БИЛЕТ № 1
В лабораторию поступил материал от больного фурункулезом. Подозрение на патогенную кокковую флору. При первичном посеве исследуемого материала на одной среде выросли колонии с перламутровой зоной вокруг них (радужным венчиком), а на другой колонии с четкой зоной гемолиза.
1. Дайте биологическую характеристику бактерий рода Staphylococcus.
2. Расскажите, что служит исследуемым материалом при фурункулезе. Правила его взятия и транспортировки в лабораторию.
3. Перечислите питательные среды, на которые необходимо провести первичный посев с целью выделения чистой культуры возбудителя и её идентификацию.
6. Поставьте реакцию плазмокоагуляции с чистой культурой стафилококка.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Наибольшее медицинское значение имеют S. aureus, S.epidermitidis и S. saprophyticus. Стафилококки (от греч. staphyle - виноградная гроздь) имеют вид круглых шаров диаметром 0,5-1,5 мкм. Размножаясь, образуют скопления в виде грозди винограда. Такая форма является результатом деления микробов в различных плоскостях. Однако в гное встречаются единичные и парные кокки. Стафилококки неподвижны, не имеют спор, при специальных условиях культивирования образуют микрокапсулу, грамположительны. Факультативные анаэробы. Неприхотливы, растут на простых питательных средах. Обладают высокой биохимической активностью (сахаролитической, протеолитической). Антигенная структура - сложная. Обладают разнообразными факторами вирулентности, благодаря чему они могут вызывать более 100 различных заболеваний. 3
2 При фурункулезе биологическим материалом является гнойное отделяемое. При взятии материала из раны стерильным ватным тампоном кожу вокруг раны предварительно обрабатывают спиртом или другим антисептиком, некротические массы, детрит и гной удаляют стерильной салфеткой. Взятие материала стерильным тампоном производят круговыми вращательными движениями от центра к периферии поверхности раны. Материал берут двумя тампонами, один из которых используют для микроскопии, а другой - для посева. 2
Тампоны помещаются в стерильную емкость (пробирку) с транспортной средой или без. Доставляется в лабораторию для посева в течение 2-4 часов, при наличии транспортной среды – 12, в контейнере с хладагентами.
3 ЖСА (элективная среда для выявления лецитиназной активности), колонии круглые, выпуклые, с ровными краями, диаметром 2 – 4 мм; окрашены в белый (эпидермальный стафилококк) или различные оттенки желтого цвета (золотистый стафилококк), с перламутровым венчиком вокруг. КА. (Бета-гемолиз вокруг колоний золотистого стафилококка). Дополнительным тестом может служить характер роста на плотной кровяной (5% дефибринированной крови барана или кролика) среде. Подавляющее большинство штаммов S. aureus и некоторые штаммы S. epidermidis растворяют эритроциты, образуя прозрачную зону гемолиза вокруг колоний. 2
БИЛЕТ № 2
В микробиологическую лабораторию поступил материал от больного ангиной с подозрением на стрептококковую инфекцию для микроскопического исследования.
1. Дайте биологическую характеристику бактерий рода Streptococcus.
2. Расскажите, что служит исследуемом материалом при ангине. Правила его взятия и транспортировки в лабораторию.
3. Перечислите питательные среды, на которые необходимо провести первичный посев с целью выделения чистой культуры возбудителя и ее идентификацию.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Относятся к роду Streptococcus. грамположительные кокки неправильной округлой формы, располагающиеся в виде цепочек или попарно, размером 0,5-2,0 мкм. Неподвижны, спор не имеют, некоторые образуют капсулу. Факультативные анаэробы, отдельные представители - облигатные анаэробы. Стрептококки являются факультативные анаэробами; капнофилы; некоторые –микроаэрофилы, предпочитают анаэробные условия. Растут в интервале температур 25-450С; оптимум – 370С. Питательные потребности сложные. Растут на сложных питательных средах с добавлением крови, сыворотки, асцитической жидкости, 3
2 При ангине биологическим материалом служит слизь из зева. Исследуемый материал берется стерильным тампоном. Взятие материала стерильным тампоном производят круговыми движениями из зева. Материал берут двумя тампонами, один из которых используют для микроскопии. А другой – для посева. Тампоны помещаются в стерильную емкость (пробирку) с транспортной средой или без. Доставляется в лабораторию для посева в течение 2-4 часов. При наличии транспортной среды – 12. В контейнере с хладогентами. 2
3 На кровяном агареStreptococcuspyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяномагаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитические 3) β-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза. 2
БИЛЕТ № 3
В микробиологическую лабораторию поступил исследуемый материал больного с пневмонией. Первичный посев материала был проведён на желточно-солевой агар, кровяной агар и среду Эндо. Рост был обнаружен только на кровяном агаре в виде плоских зеленоватых колоний с зеленой зоной α- гемолиза вокруг колоний.
