Прежде чем проводить лечебно-профилактические мероприятия при определенных гельминтозах сельскохозяйственных и промысловых животных, необходимо своевременно поставить точный диагноз болезни. Существуют две группы методов диагностики гельминтозов - прижизненные и посмертные. Кроме того, надо уметь дифференцировать гельминтозы и другие инвазионные, а также инфекционные заболевания.
Прижизненная диагностика гельминтозов
Диагноз на гельминтозы при жизни животных ставят на основании результатов лабораторных методов исследований и диагностических дегельминтизаций (прямых методов), а также иммунологических реакций (косвенных методов). Подсобную роль в диагностике гельминтозов играют результаты исследований промежуточных хозяев (при биогельминтозах), клинические симптомы и эпизоотологическне данные.
Основные методы диагностики - лабораторные исследования, позволяющие часто обнаруживать возбудителей гельминтозов или их яйца и личинки в экскретах (фекалиях, моче, мокроте), секретах (желчи), тканях (крови, мышцах), органах (кусочках кожи), в содержимом пунктатов и абсцессов.
Лабораторные методы диагностики гельминтозов животных легко выполнимы и достаточно точны, поэтому их широко применяют в производственных условиях (в ветеринарных лабораториях и в других ветеринарных учреждениях). В зависимости от целевого назначения лабораторные исследования подразделяют на:гельминтоовоскопическне, гельминтоларвоскопические и гельминтоскопические методы исследований.
Гельминтоовоскопические методы исследований позволяют выявлять в экскретах, секретах и соскобах яйца многих паразитических червей. Широко применяется в ветеринарной практике исследование проб фекалий по Фюллеборну, последовательного промывания и др.
Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктпокаулов, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий методами Бермана - Орлова, Вайда и др.
Гельминтоскопические, или макрогельминтоскопические, исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых наружу гельминтов или их фрагментов (члеников цестод). В практических условиях этим способом диагностируют аскаридоз свиней, цестодозы (мониезиоз жвачных, дрепанидотениоз гусей, тениндозы плотоядных).
Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют:
а) гельминтокопрологические исследования (исследование фекалий),
б) исследование выделений других органов и др.
Гельминтокопрологические исследования
Большинство гельминтов, паразитирующих у животных, выделяют во внешнюю среду через желудочно-кишечный тракт яйца, личинок и фрагменты тела (членики). Поэтому гельминтокопрологические исследования являются основными методами прижизненной диагностики гельминтозов. Плановые гельминтокопрологические обследования животных в хозяйствах проводят два раза в год: первый раз в марте - апреле и второй в ноябре - декабре.
Пробы фекалий берут от двух-трех возрастных групп. Например, на свиноферме обследуют копрологически 3-4-месячных поросят, 5- 7-месячных подсвинков и взрослых свиноматок. От каждой возрастной группы берут по 15-25 проб фекалий. Результаты гельминтокопрологических исследований во многом зависят от правильности отбора и упаковки проб и своевременной доставки их и ветеринарную лабораторию. Для упаковки фекалий используют кульки и пакетики из целлофана и плотной бумаги. Жидкие фекалии можно пересылать в небольших баночках (бактериологические пробирки непригодны). Для исследований пригодны только свеже выделенные фекалии. Их берут у крупных животных из прямой кишки рукой в резиновой перчатке; от свиней, телят, овец и коз фекалии следует брать средним и указательным пальцем в напальчниках.
Для этих же целей предложены специальные приборы, использование которых облегчает труд ветеринарных работников и повышает производственную культуру этой манипуляции.
У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки. Иногда допускается брать фекалии с пола, если они свежие и известно от какого животного. От одного животного берут не менее 10-20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).
Все пробы фекалий этикетируют:
по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) пишут номер пробы (кличку коров).
К пробам фекалий прилагают опись, где указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых - кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб.
В сопроводительной следует указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации против фасциолеза).
