по получению первичных профессиональных навыков

Дневник

По учебной практике

по получению первичных профессиональных навыков

«ЛАБОРАНТ ХИМИКО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА»

Выполнил: студент 1 курса 3 группы

Иванов И.И.

Руководитель: к.б.н., доцент

Калдыркаев А.И.

Начат: 25.06.2018

Закончен: 21.06.2018

Ульяновск – 2018 г.

Дата	Вид проводимых работ и полученные результаты	Примечания
25.06.2018	Тема.Техника безопасности в лаборатории и при работе с бактериальными культурами. Правила работы и поведения в лаборатории Особенностью бактериологических работ является постоянное соприкосновение сотрудников лаборатории с заразным материалом, культурами патогенных микробов, зараженными животными и выделениями больных. Поэтому все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений. 1. В помещение бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды—халата и белой шапочки или косынки. 2. Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи. 3. Запрещается выходить за пределы лаборатории в ха­латах или надевать верхнее платье на халат. 4. В помещении бактериологической лаборатории катего­рически запрещается курить, принимать пищу, хранить про­дукты питания. 5. Весь материал, поступающий в бактериологическую ла­бораторию, должен рассматриваться как инфицированный. 6. При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность: банки, содержащие мате­риал для исследования, при получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо на стол, а на подносы или в кюветы. 7. Перенос жидкостей, содержащих патогенные мик­робы, производят пипеткой с грушей. 8. О случаях аварии с посудой, содержащей заразный ма­териал, или проливания жидкого заразного материала надо немедленно сообщать заведующему лабораторией или его за­местителю. Мероприятия по обеззараживанию загрязненных патогенным материалом платья, частей тела, предметов ра­бочего места осуществляются немедленно. 9. При исследовании зараженного материала и работе с патогенными культурами микробов необходимо строго со­блюдать общепринятые в бактериологической практике тех­нические приемы, исключающие возможность соприкоснове­ния рук с заразным материалом. 10. Зараженный материал и ненужные культуры подле­жат обязательному уничтожению, по возможности в тот же день. Инструменты, использованные в работе с заразным материалом, тотчас после их употребления дезинфицируют, как и поверхность рабочего места. 11. При выполнении бактериологических работ нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с за­разным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют, а за­разный материал и культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят на хранение в запирающийся реф­рижератор или сейф. 12. Работники бактериологических лабораторий подлежат обязательной вакцинации против инфекционных болез­ней, возбудители которых могут встретиться в исследуемых объектах.   Тема. Лабораторная посуда и аппаратура. 1. Лабораторная посуда Пробиркодержатель- необходим для безопасного нагревания пробирки при проведении химической реакции. Фарфоровая чашка и пестик – предназначена для измельчения и смешивания исследуемого материала (продукты, образцы почвы и др.) также для выпаривания (кристаллизации). Колбы- для приготовления сред, для выращивания (культивирования микроорганизмов,) для приготовления растворов, проведения реакций Мерный цилиндр Пробирки Пипетки 1,2, 5, 10 мл Штативы лабораторный, Штатив для пробирок Химический стакан Спиртовка Бактериологическая петля. Пинцеты Ножницы Банка для грязной ваты Банка для грязных пробирок 2. Лабораторное оборудование Стол с антикоррозийным и водоотталкивающим покрытием (нержавейка, алюминий, пластик) Термостат, холодильник, центрифуги, микроскоп, автоклав, сухожаровой шкаф, бактерицидная лампа, секундомер, микроскоп, водяная баня.
