Регистрация результатов измерений (прямой счет водорослей)

Выращивание культуры водорослей

Водоросли выращивают в люминостате. Температура в люминостате должна поддерживаться в пределах от +22 °С до +25 °С, освещенность - 3000 - 10000 лк, световой период - 24 ч. В течение суток культуру водорослей 1 - 2 раза встряхивают.

Таблица Б.1 - Состав питательных сред для культивирования водорослей

Питательные растворы готовят на дистиллированной воде (допускается приготовление питательной среды для водорослей на бидистиллированной воде, при этом нельзя пользоваться аппаратами с ионообменными смолами).

Чтобы избежать образования осадка в питательной среде, каждый ее компонент предварительно готовят в концентрированном виде отдельно в 100 см³ дистиллированной воды. Полученные растворы концентрированных солей кипятят каждый по 30 мин, охлаждают, после чего их используют для приготовления среды в течение месяца при условии хранения при температуре от +2 °С до +4 °С. Каждый сосуд с питательными веществами должен быть подписан с указанием состава, концентрации, времени приготовления и плотно закрыт притертой пробкой во избежание высыхания и концентрирования.

Для приготовления среды для культивирования водорослей добавляют по 1 см³ каждого концентрированного раствора (кроме солей железа) в колбу вместимостью 1 дм³, заполненную до половины дистиллированной водой (рН 7,0 - 7,5), поочередно, в последовательности как указано в таблице Б.1, доводят до метки 1 дм³ дистиллированной водой, тщательно перемешивают, кипятят раствор 30 мин, охлаждают и после этого добавляют 1 см³ концентрированного раствора соли железа и отдельно приготовленные растворы микроэлементов^*.

^* Растворы А и В готовят отдельно, раствор А (Н₃ВO₃ - 2,86 г/дм³, MnCI₂×4Н₂O - 1,81 г/дм³, ZnSO₄×7H₂O - 0,222 г/дм³) и раствор В (МоO₃ - 17,64 мг/дм³, NH₄VO₃ - 22,96 мг/дм³). Затем отдельно стерилизуют каждый раствор 30 мин кипячением, охлаждают, плотно закрывают притертой пробкой и хранят в холодильнике при температуре от +2 до +4 °С до трех месяцев.

Растворы солей железа или микроэлементов можно добавлять во все среды независимо от того, указано это в прописи их состава или нет.

Для предупреждения выпадения в осадок железа и других микроэлементов дополнительно во все среды добавляют хелатирующее вещество, образующее с ионами металлов устойчивые комплексные соединения в форме, доступной для питания водорослей. С этой целью используют стерильный раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли (трилон Б) с массовой концентрацией 0,037 г/дм³. Раствор готовят в 100 см³ дистиллированной воды совместно с солью железа. Соли железа и трилона Б отдельно растворяют в 30 см³ дистиллированной воды, смешивают, доводят дистиллированной водой до 100 см³, кипятят 30 мин, охлаждают и добавляют в охлажденную среду для культивирования водорослей 1 см³ на 1 дм³ среды.

Например, для приготовления среды Успенского растворяют 2,5 г KNO₃; 2,5 г MgSO₄×7H₂O, 14,4 г Ca(NO₃)₂×4H₂O, 2,5 г КН₂РO₄×3Н₂O и 3,45 г К₂СO₃ в 100 см³ дистиллированной воды в отдельных склянках каждой соли. Отдельно растворяют 3,7 г трилона Б и 0,3 г Fe₂(SO₄)₃ в 100 см³ дистиллированной воды.

Все шесть склянок кипятят 10 - 15 мин, охлаждают и, соблюдая условия стерильности, (над пламенем горелки или спиртовки) переносят в колбу на 1 дм³ по 1 см³ из каждой склянки (кроме раствора железа и трилона Б) в 0,5 дм³ дистиллированной воды, смешивают, доводят до метки 1 дм³ дистиллированной водой. Полученную смесь кипятят 30 мин, охлаждают и добавляют после охлаждения 1 см³ смеси солей железа и трилона Б и по 1 см³ каждого раствора микроэлементов (А и В) на 1 дм³ среды. Готовые среды не хранят. Таким образом приготовленная среда Успенского используется для культивирования водорослей.

Приложение В

(рекомендуемое)

Регистрация результатов измерений (прямой счет водорослей)

Таблица В.1 - Пример записи в рабочем журнале результатов измерений методом прямого счета в камере Горяева

^* плотность водорослей в первый день эксперимента составляла в каждой колбе 27 тыс. кл./см³.

^** вычислять по формуле (17) п. 10.1, результат сравнивать с r, %, п. 2, таблица 1.

^*** вычислять по формуле п. 10.3, ± 0,01×d× , d - границы относительной погрешности измерений, % (п. 2, таблица 1).