Необходимо как можно быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре через 16- 20 ч из яиц кишечных стронгилят выходят личинки, что затрудняет диагностику диктиокаулеза жвачных. Результаты исследования регистрируют в специальном журнале, в котором, кроме порядкового номера, вида, клички (номера) животного, метода и результатов исследования, обязательно отмечают возраст животного и интенсивность инвазии (количество яиц и личинок в препарате или в трех каплях взвеси).
Качественные методы гельминтокопрологических исследований.
Гельминтоовоскопические методы. В ветеринарных лабораториях пробы фекалий животных наиболее часто исследуют гельминтоовоскопическими методами. Их делят
на простые (метод нативного мазка) и
методы концентрации яиц гельминтов (флотации, осаждения и комбинированные).
Метод нативного мазка. В ветеринарной практике имеет ограниченное применение, вследствие низкой его эффективности. Яйца паразитических червей удается обнаружить только при высокой и средней интенсивности инвазии. На предметное стекло наносят каплю равных частей воды и глицерина и небольшой кусочек фекалий (с булавочную головку), тщательно перемешивают стеклянной или деревянной палочкой; после удаления твердых частиц на эту смесь кладут покровное стекло и исследуют под микроскопом. Глицерин просветляет препарат и препятствует быстрому высыханию его. Рекомендуют исследовать 5-10 препаратов (капель). Этот метод используют в качестве дополнительного к другим методам.
Методы концентрации яиц гельминтов разделяются на три группы, в зависимости от соотношения плотности яиц гельминтов и жидкости, в которой взвешены пробы фекалий животных.
Методы флотации. При методах флотации (всплывания) используют насыщенные растворы солей с более высокой плотностью (1,18-1,50), чем яйца паразитических червей. В лабораторной практике из флотационных жидкостей наиболее часто применяют насыщенный раствор натрия хлорида, или поваренной соли (плотность 1,18-1,2 при комнатной температуре). Для приготовления такого раствора в кастрюлю или ведро с кипящей водой постепенно всыпают при помешивании поваренную соль до образования на дне небольшого осадка (380-400 г на 1 л воды). Горячий раствор фильтруют через несколько слоев марли в бутыль и применяют после охлаждения (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).
При диагностике некоторых гельминтозов используют также насыщенные растворы технической (гранулированной) селитры, или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 л кипящей воды), натриевой селитры, или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли и горячей воды 1:1), английской соли, или магния сульфата с плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 л горячей воды), натрия тиосульфата, или гипосульфита натрия, плотность которого колеблется от 1,38 до 1,40 (1750 г на 1 л кипящей воды), а также нитрата свикца с плотностью 1,5 (650 г на 1 л горячей воды). В последнем растворе всплывают яйца всех паразитических червей, включая яйца трематод, но деформируется оболочка яиц фасциол и парамфистомид.
Для определения плотности насыщенных растворов солей используют денсиметр.
Метод Фюллеборна. В полистироловый, пластмассовый пли стеклянный стаканчик емкостью 75-100 мл помещают пробу фекалий массой Зги постепенно добавляют 50- 75 мл насыщенного раствора натрия хлорида порциями при тщательном размешивании взвеси стеклянной палочкой. Плотные фекалии овец (коз и кроликов) предварительно растирают с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив при помешивании необходимое количество флотационной жидкости. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют, а взвесь фекалий фильтруют в другой стаканчик через нержавеющее металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0,3-0,5 мм.
Во время отстаивания заряженной пробы яйца многих видов нематод и цестод всплывают на поверхность. Через 45 мин проволочной или спиральной петлей (диаметр 0,8- 1 си) снимают три капли поверхностной пленки и помещают их на предметном стекле. Не накрывая капли покровными стеклами, просматривают их под малым увеличением микроскопа при опущенном вниз конденсоре. Число обнаруженных яиц каждого вида гельминта в трех каплях подсчитывают. Метод Фюллеборна прост, дешев, удобен и сравнительно эффективен при многих нематодозах, поэтому его широко применяют в лабораториях и в других ветеринарных учреждениях.