1. Дайте биологическую характеристику возбудителю заболевания.
2. Расскажите, что является исследуемым материалом на пневмонию? Правила его взятия, транспортировки и хранения.
3. Поясните, для каких возбудителей характерны описанные выше культуральные свойства при росте на кровяном агаре? Каких возбудителей можно исключить, исходя из отсутствия роста на ряде питательных средах?
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Возбудителем заболевания являются α-гемолитические стрептококки. Стрептококки (лат.Streptococcus) — род грамположительных факультативно анаэробных бактерий. Клетки шаровидной или овальной формы, расположенные попарно или в виде цепочек разной длины. Грамположительны. Хемоорганотрофы. Требовательны к питательному субстрату. Размножаются на кровяных или сахарных средах. На поверхности твердых сред образуют мелкие колонии, на жидких дают придонный рост, оставляя среду прозрачной. По характеру роста на кровяном агаре различают α-гемолитические (зеленящие), вызывающие частичный гемолиз, β-гемолитические, вызывающие полный гемолиз, γ-гемолитические (негемолитические), не вызывающие гемолиза. Гемолитический признак вариабельный, вследствие чего для дифференциально-диагностических целей редко используется. Ферментация углеводов не является стабильным и четким признаком, вследствие чего он не используется для дифференцировки и идентификации стрептококков. Стрептококки аэробы, не образуют каталазы, в отличие от стафилококков. Абсолютное большинство штаммов неподвижно. Факторы патогенности стрептококка: стрептолизин, скарлатинозныйэритрогенин; лейкоцидин, некротоксин, гиалуронидаза, амилаза, стрептокиназа и протеиназа. 3
2 Материалом для исследования является мокрота. Мокроту собирают утром натощак, при свободном ее отхождении. Больной перед собиранием мокроты тщательно ополаскивает полость рта кипяченой водой или стерильным физиологическим раствором. Мокроту собирают в специальную стерильную банку с завинчивающей крышкой (для сбора мокроты). Мокроту можно собирать и другое время, но только не менее 2-х часов после приёма пищи. Материал доставляют в лабораторию в контейнере, чтобы начать исследование не позднее 2-х часов со времени взятия материала. 2
3 Исходя из отсутствия роста на ЖСА, можно исключить стафилококки, а на ЭНДО – E.coli. Обнаруженный рост в виде зеленоватых колоний с зеленой зоной α- гемолиза вокруг колоний характерен для пневмококка и α – гемолитического стрептококка. Провести их дифференциацию можно по отношению к желчи, оптохину и инулину. 2
БИЛЕТ № 4
В микробиологическую лабораторию поступил материал для исследования от больного с подозрением на менингококковый назофарингит.
1. Дайте биологическую характеристику предполагаемого возбудителя.
2. Назовите, какой исследуемый материал поступил в лабораторию. Правила забора, доставки, хранения.
