II. Инструктаж к практической работе

Методические указания к практическому занятию по дисциплине

ОП.06 «Основы микробиологии и иммунологии»

Для студентов специальности 33.02.01 Фармация

Тема «Грибы, простейшие, вирусы (Титрование фага по Аппельману)».

Цель занятия: Изучить методику титрования фага по Аппельману.

Оборудование: пробирки, пипетки, груши, культура микробов, бульон, исследуемый фаг.

После выполнения практической работы студенты должны уметь:

- учитывать результат реакции титрования фага по Аппельману

Студенты должны знать:

- применение фагов;

-титр фага

Практическая работа способствует формированию следующих профессиональных компетенций:

ОК- 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес;

ОК-3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК-4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и личностного развития.

ОК-6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством.

ОК-7. Брать на себя ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результатом выполнения заданий.

План занятия

I. Входной контроль

II. Инструктаж к практической работе. Демонстрация манипуляций по теме.

III. Самостоятельная работа студентов. Оформление дневников по практике

IV. Отчет о проделанной работе. Выходной контроль

Ход занятия.

I. Ответьте на вопросы входного контроля:

1. Что такое фаги?

2. Какие фаги называются умеренными, а какими вирулентными?

3. Как получают фаги?

4.Где применение фагов?

II. Инструктаж к практической работе

Используя в работе методические указания изучите методику постановки реакции титрования фага по Аппельману и прочитайте результат реакции.

III. Самостоятельная работа студентов:

1. Изучить методику постановки реакции титрования фага по Аппельману.

1. В 12 стерильных пробирок наливают по 4,5 мл стерильного бульона.

2. Пробирки ставят в штатив и нумеруют от 1 до 10, на одной из оставшихся пробирок пишут «КК» (контроль культуры), на другой – «КФ» (контроль фага).

3. В десяти пробирках готовят последовательные десятикратные разведения фага от 10^-1 до 10 ^-10. В 1-ю пробирку вносят 0,5 мл фага. Такое же количество вносят в пробирку контроля фага. Сменив пипетку, новой пипеткой тщательно перемешивают содержимое 1-й пробирки и переносят 0,5 мл его во 2-ю пробирку; 0,5 мл содержимого 2-й пробирки переносят в 3-ю и так далее до 10-й пробирки. Перемешав содержимое 10-й пробирки, 0,5 мл жидкости из нее выливают в дезинфицирующий раствор. Также поступают с содержимом пробирки контроля фага.

4. Во все пробирки, кроме пробирки контроля фага, вносят по 1 капле (0,05 мл) взвеси тест-культуры. Пробирки встряхивают. Во всех пробирках, кроме пробирки контроля фага, должна появиться слегка заметная муть.

5. Пробирки помещают в термостат на 18-20 ч, после чего учитывают результат на титрования.

Учет результатов обязательно начинают с контролей.

В Контроле культуры должно быть размножение бактерий – содержимое пробирки становится мутным. Это говорит о том, что взятая в опыт культура жизнеспособна. Если в пробирках с фагом культура не выросла, на нее подействовал фаг. Жидкость в пробирке с контролем фага должна остаться прозрачной.

Таблица 1. Схема титрования фага по Аппельману

Ингредиенты, мл	Пробирки
опыт	контроль
										культуры	фага
Бульон	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5
Исследуемый фаг	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	-	0,5
Культура микроба	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	-
	Разведение фага
	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5	10-6	10-7	10-8	10-9	10-10	--	10-1
	Пробирки тщательно встряхивают и инкубируют при 370С 18-10 ч
Результат	-	-	-	-	-	-	-	+	+	+	+	-

Условные обозначения: + рост культуры, - отсутствие роста культуры.

Титр фага – это наибольшее его разведение (или наименьшее количество), которое подавляет рост тест-культуры в условиях данного опыта.

IV. Выходной контроль. Тестовый опрос.