Методы осаждения. При методах осаждения (седиментации) пробы фекалий смешивают с водой, плотность которой меньше яиц паразитических червей.
Метод последовательного промывания. Пробу фекалий массой 3-5 г кладут в стакан (плотные фекалии овец предварительно растирают в ступке с небольшим количеством воды) и добавляют порциями 15-кратное количество воды, размешивая взвесь до равномерной консистенции. Смесь фильтруют через ситечко в стакан емкостью 175- 200 мл, доливают воду при помешивании почти до краев стакана, после чего фильтрат отстаивают 5 мин (до образования осадка). Затем верхний слой жидкости сливают или отсасывают спринцовкой до осадка, а к осадку снова добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают 5 мин, после чего жидкость сливают или отсасывают до осадка. Такие манипуляции повторяют до просветления надосадочного слоя воды в стакане. Последний раз надосадочный слой сливают, а осадок наносят на большое предметное стекло (7X10 см) и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики трематодозов жвачных, плотоядных и птиц, а также других гельминтозов животных.
Комбинированные методы. Основаны на принципе осаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы сравнительно редко используют в ветеринарных лабораториях.
Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (1- 2 г) размешивают в стаканчике с 20-30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1-2 мин, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и натрия хлорида. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором натрия хлорида. Этот метод применяют преимущественно при нематодозах свиней.
Метод Щербовича. Техштка исследования фекалий в принципе такая же, как при методе Дарлинга. Отличается от предыдущего метода тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенные растворы натрия нитрата (при метастронгилезе свиней) и натрия тиосульфата (при макраканторипхозе). Данный метод более эффективен.
Гельминтоларвоскопические методы.
Метод Бермана - Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий из средней воронки, резиновой трубки (10-15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (37-40°). 10- 15 г свежих фекалий кладут па сито или завертывают в марлю и осторожно опускают в воронку (предварительно шарики фекалий лучше разрушать). Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2-4 ч; а от телят - не менее 6- 7 ч. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку и центрифугируют 2 - 3 мин. После этого верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на большое предметное стекло (7X10 см) н исследуют под микроскопом.
Многие ветеринарные лаборатории считают, что применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами.
Поэтому нижние концы резиновых трубок непосредственно соединяют с маленькими или центрифужными пробирками. Перед исследованием осадка под микроскопом жидкость пе центрифугируют. Используют в качестве основного метода для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов жвачных.
Метод Вайда. Несколько свеже выделенных шариков (4-5) овец или коз помещают в бактериологическую чашку или на часовое стекло и овлажняют их небольшим количеством теплой воды (37-40°). Через 15-30 мин фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость исследуют под микроскопом на наличие живых личинок нематод. Эффективность данного метода значительно ниже в сравнении с методом Бермана - Орлова, поэтому его редко применяют для диагностики диктиокаулеза и не используют для распознавания протостропгилидозов мелких жвачных (большинство личинок последних нематод находится внутри фекальных шариков).
Упрощенный ларвоскопический метод. Навеску свежих фекалий овец или крупного рогатого скота (5 г), завернутую в маленькую марлевую салфетку или на ситечке, помещают в полуконический стаканчик емкостью 30-50 мл таким образом, чтобы она не касалась дна, и заливают теплой водой (37-40°). Пробы от овец осторожно извлекают из стаканчиков через 3-4 ч, а от молодняка крупного рогатого скота через 7-10 ч. Спустя 10-15 мин надосадочную жидкость сливают или отсасывают спринцовкой, осадок переносят на большое предметное стекло (7X10 см) и микроскопируют (рис. 3).
С целью ускорения гельментоларвоскопических исследований в последнее время предложена экспресс-диагностика диктиокаулеза овец. Небольшие пробы фекалий (3- 5 г) кладут в пробирки с водой температуры 20-22°, пробирки помещают в центрифугу и центрифугируют в течение 2 мин. Затем пробы вынимают пинцетом, воду сливают до осадка, а осадок микроскопируют на стекле (Г. А. Котельников).