25.06.2018	Тема.Методы стерилизации. Изучение методов стерилизации: фламбирование, стерилизация в сухажаровом шкафу, автоклавирование, тиндализация, стерилизация текучим паром. Стерилизация фильтрованием.   Изучение работы автоклава, сухо жарового шкафа. Стерилизация в автоклаве питательных сред, убивка материала (чашки Петри, пробирки с бактериальными культурами). Подготовка посуды для стерилизации в сухожаровом шкафу.
227.06. 2018	Тема.Питательные среды. Требования, предъявляемые к ним. Изучение питательных сред. По консистенции различают: жидкие,: полужидкие, плотные По составу питательные среды для культивирования микроорганизмов делятся на - натуральные (естественные) - полусинтетические -синтетические По назначению среды подразделяются: на среды общего назначения (универсальные) и специальные. К специальным питательным средам относятся (предлож. Виноградским): элективные (избирательные) среды, дифференциально-диагностические (индикаторные) питательные среды, среды накопления (обогащения)
28.06. 2018	Тема.Приготовление питательных сред. К простым средам относятся мясопептонный бульон, мясо­пептонный агар, мясопептонный желатин (МПЖ). Все простые питатель­ные среды готовят на мясной воде. Для ее приготовления мясо отде­ляют от жира и фасций, измельчают, заливают водой в соотношении 1:2 и кипятят в течение 30-60 мин. Затем фильтруют, доливают до перво­начального объема и стерилизуют при давлении 1,5 атм в течение 30 мин. Приготовление МПБ состоит в следующем. К 1 л мясной воды добавляют 1 % Пептона, 0,5 % Поваренной соли. Устанавливают реак­цию среды (рН 7,2-7,4), кипятят, фильтруют, разливают по колбам и стерилизуют при давлении 1,5 атм в течении 15-20 мин. Большинство питательных сред идет в коммерческой упаковке в виде порошков, инструкция по приготовлению и стерилизации обычно находится на упаковке.
29.06.2018	Тема. Техника посева микроорганизмов на плотные жидкие и полужидкие питательные среды. Бактериологический метод—выделение чистых культур микробов и их последующая идентификация — имеет боль­шое значение в диагностике инфекционных заболеваний, при изуче­нии санитарно-гигиенического состояния объектов внешней среды (вода, воздух, почва, продукты питания) и исследова­нии их по эпизоотическим и эпидемиологическим показателям на зараженность патогенными видами микробов. Однако первым этапом этой методики является посев или пересев бактериальной культуры на различные типы питательной среды. Материалом для посева могут быть пересеваемые культу­ры бактерий, различные выделения животных и человека, ткани трупа, вода, почва, продукты питания. Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку—«зеркало». Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в боль­шом или точно отмеряемом объеме. Схема пересева культуры микробов из пробирки в пробирку. Способ взятия плотного материала определяется его кон­систенцией. При посевах чаще всего пользуются бактериаль­ной петлей. Все манипуляции, связанные с посевом и выделением микробных культур, производят над пламенем горелки. Бактериальную Бактериальную петлю прокаливают над пламенем непосредст­венно перед взятием материала, затем петлю остужают. Для этого при пересеве микробной культуры с пробирки горячую петлю погружают в конденсационную жидкость, а при пере­севе с чашек Петри прикасаются к поверхности питательной среды, свободной от микробного роста. Достаточно остужен­ная петля не вызывает шипения конденсационной жидко­сти и не растапливает агар при соприкосновении со средой. После окончания посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящейся на ней микроб­ной культуры или инфицированного микроорганизмами ма­териала. Пипетки и шпатели используемые для посевов, так же как и бактериальные петли, перед посевом прожигают, а после посевов опускают в дезинфицирующий раствор. Перед посевом вся посуда проверяется на целостность, далее, на чашках Петри со стороны дна, на про­бирках в верхней трети, надписывают название засеянного материала или ставят номер анализа и дату посева. Посев на плотную питательную среду в чашки Петри.