3. Расскажите, на какие среды и при какой температуре проводится посев чистой культуры для дифференциации от непатогенныхнейссерий. Объясните, какой результат будет свидетельствовать о выделении непатогенныхнейссерий.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Род Neisseria включает два вида микробов, патогенных для человека: N. meningitidis и N. gonorrhoeae. Назофарингит вызывает N. Meningitidis. Менингококки - это парные кокки, состоящие из двух бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу, наружные стенки у них выпуклые, они неподвижны, не имеют спор, образуют капсулу. Грамотрицательны. Менингококки - аэробы. Они требовательны к питательным средам, размножаются только на средах, содержащих нативный белок (сыворотку, кровь). Растут при температуре 36-37° С (при 25° С рост прекращается). На ппс образуют небольшие (2-3 мм), нежные, полупрозрачные, голубоватые, вязкие колонии, в бульоне - дают легкую муть и небольшой осадок. Биохимически менингококки малоактивны (глюкоза, мальтоза + (К)). К факторам патогенности относятся капсула, пили, ферментообразование (гиалуронидаза, нейраминидаза), термоустойчивый эндотоксин (ЛПС). Антигенная структура сложная. 3
2 Исследуемый материал - слизь из носоглотки. Материал собирают стерильным тампоном, укрепленным на проволоке; тампон изгибают под углом 45 °. Затем стерильным шпателем прижимают корень языка и вводят тампон концом вверх под мягкое небо в носоглотку и легкими движениями собирают отделяемое - слизь. Извлекать тампон надо очень осторожно, чтобы не задеть язык, щеку, не коснуться зубов. Посев материала проводят сразу же после взятия. Засеянные чашки доставляют в лабораторию в термоконтейнерах (t = 37°C). 2
3 Для посева слизи из носоглотки используют сывороточный агар с антибиотиком ( антибиотик добавляется для подавления грамположительной флоры). Для дифференциации от непатогенных нейссерий выделенную чистую культуру с характерными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами засевают на сывороточный и простой агары при температуре 37°С и 22°С. Непатогенные нейссерии хорошо растут на МПА и на сывороточном агаре при температуре 37°С и 22°С. Менингококки растут только на сывороточном агаре при температуре 37°С. 2
БИЛЕТ № 5
В микробиологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на анаэробную (газовую) гангрену.
1. Дайте биологическую характеристику возбудителям гангрены.
2. Расскажите, что служит исследуемым материалом. Правила его взятия и транспортировки в лабораторию.
3. Перечислите питательные среды, на которые необходимо провести посев с целью выделения чистой культуры возбудителя и её идентификацию.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Основной возбудитель газовой гангрены — Clostridiumperfringens. Также инфекция может быть ассоциирована с Clostridiumsepticum, Clostridiumhistolyticum, Clostridiumbifermentans, и др. СI. perfringens— довольно толстые, с обрезанными под прямым углом краями палочки, образуют споры центральные или субтерминальные. Облигатные анаэробы. птимум роста 37°С. На поверхности агара через 24 часа они образуют колонии 0,02 мм в диаметре, круглой формы, с ровными или зубчатыми краями. Глубокие колонии (лежащие в толще агара) чечевицеобразной формы. На бульоне быстро (4 часа) дают помутнение, затем при оседании на дно беловатых хлопьев наступает просветление среды. Clostridiumperfringens энергично разлагает с обильным газообразованием лактозу, глюкозу, мальтозу и сахарозу. Характерен рост на молоке. Оно быстро и бурно свертывается; образующийся сгусток казеина разрывается пузырьками газа и подбрасывается вверх, иногда выталкивая пробку. Выделяют экзотоксин альфа-токсин (фосфолипаза С) 3
2 Исследуемым материалом служат: экссудат из раны, кусочки измененной ткани из раны, инородные тела, попавшие в рану, кровь при генерализованной инфекции. Материал собирают, соблюдая правила асептики и антисептики, стерильными инструментами, в стерильную, плотно закрывающуюся стеклянную посуду. Транспортировку проводят в специальных металлических контейнерах, в спецтранспорте в сопровождении медработника. При необходимости допускается хранение его в холодильнике при + 40С в течение 2-х часов.
3 Бульон Хоттингера с 0,5% глюкозы - для культивирования анаэробов, содержит редуцирующие вещества и кусочки вареного мяса для сорбции кислорода. Китт-Тароцци ДДС для культивирования анаэробов, содержит редуцирующие вещества и кусочки высушенных паренхиматозных органов для сорбции кислорода. Тиогликолевая среда ДДС для выделения клостридий. Содержит редуцирующие вещества, нейтрализующие кислород. Вильсона-Блэра ДДС для культивирования клостридий, содержит сульфит железа, который, восстанавливаясь под действием ферментовбактерий окрашивает их в черный цвет (Clostridiumperfringens через 4 часа). КА кровяной агар (5% дефибринированной крови барана или кролика). Возбудитель растет в виде крупных колоний (росинок) с блестящей поверхностью и ровными или изрезанными краями (R-форма), образуя прозрачную зону гемолиза вокруг колоний. 2
БИЛЕТ № 6
В микробиологическую лабораторию поступили испражнения 4-х месячного ребенка с предполагаемым диагнозом “ колиэнтеритэшерихиозной этиологии ”. При посеве на дифференциально-диагностическую среду выросли колонии малиново–красного цвета с металлическим блеском.