Гельминтоскопические или макрогельминтоскопические методы. При гельминтоскопии (осмотре) фекалий животных можно обнаружить гельминты или их фрагменты, которые выделяются под воздействием медикаментарных средств или самопроизвольно (мониезий и тизаниезий у жвачных, дрепанидотений у гусей и др.). Чтобы обнаружить более мелких паразитических червей у мелких и средних животных, исследуют методом последовательного промывания всю единовременную порцию фекалий, а у крупных животных - часть фекалий. Собранные фекалии после предварительного осмотра помещают в стеклянный цилиндр или небольшую банку, разбавляют 10-кратным количеством воды и тщательно размешивают. После 10- 15-минутного отстаивания верхний слой жидкости сливают, а осадок снова смешивают с водой и отстаивают.
Периодическое промывание и отстаивание фекалий повторяют до просветления фильтрата. Верхний слой жидкости последний раз сливают, а осадок малыми порциями просматривают в кюветах с черным и белым дном. Обнаруженных гельминтов собирают при помощи пинцетов, препаровальных игл и кисточек, просматривают под микроскопом, после чего переносят в консервирующую жидкость. Чтобы выявить мелких гельминтов, осадок дополнительно исследуют по частям при помощи бинокулярной или штативной лупы с 10-20-кратным увеличением или стереоскопического биологического микроскопа (МБС).
Для ускоренного сбора паразитических червей разной величины из фекалий животных иногда применяют метод отсеивания, для чего используют набор из нескольких металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Фекалии, находящиеся па верхнем сите, промывают струей воды, при этом частицы фекалий уносятся водой, а гельминты в зависимости от величины задерживаются на разных ситах и их выбирают и исследуют.
Количественные методы гельминтокопрологических исследований применяют для установления степени (интенсивности) гельмиитозной инвазии при жизни животных, а также для выяснения эффективности проводимых дегельминтизаций на основании сравнения числа обнаруженных яиц или личинок гельминтов до и после назначения антгельминтиков животным. Наиболее распространенными являются стандартизированные методы Фюллеборна, последовательного промывания и Бермана - Орлова, методика выполнения которых в принципе такая же, как и одноименных качественных гельминтокопрологических методов.
Количественные методы характеризуются рядом особенностей:
взятие навесок экскрементов проводят в определенные часы суток;
стаканчики, воронки и ситечки равного объема или диаметра;
пробы фекалий одинаковые по объему;
время отстаивания взвеси фекалий одно и то же;
петли и предметные стекла одного диаметра (размера);
реактивы идентичные.
Достоверность результатов повышается при использовании набора для гельминтокопрологических исследований и при увеличении количества проб и кратности исследований.
Исследование выделений других органов
Исследование содержимого конъюнктивальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота. Из спринцовки орошают конъюнктивальные полости водным раствором йода; вытекающую жидкость собирают в кюветку или почковидный тазик и осматривают на наличие телязий. В данном случае водный раствор йода оказывает и лечебное действие.
Исследование соскобов с перианальных складок - основной метод диагностики оксиуроза лошадей. Лопатковцдной палочкой или спичкой, смоченной смесью равных частей глицерина и воды, делают соскоб с перианальных складок, промежности и внутренней поверхности корня хвоста. Соскоб переносят па предметное стекло в каплю глицерина с водой, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Обнаружение яиц оксиуров подтверждает клинический диагноз.
Диагностическая дегельминтизация
Под диагностической дегельминтизацией понимают такое вмешательство, при котором достигается выделение из желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных хотя бы части паразитических червей для точного установления гельминтологического диагноза. Данную дегельминтизацию проводят в тех случаях, когда клинические признаки дают основание заподозрить наличие болезни у животных, вызванной неполовозрелыми гельминтами.
Для диагностической дегельминтизации выделяют несколько животных, изолируют от остального поголовья и задают им антгельминтик в терапевтической дозе. Выделенные в течение нескольких часов фекалии от животных собирают и исследуют гельментоскопически на предмет обнаружения возбудителя болезни.
