МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
ЗЛАТОУСТОВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ТЕХНИКУМ
Группа Лаборанты
Курс 4
Специальность Лабораторная диагностика
ПМ (МДК): 04 Проведение
лабораторных микробиологических
исследований
Работу защитил с оценкой_______
______________________________
(подпись руководителя)
«__»______________20__г.
КУРСОВАЯ РАБОТА
НА ТЕМУ: Серодиагностика бруцеллеза.
Выполнила студентка
Валиева Дания Рустемовна
Подпись_____________
Проверила
Айкашева Нина Федоровна
Подпись_____________
«__»_____________20__г.
Златосут, 2018
Содержание
Введение ……………………………………………………………………4
Основная часть:
Глава 1. Теоретическая часть. Изучение свойств возбудителей бруцеллеза и методов их обнаружения.
1.1. Биологические свойства возбудителя …………………………………....6
1.2. Роль иммунного ответа для проведения серологического метода исследования
1.3. Серологические исследования. основные типы серологических реакций ………………………………………..…..8
Глава 2. Практическая часть. Микробиологическая диагностика бруцеллеза
Нормативные документы
2.1. Отбор и транспортировка проб клинического материала……………14
2.2. Методы микробиологического исследования
Глава 3.исследовательская работа
3.1Сравнительный анализ реакций хедл и райта
3.2Анализ статистических данных…………………………………………..21
Заключение………………………………………………………………...22
Список использованной литературы………………………………........23
Приложение………………………………………………………………..24
Введение
Бруцеллёз сельскохозяйственных животных относится к особо опасным инфекциям, так как при уходе за больными животными, а так же при употреблении не обезвреженных мяса, молока, масла, сыра и других продуктов питания, полученных от больных животных, может заразится и человек.
Бруцеллёзу подвержены все виды сельскохозяйственных, домашних и диких животных. Кроме того, бруцеллёз может поражать некоторые виды холоднокровных и членистоногих. Это обусловлено приспособляемостью и способностью возбудителя бруцеллеза размножатся в организме животных и долго сохранять жизнеспособность во внешней среде.
Являясь широко распространенной инфекцией, бруцеллёз наносит большой экономический ущерб, который характеризуется массовыми абортами и яловостью больных бруцеллёзом животных, эндометритами, задержанием последа, орхитами, рецидивирующей лихорадкой, Снижением жизнеспособности приплода, уменьшением продуктивности животных, затратой больших сил и средств при его ликвидации. у лошадей – преимущественно бурситами в области холки и воспалением связок затылочного сустава. B.ovis вызывает эпидидимит у баранов, яловость, аборты и рождение нежизнеспособных ягнят.
Ущерб, причиняемый бруцеллёзом, усугубляется заболеванием людей, которое зачастую ведёт к потере трудоспособности и даже пожизненной инвалидности.
Основным источником заражения являются больные бруцеллёзом животные того же вида, но могут быть и другие. Например, у крупного рогатого скота и свиней выявили бруцеллы козье-овечьего вида (B. melitensis). Так как у животных и человека могут выделятся все виды бруцелл, следует признать наличие в природе естественной миграции бруцелл.
Кроме животных восприимчивы птицы, рептилии, амфибии и даже рыбы. Зарегистрирована восприимчивость к бруцеллёзу более 60 видов позвоночных животных, 30 видов кровососущих клещей, двух видов блох, двух видов комаров, а так же домовых мух. Бруцеллы найдены в личинках подкожного овода у северных оленей.
Необходимо отметить, что первоисточником бруцеллёзной инфекции являются не дикие, а сельскохозяйственные животные. Возможно, бывают отдельные случаи переноса бруцеллёза от диких животных к сельскохозяйственным, но они не играют большой роли в общей эпизоотической цепи заболевания.
Историческая справка
Бруцеллы обнаружил в 1886 г. Д. Брюс, микроскопируя мазки из селезёнки солдата, умершего от мальтийской лихорадки, а в 1887 г. он выделил чистую культуру и возбудителя назвал Micrococcus melitensis. Банг и Стрибольт (1897) из околоплодной жидкости коровы выделили второй вид – B.abortus bovis; Траум (1914) от абортировавшей свиньи - третий вид-B.abortus suis. В 1920 г. Майер и Фезье объединили эти три микроба в одну группу и предложили отнести эти микроорганизмы к роду Brucella и назвали их бруцеллами в честь открывшего их Брюса.
