - Пример записи в рабочем журнале результатов измерений методом прямого счета в камере Горяева
№ пробы | Время от начала биотестирования, сутки | Кратность разведения исследуемых вод и водных вытяжек, раз | № повторностей | Численность водорослей, тыс. кл./см3 | Ср. значение 2-х измерений, тыс. кл./см3 | Фактическая повторяемость для 2-х повторностей, % | Ср. значение по 2-м повторностям, тыс. кл./см3 | Значение погрешности измерений, тыс. кл./см3 | Конечный результат измерений, тыс. кл./см3 | Процентное отклонение от контроля, % |
Контроль | 409 439 | ** | *** | |||||||
497 531 | 19,2 | ±150 | 469 ± 150 | |||||||
149 161 | ||||||||||
117 125 | 24,6 | ±44 | 138 ± 44 | |||||||
179 185 | ||||||||||
234 256 | 29,5 | ±69 | 214 ± 69 | |||||||
296 324 | ||||||||||
244 274 | ±91 | 285 ± 91 | ||||||||
384 399 | ||||||||||
318 309 | ±113 | 353 ± 113 | ||||||||
432 468 | ||||||||||
398 418 | 9,8 | ±137 | 429 ± 137 |
* плотность водорослей в первый день эксперимента составляла в каждой колбе 27 тыс. кл./см3.
|
** вычислять по формуле (17) п. 10.1, результат сравнивать с r, %, п. 2, таблица 1.
*** вычислять по формуле п. 10.3, ± 0,01×d×
, d - границы относительной погрешности измерений, % (п. 2, таблица 1).