1. Дайте биологическую характеристику бактерий рода Escherichia.
2. Расскажите, как правильно собрать испражнения ребенка для проведения микробиологического исследования.
3. Перечислите питательные среды, на которые необходимо провести первичный посев биоматериала с целью выделения чистой культуры возбудителя и её идентификацию.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Возбудитель – кишечная палочка (Escherichiacoli), относятся к роду эшерихий (Escherichia), названному в честь Теодора Эшериха, семейства энтеробактерий. Короткие Гр (-) палочки, подвижные, спор не образуют, многие имеют капсулу, факультативные анаэробы. Кишечные палочки биохимическиактивны ферментирует углеводы (глюкозу и лактозу, маннит, арабинозу, галактозу и др.) с образованием кислоты и газа, образует индол, но не образует сероводород, не разжижает желатин. Не требовательна к питательным средам, температурный оптимум – 37С. Большинство штаммов являются нормальными представителями микрофлоры человека, но выделяют более 100 штаммов патогенной кишечной палочки: энтеропатогенныеE.сoli, энтеротоксигенные E. coli; энтероинвазивныеE.coli, энтерогеморрагическиеE.coli. Морфологически они ничем не отличаются. Различие заключается только в антигенном составе. Выделяют ЛПС (О), жгутиковые белковые (Н) и капсульные полисахаридные (К) АГ, обозначаемые арабскими цифрами. На практике используют соотношение О:Н, Выделено более 170 О-сероваров и около 60Н-сероваров, которые определяют в реакции агглютинации. 3
2 У грудных детей материал для исследования берут с пеленок (подгузника). Помещают в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия или с транспортной средой. Материал следует в течение 1-2 часов доставить в лабораторию. При невозможности такой доставки материал хранят в холодильнике при t0 + 40C не более суток, в транспортной сред до 48ч.
3 Эндо (ДДС для выделения энтеробактерий, содержит лактозу и индикатор фуксин, который окрашивает колонии Escherichiacoli и среду в малиновый цвет при утилизации бактериями лактозы.) Левина - предназначена для выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, Наличие в среде эозина и метиленового синего придают среде селективные свойства. При изменении рН среды под действием кислоты, образующейся при ферментации бактериями лактозы, индикаторы окрашивают колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет (кишечные палочки), некоторые колонии имеют зеленоватый металлический блеск. Плоскирева - (в импортном варианте МакКонки)– коммерческая среда для выделения шигелл, сальмонелл. В состав среды входят вещества-ингибиторы (бриллиантовый зеленый, желчные соли, йод), она фактически полностью подавляет рост грамположительной флоры, а в первые сутки значительно задерживает рост эшехирий, а так же другой обычно сопутствующей микрофлоры. КА. (ДДС для выявления гемолитических свойств бактерий, в частности, способность кишечной палочки выделять гемолизины является признаком патогенности). 2
БИЛЕТ № 7
Двое товарищей отправились на рыбалку. А так как питьевой воды захватили мало, то использовали воду из открытого водоема, причем один из них пил некипяченую воду. Через две недели он заболел, температура тела поднялась до 390 С. Больной был госпитализирован с диагнозом «Брюшной тиф ».
1. Назовите род возбудителей брюшного тифа?
2. Каковы морфологические и тинкториальные свойства возбудителя, образует ли он споры и выделяет ли экзотоксин?
3. Эпидемиология брюшного тифа: источник инфекции, механизм, факторы, пути передачи инфекции?
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Род Salmonella. Сальмонеллы — большая группа э нтеробактерий, среди которых различные серотипы - возбудители брюшного тифа, паратифов А, В и С и наиболее распространенных пищевых токсикоинфекций — сальмонеллезов.
