ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА
Цель: овладеть методикой определения количества гемоглобина по методу Сали, и методикой расчета цветового показателя.
Оснащение: гемометр Сали, скарификаторы, 0,1норм. р-р HCl, дистиллированная вода, спирт, вата.
Ход работы:
I. Определение количества гемоглобина
1. В среднюю пробирку гемометра Сали налить 0,1норм. р-р соляной кислоты до нижний метки (0,2 мл).
2. Пипеткой взять 0,02 мл крови из пальца, и выдуть кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался неокрашенным.
3. Не вынимая пипетку, сполоснуть ее кислотой.
4. Содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой.
5. Выждать 5 минут (это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин).
6. Добавлять в пробирку по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандарта, при этом раствор перемешивают стеклянной палочкой.
7. Определяют уровень раствора в средней пробирке по шкале.
II. Расчет цветового показателя
Соотношение между количеством гемоглобина в крови и числом эритроцитов носит название цветового показателя (ЦП). Цветовой показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином.
Цветовой показатель вычисляется по формуле:
ЦП= 
;
где Г – гемоглобин, г/л;
К – количество эритроцитов в 1мкл крови (первые три цифры).
При патологических состояниях цветовой показатель может быть больше единицы (гиперхромазия) или ниже единицы (гипохромазия). В норме он составляет 0,8 - 1.
Оформление опыта. Определить количество гемоглобина в исследуемой крови и рассчитать ЦП. Сделать выводы.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СКОРОСТИ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ
Цель: овладеть методикой определения СОЭ.
Оснащение: прибор Панченкова, часовое стекло, скарификаторы, 5% р-р лимоннокислого натрия, спирт, вата
Ход работы:
1. Приготовить прибор Панченкова.
2. Капилляр прибора промыть раствором цитрата натрия.
3. Набрать цитрат натрия до метки Р (реактив) и выпустить его на часовое стекло.
4. В тот же капилляр набрать кровь из пальца человека до метки К (кровь), взятие крови повторить два раза.
5. Выпустить кровь на часовое стекло и смешать ее с раствором цитрата натрия
6. Смесь крови с цитратом натрия (в отношении 4:1) набрать в капилляр до метки 0 (Р); и поставить капилляр в штатив на 1 час.
7. Вследствие постепенного оседания эритроцитов верхний слой раствора, находящегося в пипетке, становится светлым. По высоте неокрашенного столбика определяют, на сколько миллиметров осели эритроциты за 1 час. Это и будет величина СОЭ.
Оформление опыта. Определить скорость оседания эритроцитов. Сделать выводы.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ
Цель работы: овладеть методикой подсчета количества лейкоцитов.
Оснащение: микроскоп (окуляр 15, объектив 20), счетная камера Горяева, меланжеры для лейкоцитов, скарификаторы, чашки для разбавления жидкости, вата, 3% раствор уксусной кислоты, спирт.
Ход работы.
Кровь берут из 4 пальца левой руки. Первую выступившую каплю стирают ватным тампоном. Во вторую каплю крови, погружают кончик меланжера для лейкоцитов, который при этом держат горизонтально, и набирают кровь до метки 0,5, а жидкость для разведения крови - до метки 11. Содержимое смесителя тщательно перемешивают, после чего заполняют счетную камеру. Для получения точных результатов подсчет производят в 25 больших квадратах, что составляет 400 маленьких квадратов.
Формула для вычисления количества лейкоцитов в 1мкл крови:
Х= 
;
где Х – число лейкоцитов в 1мкл крови;
В – число лейкоцитов в 25 больших (400 маленьких) квадратах;
4000 – объем одного малого квадрата;
400 – количество малых квадратов;
20 – разведение.
Оформление опыта. Вычислить количество лейкоцитов в 1мкл исследуемой крови. Сделайте вывод.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ
Цель: овладеть методикой определения групп крови.
Оснащение: скарификаторы, пластинка с лунками, стеклянные палочки, пипетки, стандартные сыворотки (или цоликлон), спирт, вата, восковый карандаш.
Ход работы:
1 вариант. Определение групп крови с использованием стандартных сывороток.
- На соответствующие лунки пластинки наносят по капле стандартной сыворотки 1, 2, 3 групп. Для взятия сывороток из ампул и для перемешивания, применяют отдельные пипетки и стеклянные палочки (нельзя допускать смешивания сывороток!).
- В каждую из них добавляют по капле исследуемой крови (капля крови величиной с булавочную головку – около 0,01мл) и тщательно перемешивают. Исследуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается. Наблюдения следует вести в течение 5 минут.
- При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в комочки (мелкие красные крупинки).
- На основании наличия или отсутствия агглютинации делают вывод о группе исследуемой крови.
Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0 с использованием стандартных сывороток
| Агглютиногены эритроцитов | Агглютинины сывороток | Группа исследуемой крови | ||
| I | II | III | ||
| ab | b | a | ||
| – | – | – | Оab (I) | |
| А | + | – | + | Аb (II) |
| В | + | + | – | Вa (III) |
| АВ | + | + | + | АВ (IV) |
П р и м е ч а н и е. Реакция агглютинации (+), ее отсутствие(-)
2 вариант. Определение групп крови с использованием цоликлонов.
1. На соответствующие лунки пластинки, индивидуальными пипетками, наносят цоликлоны анти-А и анти-В по одной большой капле (0,1мл).
2. В каждую из них добавляют по одной маленькой капле (0,01-0,02мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентами. Наблюдения следует вести в течение 3 минут.
3. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в комочки (мелкие красные крупинки).
4. На основании наличия или отсутствия агглютинации делают вывод о группе исследуемой крови.