02.06.2018	Тема.Методы получения чистой культуры микроорганизмов. Методы выделения чистых культур сужествует 2 вида: В ислед. материале как правило много различных др. микроорг. И нам нужно отделить наш микроорг. От бактерий других видов. Классическими методами микробиологии можно идентифицир. микроорганизм только при условии, что он находится в виде чистой культуры. 1) Механическое разобщение клеток: - Посев Штрихом - Метод Пастера (метод разведений): из исследуемого материала готовят ряд десятикратных разведений. В предпослед. пробирках останется одна клетка.? -Метод КОХА (метод заливок -разведения в агаре). В пробир. с агаром разведения и в чашки. Метод Дригальского(Распредел по поверхности пит. среды в 3 чашках шпателем.) дробного посева. 2) Методы основанные на биологических особенностях микроорганизмов. Прогревание - для спорообразующих. Использование селективных питательных сред – среды содер. вещества подавляющие рост сопутствующей микрофлоры. Среды обогащения- и спользуют для подавления одних видов микробов и создания благоприятных условий для развития других. Наиболее часто в лабораториях используют накопительные среды (Кауфмана, Мюллера, селенитовую, хлористомагниевую М), которые задерживают рост гнилостных микробов и не препятствуют размноже­нии) сальмонелл. Биопроба- заражение чувствительных лабораторных животных- метод с помощью которого не только выделяют возбудителя из патологического материала, но так же изучают вирулентность чистой культуры. Организм это фильтр от непатогенной микрофлоры.
03.06.2018	Тема. Микроскопические методы исследования микроорганизмов. Изучение тинкториальных свойств окрашенных микроорганизмов. Окраска по Граму, окраска по Циль-Нильсену, окраска по Романовскому-Гимза, окраска капсул и спор. Определение подвижности. Особенности окраски при изучении органелл.
04.06.2018	Тема. Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков: окраска по Граму, окраска по Циль-Нильсену, окраска по Романовскому-Гимза. Проведение: окраски капсул Капсулы микробов состоят главным образом из полисахаридов и глюкопротеидов. Капсульными можно считать тех микробов, у которых капсула обнаруживается при окраске каким-либо методом на капсулы. Капсулы и слои слизи образуются некоторыми бактериями в специфических культуральных условиях. Луч­ше всего они видны во влажных препаратах, поскольку составляющие их сильно гидратированные коллоидные полимеры легко разрушаются и сокращаются в разме­рах при высушивании и фиксации. Самым простым и наиболее эффективным из трех методов окраски капсул, описанных ниже, является ме­тод Дюгида. Окраска спор При исследовании живых неокрашенных препаратов, изготовленных из старых, главным образом агаровых, культур, споры чаще всего обнаружи­ваются в виде овальных или круглых образований, резко преломляющих свет. Зрелые споры обычными растворами красок не окрашиваются. В микробной клетке споры располагаются или в центре ее (экваториально), или на конце (терминально), или ближе к концу палочки (субтерминально). Споры имеют очень плотную оболочку, состоящую из наружного и внутреннего слоев. Все специальные методы окраски спор основаны на действии различных протрав, изменяющих структуру оболочки и тем облегчающих проникновение в споры красящего вещества. После протравливания препараты окраши­вают обычно карболовыми растворами красок с подогреванием мазка, после­дующим обесцвечиванием и дополнительной окраской. Окраска препаратов методом Дорнера и методом Трухилио Окраска жгутиков.
5.06.2018	Тема. Антибиотики, методы определения антибиотикорезистентности микроорганизмов. Для успешного проведения лечения антибиотиками, особенно в случаях хронической инфекции, необходимо предварительно опреде­лить степень чувствительности к антибиотикам микробов, вызвавших заболевание. При определении чувствительности желательно иметь чистые культуры возбудителя и лишь при необходимости срочного получения ответа используют смешанные культуры, содержащие всю микрофлору, имевшуюся в исследуемом материале. Наиболее прост и доступен метод определения чувствительно­сти с помощью дисков, пропитанных антибиотиками.