2 Сальмонеллы мелкие, Гр (-),палочки с закругленными концами, располагающиеся по одному. Подвижны (перитрихи). Спор и капсул не образуют. факультативные анаэроб ы. не требовательны к питательным средам, хорошо растут на МПА и МПБ при 37оС и рН среды 7,2-7,4. На МПА образуют нежные, полупрозрачные, слегка выпуклые, блестящие колонии, в МПБ – дают равномерное помутнение. Для накопления производят посев на среды обогащения: среду Мюллера, Среду Кауфмана. Используют также элективные среды: 10-20% желчный бульон и среду Раппопорт, т.к. они содержат желчь, подавляющую рост посторонней микрофлоры. Споры не образуют и не вырабатывают экзотоксин. 3
3 Источник инфекции. Больной человек и бактерионоситель. Пути передачи. Возбудители инфекции передаются через предметы, загрязненные выделениями человека, через руки, воду, пищу. Часто возбудителей переносят мухи. В зависимости от путей передачи различают бытовые, водные, пищевые вспышки брюшного тифа и паратифов. 2
БИЛЕТ № 8
В клинику инфекционных болезней поступил больной с симптомами диареи (жидкий стул со слизью и прожилками крови). На основании клинических данных и характерного вида испражнений был поставлен диагноз: «Дизентерия ».
1. Назовите род и основные виды возбудителей дизентерии?
2. Каковы морфологические и тинкториальные свойства возбудителей дизентерии?
3. Назовите характер исследуемого материала и основной метод микробиологической диагностики дизентерии? В чем его сущность? Как собрать материал на исследование?
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Бактерии рода Shigella являются возбудителями бактериальной дизентерии, или шигеллеза. Дизентерия - полиэтиологическое заболевание. Его вызывают различные виды бактерий, названных шигеллами в честь А.Шига. В настоящее время они отнесены к роду Schigella, который подразделяется на четыре вида: 1. Григорева-Шига;2. Флекснера(дизентерии),3. Зонне; 4. Бойда. 2
2 По своим морфологическим свойствам шигеллы мало отличаются от эшерихий и сальмонелл. Однако они лишены жгутиков и поэтому являются неподвижными бактериями. Многие штаммы шигелл имеют пили. Различные виды шигелл идентичны по своим морфологическим свойствам. Возбудители дизентерии хемоорганотрофы, нетребовательны к питательным средам. На плотных средах при выделении из организма больного образуются, как правило, S-формы колоний. Шигеллы вида Schigellasonnei образуют два типа колоний - S-(I фаза) и R-формы (II фаза). Бактерии I фазы при пересевах образуют оба типа колоний. Шигеллы менее ферментативно активны, чем другие энтеробактерии: при сбраживании глюкозы и других углеводов образуют кислые продукты без газообразования. 2
3 Исследуемым материалом служат испражнения. Материал берут специальными стерильными металлическими петлями или пластмассовыми палочками. Основной метод диагностики – бактериологический – выделение чистой культуры и ее идентификация. 2
БИЛЕТ № 9
В микробиологическую лабораторию доставлен биоматериал (испражнения больного) с подозрением на кишечный йерсиниоз.
1. К какому семейству относятся бактерии Yersiniaenterocolitica?
2. Дайте биологическую характеристику этих бактерий.
3. Опишите культуральные свойства Yersiniaenterocolitica.
6. Проведите ориентировочную реакцию агглютинацию (на стекле).
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Род Yersinia относится к семейству энтеробактерий, включает несколько видов: Yersiniapestis - возбудитель чумы; Yersiniapseudotuberculosis - возбудитель псевдотуберкулеза, Yersiniaenterocolitica – возбудитель кишечногоиерсинеоза. 2
2 Мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. Средний размер 0,8-1,2 × 0,3-0,7 мкм, но в старых культурах могут быть длиннее и иметь вид нитей. Подвижны. Спор не образуют. 2
3 Факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых питательных средах. Наиболее благоприятна для роста температура 22-28° С. На МПА образуют мелкие блестящие бесцветные колонии (росинки), увеличивающиеся при удлинении сроков выращивания (при 22-25° С). При культивировании при 37° С колонии непрозрачны, имеют неровный фестончатый край и выпуклый центр. Могут расти при высоком содержании натрия хлорида в среде (до 4%). 2
1.4. Поставить на поднос (покрытие для столов): спиртовку, маркер,, чашки Петри с исследуемой культурой, диагностическая сыворотка, физраствор. 1
2.1. Взять предметное стекло, обезжирить его. 1
2.2. На нижнюю поверхность стекла нанести разметку для размещения 2-х капель. 1
2.3. Положить стекло в чашку Петри либо в лоток на темную подложку 1
2.4. Нанести на стекло одну каплю агглютинирующей сыворотки и одну каплю физраствора. 1
2.5. Бактериологической петлей внести культуру в первую и вторую капли, тщательно растереть
2.6. Тщательно и мягко покачивать стекло, для перемешивания ингридиентов в течение 5 мин 1
2.7. Наблюдать и объяснить результат
БИЛЕТ № 10
В микробиологическую лабораторию поступили испражнения больного с ярко выраженными клиническими симптомами кишечной инфекции. При посеве на 1% щелочную воду, на поверхности среды образовалась нежная голубоватая пленка.
