В микробиологическую лабораторию поступил материал - две пробы по 5 мл крови: одна проба - кровь больного, 56 лет, доставлена в лабораторию через три часа после взятия; другая - кровь ребенка, 10 лет, доставлена в лабораторию тотчас же после взятия. При посеве на питательные среды первой пробы крови видимый рост не выявлен. Из второй пробы выделен золотистый стафилококк. Медицинский лабораторный техник информировал лечащего врача, что результат анализа крови взрослого может быть недостоверным.
1. Дайте биологическую характеристику бактерий рода Staphylococcus
2. Почему медицинский лабораторный техник счел результат анализа крови взрослого пациента недостоверным? Расскажите о правилах взятия и работы с кровью и транспортировки в лабораторию.
3. Перечислите питательные среды, на которые необходимо провести первичный посев с целью выделения чистой культуры возбудителя и её идентификацию.
ЭТАЛОН ОТВЕТА
1 Наибольшее медицинское значение имеют S. aureus, S.epidermitidis и S. saprophyticus. Стафилококки (от греч. staphyle - виноградная гроздь) имеют вид круглых шаров диаметром 0,5-1,5 мкм. Размножаясь, образуют скопления в виде грозди винограда. Такая форма является результатом деления микробов в различных плоскостях. Однако в гное встречаются единичные и парные кокки. Стафилококки неподвижны, не имеют спор, при специальных условиях культивирования образуют микрокапсулу, грамположительны. Факультативные анаэробы. Неприхотливы, растут на простых питательных средах. Обладают высокой биохимической активностью (сахаролитической, протеолитической). Антигенная структура - сложная. Обладают разнообразными факторами вирулентности, благодаря чему они могут вызывать более 100 различных заболеваний. На ЖСА (элективная среда для выявления лецитиназной активности), колонии круглые, выпуклые, с ровными краями, диаметром 2 – 4 мм; окрашены в белый (эпидермальный стафилококк) или различные оттенки желтого цвета (золотистый стафилококк), с перламутровым венчиком вокруг. Подавляющее большинство штаммов S. aureus и некоторые штаммы S. epidermidis растворяют эритроциты, образуя прозрачную зону гемолиза вокруг колоний при росте на кровяном агаре 3
2 Результат микробиологического исследования крови взрослого больного в данном случае может быть недостоверным, так как у него кровь была взята в малом объёме (у взрослых необходимо брать от 20 до 30 мл) и поздно доставлена в лабораторию. С достоверностью можно утверждать, что кровь стерильна, если на микробиологическое исследование: кровь (не менее 20-30 мл крови у взрослого и не менее 5 мл – у ребенка) доставлена в лабораторию тотчас же после взятия вовремя подъема температуры. Если взятие крови проводилось неоднократно - в течение 24 часов не менее 3-4 раз. Нельзя считать результат микробиологического исследования крови достоверным, при взятии у взрослого всего 5 мл крови, однократно и при поздней доставки пробы крови в лабораторию. Проводят посев крови у постели больного в жидкую питательную среду или «двойную среду». Флаконы с посевами немедленно доставляют в лабораторию в металлических контейнерах. Транспортировка проводится персоналом лечебного учреждения, специальным транспортом. Все манипуляции с кровью необходимо выполнять в перчатках. Рабочие поверхности столов должны быть покрыты материалом, который легко мыть, дезинфицировать и прожигать. Если кровь попала залить это место 6% раствором Н2О2 на 30 мин или другим дезинфектантом. Весь отработанный материал и посуду обеззараживают автоклавированием после предстерилизационной очистки (кровь залить 0,5% гипохлоритом Na на 1 час). Перчатки сбрасывают в контейнер, руки тщательно моют с водой и мылом. 2
3 Рекомендуют производить посев крови на несколько питательных сред (минимум две: двойная среда и среда для контроля стерильности), чтобы обеспечить рост максимальному количеству возбудителей. Для достижения результата необходимо сеять достаточное (10мл – взрослые, 5 – дети) количество крови в большой объем ЖПС – для разведения и снижения бактерицидных свойств крови. Двойная среда - состоит из скошенного агара и жидкой части, куда производят посев. Среда для контроля стерильности – позволяет выявить анаэробов. Содержит индикатор для контроля анаэробных условий. «Среда со стаканчиком» - для предварительного лизиса клеток крови. Посев делают в дистилированную воду с агаром, оставляют на 30-40 мин для лизиса клеток, потом переворачивают флакон, содержимое «стаканчика»(концентрированная питательная среда) соединяется с засеянной водой. Это позволяет выделять бактерий при внутриклеточной локализации (незавершенный фагоцитоз), сорбированные на эритроцитах. Полужидкая среда Тароцци – для культивирования анаэробов, содержит редуцирующие вещества и кусочки высушенных паренхиматозных органов для сорбции кислорода. Жидкая среда Сабуро - для выделения грибков. Культивируют не менее 6 недель, ежедневно просматривают, при наличии роста делают мазки, пересев. При отсутствии роста на 10 день, дают отрицательный ответ, но флаконы продолжают просматривать 3 раза в неделю для регистрации возможного замедленного роста. 2