6.06.2018	Тема. Ускоренные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (диффузный метод). Ход работы. В стерильные чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности, раз­ливают по 15 мл плотной питательной среды (чаще всего 2% агар на переваре Хоттингера, содержащий 0,11—0,13% аминного азота). На поверхность застывшего и слегка подсушенного агара наливают 1 мл суспензии суточной культуры микроба-возбудителя или, если чистая культура не выделена, взятого для исследования патологи­ческого материала (гной, экссудат и т. п.), слегка разведенного изо­тоническим раствором хлорида натрия. Поверхности дают время подсохнуть. Далее на поверхности засеянного агара пинцетом раскладывают диски с антибиотиками — по 5—6 дисков на каждую чашку на расстоянии 25 мм от центра чашки. Чашки выдерживают при 37°С 16—18 ч, после чего учитывают результаты опыта путем измерения зон задержки роста микробов вокруг дисков, включая диаметр самого диска. Размер зон зависит от степени чув­ствительности возбудителя к данному антибиотику. При зоне диа­метром до 10 мм штамм расценивается как устойчивый, 11–15 мм — как малочувствительный, 15–25 мм — как чувствительный. Зоны, превышающие 25 мм, свидетельствуют о высокой чувстви­тельности микроорганизма к данному антибиотику. Однако этот метод нельзя считать количественным.
9.06.2018	Тема.Определение активного хлора в хлорных препаратах. Ход определения: глазной пипеткой набирают водный раствор HCI и вносят в пробирку 5 капель, на кончик скальпеля берут примерно 0,1 гKI и добавляют в ту же пробирку. Глазную пипетку промывают 3-4 раза дистиллированной водой и 1-2 раза 1%-ным раствором хлорной извести (испытуемой), а затем в нее набирают 1 %-ный раствор хлорной извести и вносят в пробирку 18 капель, в результате чего жидкость в пробирке приобретает коричневый цвет. Далее глазную пипетку промывают 3-4 раза водой и 1-2 раза 0,1 н. раствором тиосульфата натрия и титруют содержимое пробирки при постоянном помешивании (обязательно встряхивать) до полного просветления в ней жидкости. Одна капля 0,1 н. раствора тиосульфата натрия, пошедшая на титрование, соответствует 2 % хлора в хлорной извести. При титровании следует, иметь ввиду, что капли должны быть по величине одинаковыми; при внесении они должны падать на дно пробирки, и для получения более точных результатов определение следует вести одновременно в трех пробирках, а при наличии расхождения определить среднюю арифметическую величину.
10.06.2018	Тема.Приготовление дезинфицирующих растворов из хлорных препаратов. Приготовление 1%-ного раствора хлорамина (1л) Цель: использовать для дезинфекции согласно приказам по соблюдению санитарно-противоэпидемического режима. Оснащение: - спецодежда; - навеска сухого порошка хлорамина 10 г; - емкости для воды с маркировкой до 1 л; - емкость для дезраствора; - деревянная лопатка. Обязательные условия: - содержание активного хлора соответствует 0,25%; - раствор применяется однократно. Этапы Обоснование Подготовка к процедуре 1. Надеть спецодежду. Обеспечение безопасности на рабочем месте. 2. Подготовить оснащение, проверить маркировку. Соблюдение четкости в работе. Обеспечение личной ответственности. Выполнение процедуры 1. Налить в емкость небольшое количество воды. Предупреждение распыления порошка. 2. Поместить в емкость навеску сухого порошка хлорамина (10 г). Соблюдение методики приготовления растворов процентной концентрации. 3. Долить водой до 10л.   4. Перемешать раствор деревянной лопаткой.   5. Закрыть крышкой.   6. Проверить маркировку емкости и бирки.   7. Поставить дату приготовления раствора, роспись. Обеспечение преемственности в работе с дезрастворами, личная ответственность. Завершение процедуры 1. Использовать свежеприготовленный раствор однократно. Соблюдение приказа № 408. 2. Снять спецодежду, вымыть руки, вытереть насухо. Соблюдение личной гигиены медицинского работника.
11.06.2018	Тема. Определение микроорганизмов в воздухе закрытых помещений. Изучение теории определение микроорганизмов в воздухе. Тестирование.