1. Для какого возбудителя 1% щелочная среда является избирательной?
2. Как правильно провести забор материала (испражнений) при подозрении на заболевание, вызванное данным возбудителем?
3. Какие диагностические признаки данного возбудителя можно выявить микроскопическим методом?
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1. 1% щелочная (пептонная) вода является избирательной (элективной) для холерного вибриона, а рост в виде нежной голубоватой пленки - характерным для этого возбудителя. 2
2. При подозрении на холеру испражнения (последнюю порцию) в количестве 10-20 мл собирают металлической, деревянной лопаточкой и переносят в стерильные стеклянные баночки с плотно закрывающимися пробками (под пробки закладывают пергаментную бумагу). Сверху пробку обвязывают двойным слоем вощеной или пергаментной бумаги. Забор материала можно проводить резиновым катетером или специальной алюминиевой петлей. Время от взятия материала до проведения посевов не должно превышать 3-х часов. Лучше материал сразу брать в 1% пептонную воду, которая является для холерного возбудителя и средой накопления. 3
3. При микроскопировании окрашенных по Граму препаратов наблюдают характерные Гр- извитые формы (вибрионы), которые проявляют подвижность при изучении их в препаратах “висячая” и “раздавленная” капли. 2
БИЛЕТ № 11
У работницы по производству кисточек для бритья на тыльной стороне левой кисти руки появились зудящие пятнышки, которые через несколько часов превратились в пузырьки с темными содержимым. При вскрытии пузырьков образовывались безболезненные язвы. На основании типичной клинической картины врач-инфекционист поставил диагноз: «Кожная форма сибирской язвы ». Для подтверждения клинического диагноза необходимо микробиологическое исследование.
Задания:
1. Назовите род возбудителя сибирской язвы?
2. Каковы морфологические и тинкториальные свойства возбудителя сибирской язвы.
3. Эпидемиология сибирской язвы: источник инфекции, механизмы, факторы, пути передачи инфекции?
6. Поставьте реакцию кольцепреципитации для определения сибиреязвенного антигена.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Возбудитель – Bacillusantracis относится к роду бацилл. 1
2 Возбудитель – Bacillusantracis, это грамположительная (в мазках синей окраски) неподвижная палочка. К питательным средам не требовательна и на них образует колонии, в виде нитей отходящих от центра, в результате этот рост часто сравнивают с «локонами» или «львиной гривой ». Особенности структуры являются факторами патогенности, т.е. тем, что объясняет клиническое течение. При попадании в организм образует капсулу – она охраняет возбудителя от фагоцитоза; вне организма, при действии неблагоприятных факторов внешней среды, возбудитель образует спору, что делает его чрезвычайно устойчивым. 2
3 Источник заражения – почва (является естественным резервуаром, поэтому и заболевание называется сапрозоонозом), крупный и мелкий рогатый скот, лошади, верблюды, дикие животные – эти животные выделяют возбудителя со своими биологическими жидкостями. Пути передачи – контактный (через заражённые предметы быта продуктами жизнедеятельности животных или почвой), алиментарный (через заражённую пищу ), воздушно-пылевой (через воздух), трансмиссивный (через эктопаразитов). 2
2.1 Поставить в штатив 3 пробирки, маркировать. Зажечь спиртовку 1
2.2. Набрать в пипетку преципитирующую сыворотку и внести в пробирки №1, № 2 и № 3 приблизительно по 0,5 мл. 1
2.3. Пипетку сбросить, взять новую. 1
2.4. Набрать в пастеровскую пипетку исследуемый раствора термоантигена. 1
2.5. Наклонить пробирку №1 и наслоить раствор по стенке. Осторожно вернуть пробирку в вертикальное положение. 1
2.6 Пипетку сбросить, взять новую 1
2.7. Набрать в пастеровскую пипетку стандартный раствора термоантигена 1
2.8. Наклонить пробирку №2 и наслоить раствор по стенке. Осторожно вернуть пробирку в вертикальное положение 1
2.9. Пипетку сбросить, взять новую. 1
2.10. Набрать в пастеровскую пипетку термоэкстракт без антигена. 1
2.11. Наклонить пробирку №3 и наслоить раствор по стенке. Осторожно вернуть пробирку в вертикальное положение. 1
2.12. Пипетку сбросить, взять новую. 1
2.12 Наблюдать за ходом реакции в течение 3-5 минут. 1
2.13 Учесть результат, начав с контролей.
