Оценка методики на точность

Протокол № 4

ОЦЕНКА МЕТОДИКИ НА ЛИНЕЙНОСТЬ

Объект. Методика определения белка по методу Лоури в препарате Лапрот. Определения проводили с использованием СО Лактоферрин женского молока, Sigma, США.

Описание теста. Линейность – это способность методики в диапазоне применения давать величины сигнала D (оптической плотности) прямо пропорциональные концентрации (количеству) C определяемого вещества.

Критерии приемлемости.

1. Зависимость оптической плотности растворов СО Лактоферрина женского молока, Sigma, США от концентрации белка в области действия методики должна быть линейной.

2. Должно быть представлено регрессионное уравнение D = a + bС с коэффициентом корреляции не менее 0,9.

3. Линейность зависимости D от C должна быть также подтверждена визуально - графиком.

Процедура. Оценка методики.

Методом наименьших квадратов определяли зависимость оптической плотности растворов СО Лактоферрин от концентрации белка. Поскольку метод является фармакопейным, оценку линейности проводили на трех концентрациях, лежащих в диапазоне нормируемого количества белка в препарате: 0,020-0,100 мг/мл.

В мерные пробирки вместимостью 10 мл помещали навески СО Лактоферрин содержащего 0,02-0,100 мг белка, растворяли в 1 мл раствора. Рассчитывали содержание белка в модельных пробах (мг).

В каждую пробирку добавляли по 5 мл реактива Фолина. Тщательно перемешивали и оставляли на 10 мин в темноте при комнатной температуре. Затем добавляли 0,5 мл реактива Фолина и оставляли пробы на 30 мин в темноте при комнатной температуре.

Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 750 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Между измерениями кюветы промывали 50 % раствором этанола в воде.

В качестве раствора сравнения использовали дистиллированную воду.

Результаты. Полученные данные представлены в таблице 1 и на рис.1. (ОП от концентрации без БСА)

Протокол №4 (продолжение)

Таблица 1.

Зависимость оптической плотности растворов СО Лактоферин от расчетной концентрации белка

Методом наименьших квадратов установлено, что зависимость D от С может быть представлена следующим регрессионным уравнением:

D = 0,001557*C+0,030024 мкг/мл

Коэффициент корреляции r =0,999899;

Стандартное отклонение S = 0,051438; n = 9

Рис. 1. Зависимость оптической плотности растворов СО Лактоферринот концентрации белка.

Выводы.

- Высокое значение коэффициента корреляции r = 0,999899 указывает на хорошую линейность зависимости оптической плотности растворов СО Лактоферрин от концентраций белка.

Этот же вывод подтверждается визуально графиком D – С, представленном на рис. 1.

Измеренные значения хорошо ложатся на линию регрессии.

- Точка пересечения графика с осью ОХ (- 20 мкг) является пределом чувствительности данной методики, что соответствует рабочему диапазону метода в соответствии с ГФ ХII, часть 1, стр 108 (25 – 100 мкг).

- Точка пересечения графика с осью OY (свободный член в регрессионном уравнении) не выходит за пределы стандартного отклонения: Y=0,031; S = 0,0517.

Отклонения/ примечания: нет

Заключение: подтверждена линейность зависимости оптической плотности растворов СО Лактоферрин от концентрации белка. Коэффициент линейной корреляции r = 0,999 соответствует критерию приемлемости r ³ 0,9.

Выполнил _______ ____________ ________ ___________________

(дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)

Проверил _______ ____________ ________ ___________________

(дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)

ПРОТОКОЛ № 5

ОЦЕНКА МЕТОДИКИ НА ТОЧНОСТЬ

Точность – степень близости результата измерений к принятому опорному (стандартному) значению. Показатели точности методики – правильность, повторяемость и воспроизводимость.

Объект. Методика определения белка по методу Лоури в препарате Лапрот. Определения проводили с использованием СО Лактоферрин женского молока, Sigma, США с аттестованной характеристикой содержания белка 97 %.

Описание теста. Определяется точность методики – степень соответствия между взятым в модельную смесь (истинным) и найденным по тестируемой методике значением содержания белка.

Показатель точности методики – правильность будет определяться величиной открываемости R (%), а в случае, если открываемость содержания белка выходит за пределы (98,0 – 102,0) % – оценкой статистической значимости различия результатов с помощью t-критерия Стьюдента.

Критерий приемлемости. Открываемость – в пределах (98,0 – 102,0) %, в противном случае – доказательство отсутствия систематической ошибки.