12.06.2018 -13.06.2018	Тема. Учет количества микроорганизмов в воздухе. Сначала определили кабинеты для исследования (преподавательская и лекционная №18). Мы выбрали кабинеты, в которых температура была одинаковой: 19-20 °С, но другие условия разными: наличие цветов, компьютера, площадь помещения. В каждом помещении один и тот же день, после уроков приготовленные чашки Петри (2) разместили в разных местах исследуемых помещений и на 5 мин открывали крышки. При этом микроорганизмы и споры, содержащиеся в воздухе, постепенно осаждались на открытой поверхности агарагара. Через 5 мин чашки закрыли и на крышках отметили, кто и где производил посев. Завернули чашки в бумагу и поместили в теплое место (не менее 20 °С) для инкубации на 7 дней. Через 7 дней подсчитали количество колоний бактерий и грибов в чашках. Если колоний немного, их считают на всей поверхности агарагара чашки Петри. При большом количестве колоний чашку Петри кладут на лист бумаги, разделенный на 4—6 секторов, и считают количество колоний в каждом секторе. При подсчете и рассмотрении колоний рекомендуется использовать лупы. Описание колоний микробов, выросших на питательной среде, проводят по следующим показателям: форма (округлая, неправильная); поверхность (гладкая, блестящая, шероховатая, сухая, складчатая); край (ровный, волнистый, городчатый); цвет; размер (диаметр). Следует отметить, что метод подсчета колоний в чашках Петри с посевом из воздуха дает лишь приблизительные данные. Учитываются лишь микробы быстро оседающей пыли, кроме того, на твердой поверхности агарагара прорастут только аэробные формы микроорганизмов. Результаты исследования количества выросших колоний (подсчитывали через неделю) В преподавательской: на МПА выросло 8 колоний, на Сабуро 2 колонии В лекционной №18: выросло 5 колоний, на Сабуро 2 колонии Результаты исследования морфологии колоний: Всего выросла 21 колония микроорганизмов. Из них 17 колоний бактерий и 4 грибы. Диаметр колоний колеблется от 3мм до 25 мм. Форма колоний чаще всего круглая, встречается сложная и круглая с фестончатым краем. Профиль 4-х колоний – каплевидный, 4-х – бугристый, 5 – выпуклый, 3-х – плоский. Край тринадцати колоний бактерий гладкий, четырех колоний волнистый. 76% колоний имеют однородную структуру, 6% (одна колония) – крупнозернистую, остальные – неоднородную структуру (см. приложение). Подсчитывали число колоний в чашках Петри и рассчитывали количество микробов в 1 м3воздуха. При этом учитывали следующее: по приблизительным подсчетам (Омелянский) на площади в 100 см2 в течение 5 мин оседает столько микроорганизмов и спор, сколько их содержится в 10 л воздуха. Вычислив площадь дна чашки Петри; зная количество колоний, выросших за 7 дней, подсчитали число микробов в 1 м3 воздуха. Вывод: наибольшее количество микроорганизмов находится в воздухе помещений преподавательской, наименьшее – в лекционной №18. В преподавательской есть компьютеры и много цветов, в лекционной №18 – нет ни компьютера, ни цветов. Можно сделать вывод, что ни излучение компьютера, ни рост цветов не влияют на содержание микроорганизмов в воздухе.
16.06.2018	Тема. Определение микробиологической безопасности питьевой воды и почвы Изучение теории.определение микроорганизмов в воде и воздухе.
17.06.2018	Тема. Определение микробиологической безопасности питьевой воды Задание.. Определить микробное число воды взятой из чашки для питья собаки: произ­вести взятие проб воды и сделать посев разведений исследуемой воды на мясопептонный агар Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл, пробирки со стерильной водой по 9 мл, стерильные чашки Петри, стерильные пипетки на 1—2 мл, пробирки с мясо-пептоннымагаром по 10 мл, водяная баня, термометр.   