БИЛЕТ № 12
В хирургическом отделении военно-медицинского госпиталя для инвалидов находился больной с незаживающей раной, из которой длительное время высеивалась культура Pseudomonasaeruginosa. В других палатах находились послеоперационные больные после так называемых «чистых операций», у четверти этих пациентов в раневом отделяемом при бактериологическом исследовании также была выделена аналогичная культура Pseudomonasaeruginosa.
1. К каким штаммам можно отнести названную культуру? Поясните ответ.
2. Каковы морфологические и тинкториальные свойства возбудителя Рs. aeruginosa выделенного изорганизм больного?
3. Какие антигены имеет возбудитель синегнойной палочки?
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 P. aerugenosa. Можно отнести к госпитальным штаммам, так как она была выделена у нескольких больных, у которых при первичном обследовании не обнаружилась. 2
2 Это прямые или слегка изогнутые палочки средних размеров, подвижные (лофотрихи или монотрихи), грамотрицательные, облигатные аэробы. Спор не образуют, имеют тонкую слизистую капсулу. Синегнойная палочка нетребовательна к питательным средам, хорошо растет на искусственных питательных средах. На мясопептонном бульоне дает рост в виде помутнения с сероватой пленкой на поверхности. На плотных питательных средах формируются крупные полупрозрачные колонии флюоресцирующего зеленоватого цвета. При этом в толщу среды диффундируют синевато-зеленые водорастворимые пигменты – пиоцианин. Культура синегнойной палочки при культивировании на питательных средах имеет кисловато-сладкий ароматный запах (специфический запах жасмина). 3
3 1) соматический О-антиген, группоспецифический, по его строению делится на серогруппы; 2) жгутиковый Н-антиген; 3) М-антиген внеклеточной слизи.
БИЛЕТ № 13
У мужчины 40 лет участковый врач обнаружил острую кишечную инфекцию (ОКИ), которая сопровождалась рвотой, поносом, признаками общей интоксикации. За несколько часов до появления симптомов этот больной съел рыбный салат, оставленный на ночь в теплом помещении. Врач заподозрил пищевое отравление, вызванное, скорее всего, условно-патогеннымиэнтеробактериями. При бактериологическом исследовании в рвотных массах и остатках салата были обнаружены бактерии рода Proteus.
1. Дайте биологическую характеристику бактерии рода Proteus.
2. Расскажите, что является исследуемым материалом. Правила его взятия, транспортировки и хранения.
3. Перечислите этапы бактериологического исследования и выберите питательные среды, на которые необходимо провести посев.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Протей (лат. Proteus) — род грамотрицательных, споронеобразующих, факультативно анаэробных бактерий. Представитель нормальной, условно-патогенной микрофлоры кишечника человека. Протеи имеют вид мелких, 0,3 на 3 мкм, нитевидных палочек. Они отличаются очень активной подвижностью. Протеи обладают токсическими (вырабатывают эндотоксин) и гемолитическими свойствами. Протеи считаются санитарно-показательными бактериями. Количество обнаруживаемыхProteusmirabilis рассматривают как показатель фекального загрязнения, а Proteusvulgaris — как показатель загрязнения объекта органическими веществами. В зависимости от способности продуцировать индол, протеи делятся на индол-отрицательные (Proteusmirabilis, Proteushauseri, Proteuspenneri) и индол-положительные (Proteusvulgaris, Proteusinconstans и другие). Протеи способны продуцировать уреазу, Три вида из рода протей — Proteusmirabilis, Proteusvulgaris и Proteuspenneri являются патогенными для человека, причем 75–90 % инфекций вызывает Proteusmirabilis. 3
2 Материалом для исследования является испражнения, рвотные массы.промывные воды желудка. Материал собирают также, как и при других кишечных инфекциях. 1