1953 г. Бадл, изучая аболевание инфекционного эпидидимита баранов, выделил B. ovis. 1957 г. Стоеннерг и Лакман в лесах их трупов древесных крыс выделил микроорганизмы идентичные бруцеллам, назвал B. neotomae. В 1966 г. К. Майкл выделил возбудитель бруцеллёза собак - B.canis.
Актуальность темы.
Бруцеллез - особо опасная и социально значимая зоонозная инфекция, приносящая значительный экономический ущерб и обусловливающая высокий уровень инвалидизации больных.
Естественным резервуаром бруцелл в природе являются животные. Соответственно, эпидемиология бруцеллеза целиком определяется его эпизоотологией, а инфекция является типичным зоонозом.
Объект исследования: патогенные бруцеллы-возбудители бруцеллеза
Цель: изучение серологического метода диагностики бруцеллеза
Задачи:
1. Изучить роль иммунного ответа при заражении бруцеллезем (теор)
2. Изучение условий,ингридиентов. Проведения серологического метода
3. Сравнительный анализ реакций хедлсона и реакции райта
Глава 1
1.1. Биологические свойства возбудителя
Морфологические свойства.
Бруцеллы – мелкие кокковидные или палочковидные бактерии. Входят в секцию 4 (грамотрицательные аэробные палочки и кокки), род Brucella, который включает в себя шесть видов: B.abortus - возбудитель бруцеллёза крупного рогатого скота; B.melitensis - овец и коз; B.Suis - свиней; B.canis - собак; B. neotomae - кустарниковых крыс; B.ovis - инфекционного эпидимита баранов. По антигенным и биохимическим свойствам подразделяют B. abortus на девять биоваров, B. melitensis-на три и B.suis- на пять биоваров. Наибольшее значение в патологии бруцеллёза имеют бруцеллы первых трёх видов. Они относят к самым мелким коккобактериям (длина палочек приближается к толщине). Размеры, толщина - 0,3- 0,6мкм, длина - 0,6-1,5мкм. В окрашенных препаратах располагаются одиночно, парами или небольшими группами. Неподвижны, спор не образуют. Мукойдные и гладкие варианты синтезируют нежную капсулу, грамотрицательные. Окраска по грамму не является определяющей, связано с размерами бруцелл, используют дифференциальные методы окраски бруцелл - окраске по Козловскому, окраска по Стампу. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. При окраске по Козловскому бруцеллы красные, другие микроорганизмы и фон препарата синего цвета.
Культуральные свойства.
Возбудитель бруцеллёза является факультативным анаэробом. Бруцеллы В.abortus и B.ovis – микроаэрофилы, первые их генерации выращивают в условиях при содержании 10-15% СО2. Выделяемые из первичного материала бруцеллы растут очень медленно, в среднем 15-30 суток, старые лабораторные культуры вырастают уже через 24-48 часов.
Бруцеллы могут расти на обычных питательных средах при 36°-38°С и ph 6,8-7,2, однако для их культивирования используют специальные среды: мясопептонный печёночный бульон (МППБ), мясопептонный печёночно – глюкозный – глицериновый агар (МППГГА), печёночно – глюкозно – глицериновый бульон агар (ПГГП, ПГГА) с 1% глюкозы и 2-3% глицерина, картофельный агар и др.
Типичные вирулентные штаммы (S-форма) на поверхности агара образуют мелкие, 2-3мм в диаметре, круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком колонии с возрастом цвет ржавчины; в бульоне – слабое равномерное помутнение, и пристеночное кольцо, в дальнейшем – небольшой осадок.
Авирулентные варианты (R-форма) на агаре образуют шероховатые колонии, в бульоне – неравномерное помутнение с просветлением и крошковатым осадком. На агаре с кровью бруцеллы гемолиза не дают, пигмент не синтезируют.
Биохимические свойства.