Методические указания к выполнению работы. Из открытых водоемов про­бы воды отбирают с глубины 10—15 см от поверхности и на расстоянии 10—15 см от дна. Из водопровода воду берут в стерильные флаконы с при­тертой пробкой емкостью 0,5 л, а с глубины водоема — привязанным к шесту батометром или стеклянным сосудом с притертой пробкой, к ко­торой прикреплен шнур. Водопроводную воду наливают после предварительного обжигания крана и стекания первых порций воды из него в течение 10—15 мин. Воду из колодца следует брать утром до начала пользования им или через 10—12 ч после прекращения пользования. Хлорированную воду перед исследованием нейтрализуют серноватистокислым натрием из расчета 10 мл на 1 л воды. Промежуток времени с момента взятия пробы до бактериологического исследо­вания не должен превышать 2 ч (при температуре 1—5°С можно хранить до 6 ч). Микробное число воды — количество микробов в 1 мл используемой воды — определяют путем высева воды на мясопептонный агар. Исследуемую воду разводят в 10, 100 и 1000 раз. В пробирку с 9 мл стерильной воды вносят 1 мл исследуемой воды (разведение 1:10), затем после перемешивания другой пипеткой переносят в аналогичную пробирку 1 мл разведенной воды (разведение 1: 100) и т. д. По 1 мл полученных разведении воды, начиная с большего, переносят в маркированные стерильные чашки Петри и заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С мясопептонного агара. Осторожно кругообраз­ными движениями перемещают по поверхности стола чаш­ку Петри, перемешивая содержимое. Затем чашки Петри с застывшим агаром переворачивают вверх дном и поме­щают на сутки в термостат. При исследовании водопро­водной воды в каждую из двух чашек засевают 1 мл неразведенной воды. Ингредиенты Разведения исследуемой воды 1:10 1:100 1:1000 Исследуемая вода, мл Мясопептонный агар, мл Количество выросших колоний 1,0 10,0 1,0 10,0 1,0 10,0 Результат 3*103     2,5*102   5,5*10
18.06.2018	Тема.Определение микроорганизмов на предметах обихода и оборудования Изучение теории.При контроле качества мойки и дезинфекции оборудования, инвентаря, спецодежды и рук работников, занятых обработкой продуктов, не реже одного раза в 15 дней проводят микробиологическое исследование смывов, определяя общее количество микроорганизмов, наличие Е. coli, бактерий рода Proteus, сальмонелл и других патогенных микроорганизмов. Смывы с оборудования, инвентаря, тары берут после их санитарной обработки (мойки, пропаривания, дезинфекции) непосредственно перед началом работы. С поверхности рук работников смывы отбирают с ладоней, пальцев, межпальцевых и подногтевых участков обеих рук непосредственно перед началом работы, а в отделениях термическом и готовой продукции колбасного производства — и во время работы. Не допускается наличия условно-патогенных бактерий (группы кишечных палочек и рода Proteus) и патогенных микроорганизмов, в том числе сальмонелл, в смывах с оборудования, инвентаря, рук и спецодежды работников. Общее количество сапрофитных микроорганизмов не должно превышать в колбасном производстве 1000, а в консервном — 300 микробных клеток на 1 см2 поверхности. При обнаружении условно-патогенных или патогенных микроорганизмов или наличия на 1 см2 большего количества сапрофитных микробов необходимо провести тщательную мойку и дезинфекцию, после чего лаборатория должна провести повторное микробиологическое исследование поверхности этих объектов. Просмотр видеофильма. Опрос
19.06.2018 20.06.2018	Тема. Определение микроорганизмов на поверхности учебных столов. Ход исследования.Смывы берут с помощью стерильных нержавеющих металлических трафаретов с вырезанной серединой (площадь выреза 10, 25 или 100 см2). Эту площадь протирают стерильным ватным тампоном, смоченным в стерильной воде в пробирке на 10 мл, после чего тампон погружают в эту пробирку, тщательно перемешивают содержимое и высевают 1 мл смыва на мясо - пептонныйагар. После термостатирования посевов при 30 °С в течение 24 - 28 ч определяют общую бактериальную обсемененность в пересчете на 1 см2 исследуемой поверхности. Примечание. В смывах с хорошо вымытого оборудования общее количество микроорганизмов и коли-индекс не должны превышать их содержания в чистой воде, поступающей на мойку. Результаты. Во всех пробах выявлены бактерии шаровидной формы, предположительно стафилококк.