3 Этапы бактериологического исследования: 1 день. Посев на чашки Петри со средой Эндо и Плоскирева.2 день. Отмечают характер роста на питательных средах (роение - вуалеобразный налет). Выделяют отдельные колонии или часть сплошного роста на комбинированную среду Рассела (с мочевиной) или среду Олькеницкого, делают посев в конденсационную воду пробирки со скошенным агаром (по Шукевичу). 3 день. Делают мазок и окрашивают его по Граму. При наличии грамотрицательных мелких палочек учитывают характер роста на среде Рассела или Олькеницкого и наличие роста в пробирке с посевом по Шукевичу. Протей не ферментирует лактозу, сбраживает глюкозу с образованием газа, большей частью гидролизует мочевину. В пробе по Шукевичу - рост по всей поверхности скошенного агара. Производят посев на дополнительные среды "пестрого ряда": маннит, бульон (для определения индолообразования и образования сероводорода вкладывают в пробирку бумажки, смоченные соответствующими реактивами), полужидкий агар, желатин. Делают посев на среду с аминокислотой фенилаланином. 4 день. Учитывают результаты посева: протей не ферментирует маннит (большинство штаммов), образует индол и сероводород, подвижен, разжижает желатин и образует фермент фенилаланиндезаминазу, изменяющую цвет в пробирке с аминокислотой фенилаланином. При указанных результатах можно отнести выделенную культуру к роду Proteus. Заключительный этап - постановка реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими сыворотками к бактериям рода Proteus. Сначала ставят реакцию агглютинации с поливалентными О-сыворотками. При положительной реакции с одной из них повторяют реакцию агглютинации с каждой из типовых О-сывороток, входящих в поливалентную. После определения О-группы проводят реакцию с Н-сыворотками и определяют серовар. Выдают ответ: "Выделены Proteus". 2
ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ № 14
В микробиологическую лабораторию поступил материал от больного ребенка с подозрением на дифтерию зева. При микроскопическом исследовании препарата, окрашенного по Лёффелеру, выявлены характерно расположенные палочки с более интенсивной окраской по краям.
1. Дайте биологическую характеристику возбудителю дифтерии.
2. Расскажите, что является исследуемым материалом при дифтерии. Правила его взятия, транспортировки и хранения.
3. Выберите питательные среды, на которые необходимо провести посев при подозрении на дифтерию.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Возбудителем дифтерии является Corynebacteriumdiphtheriae. Corynebacterium относится к отделу Firmicutes, роду Corynebacterium. Возбудитель дифтерии характеризуется полиморфизмом: тонкие, слегка изогнутые палочки (наиб.распространенные) встречаются кокковидные и ветвящиеся формы. Бактерии нередко располагаются под углом друг к другу. Они не образуют спор, не имеют жгутиков, у многих штаммов выявляют микрокапсулу. Характерная особенность - наличие на концах палочки зерен волютина (обусловливает булавовидную форму). Возбудитель дифтерии по Граму окрашивается положительно.
Культуральные свойства. Факультативный анаэроб. Микроб растет на специальных питательных средах, например на среде Клауберга (кровяно-теллуритовыйагар), на которой дифтерийная палочка даёт колонии 3 типов: а) крупные, серые, с неровными краями, радиальной исчерченностью, напоминающие маргаритки; б) мелкие, черные, выпуклые, с ровными краями; в) похожие на первые и вторые. В зависимости от культуральных и ферментативных свойств различают 3 биологических варианта C.diphtheriae: gravis, mitis и промежуточныйintermedius. Высокая ферментативная активность Ферментируют глк и мальтозу с образованием кислоты, не разлагают сахарозу, лактозу и маннит. Не продуцируют уреазу и не образуют индол. Продуцирует фермент цистиназу, расщепляющую цистеин до H2S. Образует каталазу, сукцинатдегидрогеназу. 3
Факторы патогенности. Экзотоксин, нарушающий синтез белка и поражающий в связи с этим клетки миокарда, надпочечников, почек, нервных ганглиев.
2 Материалом для исследования при дифтерии могут быть пленки и слизь из зева и носа, а при редких локализациях дифтеритических воспалений - из глаза, уха, с поверхности раны и кожи. Материал собирают стерильным сухим ватным тампоном или смоченным 5% раствором глицерина в физиологическом растворе с рН-8 из зева на границе поражённого участка и здоровой слизистой оболочки натощак или не раньше, чем через 2 часа после еды, до начала приёма антибиотиков. Материал собирают также сухим тампоном из носа, причём посев следует провести не позднее 2-3 часов после забора. Для транспортировки и хранения используют т