В производственных условиях такие дегельминтизации нередко проводят для прижизненной диагностики цестодозов (мипиезиоза жвачных, дрепанидотениоза гусей и цестодозов плотоядных).
Иммунологические реакции
Гельминтологические методы исследований часто оказываются неэффективными при гельминтозах сельскохозяйственных животных, вызванных неполовозрелыми паразитами и личиночными стадиями паразитических червей (эхинококками, альвеококками, цистицерками, мышечными трихинеллами, микроонхоцерками). Поэтому некоторое практическое значение имеют иммунологические методы диагностики гельминтозов, базирующиеся на явлениях иммунитета. Иммунологические реакции проявляются при взаимодействии антигена с антителами. Они включают аллергические и серологические реакции.
Методы иммунодиагностики более эффективны при тех гельминтозах, возбудители которых паразитируют в тканях (цистицерки, личиики эхинококков, трихинелл, онхоцерков и др.) или мигрируют по крови (личинки аскарид, диктиокаулов, метастронгилов и др.). Из серологических реакций заслуживают внимания реакция сколексопреципитации, позволяющая диагностировать ларвальный эхинококкоз, и реакция преципитации, способствующая распознаванию трихинеллеза и аскаридоза свиней.
Из аллергических методов иммунодиагностики некоторый интерес представляет кожная проба (реакция Кацопи) при эхинококкозе животных. Иногда эта реакция может представлять потенциальную опасность для здоровья обследуемого животного (возможен анафилактический шок). Несмотря на эффективность и перспективность иммунологических методов диагностики ряда гельминтозов, их в настоящее время еще редко применяют в производственных условиях.
К другим исследованиям, которые имеют подсобное значение в установлении или уточнении диагноза на гельминтозы, можно отнести люминесцентную микроскопию, помогающую дифференцировать однотипные яйца разных видов паразитических червей, а также отличать жизнеспособные яйца и личинки от мертвых; определение белковых фракций крови (учет нарушения соотношения альбумипов и глобулинов); выяснение морфологического состава крови (учет эозинофилии).
Клинические признаки
Клиническая карта гельминтозов сельскохозяйственных животных изучена слабо, а симптомокомплекс заболеваний, вызываемых паразитическими червями, довольно однообразен (угнетение, поносы, исхудание и др.), поэтому она играет подсобную роль при диагностике большинства этой группы заболеваний. Однако при ряде гельминтозов животных наблюдают характерные клинические симптомы:
нервные явления (при ценурозе овец),
конъюнктивит и кератит (при телязиозе крупного рогатого скота),
кожные кровотечения (при парафиляриозе лошадей).
Эти заболевания можно диагностировать с известной долей достоверности на основании клинических наблюдений.
При большинстве других гельминтозов такие нехарактерные симптомы, как низкая упитанность и продуктивность взрослых животных, отставание в росте п развитии молодняка, должны служить поводом для проведения гельминтокопрологических и других специальных обследований животных, подозреваемых в заболевании гельминтозами.
Эпизоотологические данные
При диагностике многих гельминтозов сельскохозяйстгвенных животных значительную помощь оказывают эпизоотологические данные (неблагополучие хозяйства по конкретным болезням, сезон года, возраст больных животных, характер пастбищ и водоисточников, метеорологические условия и др.).
Например, массовое заболевание с признаками брюшных водянок и падеж овец осенью после дождливого лета и использование под выпасы заболоченных участков пастбищ дает основание заподозрить острую форму фасцполеза. Заболевание гусят в начале лета с признаками расстройства пищеварения (поносы) и нервной системы (парезы) после выпаса их на мелком стоячем водоеме, обильно заселенном циклопами, является основанием для установления предположительного диагноза на дрепанидотениоз. Падеж ягнят весной (через 3-4 недели после начала пастбищного содержания) должен вызвать подозрение о заболевании молодняка овец мониезиозом.
Необходимо также учитывать зональные особенности гельмиптозов домашних животных желательно в комплексе с клиническими наблюдениями