Биохимическая активность у бруцелл выражена слабо. Не изменяют сахара короткого пёстрого ряда. Они утилизируют углеводы, но не образуют кислоту и газ в количествах, достаточных для их идентификации. Нитраты редуцируют в нитриты. Молоко не свёртывают, желатин и свёрнутую сыворотку не разжижают. Индол не образует. Некоторые виды гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака. Ферментируют глюкозу, арабинозу, декстрозу, левулезу и др. с образованием кислоты.
B.abortus и особенно B.suis при росте выделяют сероводород; B. melitensis образует его в незначительном количестве на средах серосодержащими аминокислотами. Могут продуцировать каталазу, пероксидазу, липазу, фосфотазу.
Патогенные свойства.
Патогенное действие связано с образованием эндотоксинов, а также гиалуронидазы, каталазы, уреазы. Бруцеллы высокоинвазивны, могут проникать через не поврежденные слизистые покровы пищеварительного тракта, лёгких, глаз и кожу. Восприимчивы овцы, козы, крупный рогатый скот, буйволы, свиньи, лошади, мулы, верблюды, северные олени, собаки, кошки и многие дикие животные (лоси, косули, сайгаки и др.). Молодняк до половой зрелости более устойчив. Каждый вид бруцелл поражает определённый вид животного. Но бруцеллы могут мигрировать, заражая животных других видов, например, B.melitensis – крупный рогатый скот, свиней и лошадей, B. abortus – коз, овец, лошадей и свиней, B.suis – крупный и мелкий рогатый скот, лошадей. Для человека наиболее опасна B.melitensis.
Больные животные выделяют возбудителя с молоком, абортированным плодом, околоплодной жидкостью, влагалищной слизью, мочой, калом.
Из экспериментальных животных к бруцеллёзу чувствительны морские свинки и белые мыши. У мышей после заражения иногда развивается септицемия, морские свинки абортируют, худеют, у них выпадают волосы, возникает генерализованная инфекция.
У многих животных через 1-2 года наступает самовыздоровление.
Эпидемиология и патогенез
Формирование иммунного ответа, иммунитет при бруцеллезе
Профилактика и лечение (коротко)
1.2.Серологические исследования
Серологические исследования широко используются в медицине для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней. Установление диагноза с помощью серологические исследования называют серологической диагностикой.
Начало серологического исследования положено в конце прошлого столетия, после того как было установлено, что соединение антигена с антителом сопровождается рядом доступных визуальному наблюдению феноменов - агглютинацией, преципитацией или лизисом. Появилась возможность специфического распознавания антигенов или антител, если один из этих компонентов известен.
Начиная с 40-х гг. 20 в. в серологических исследованиях стали применять иммунохихмические методы, а именно метку антител флюорохромами изотопами или ферментами. Это способствовало значительному повышению чувствительности серологические реакций, т. е. возможности выявления минимальных количеств антигенов или антител. Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные виды антител.
Серологические исследования лат. serum сыворотка + греч. logos учение) — методы иммунологии, изучающие специфические свойства крови человека или животных с целью выявления антигенов или антител с помощью серологических реакций.
В 1897 г. Ф. Видаль сообщил, что сыворотка крови больных брюшным тифом избирательно агглютинирует брюшнотифозные бактерии и поэтому эта реакция может быть применена для лаб. диагностики брюшного тифа. В том же году было показано, что фильтраты культур чумных, брюшнотифозных и холерных бактерий при соединении с соответствующими иммунными сыворотками образуют хлопья, или преципитат.
Реакция преципитации оказалась пригодной для обнаружения любых белковых антигенов. В 1900—1901 гг. К. Ландштейнер нашел, что в эритроцитах людей имеются два различных антигена (А и В), а в сыворотках крови два агглютинина, что способствовало применению реакции гемагглютинации для определения групп крови.
Открытие Ж. Борде в 1898 г. комплемента, в присутствии которого иммунные антиэритроцитарные сыворотки приобретали способность лизировать эритроциты, позволило разработать реакцию связывания комплемента, широко используемую в инфекционной и неинфекционной иммунологии.
1.3.Основные типы серологических реакций