Получение культуры сенной палочки

Методические рекомендации к проведению лабораторно-практических занятий по экологии микроорганизмов

Б а к т е р и и

По данным современной систематики, царство Дробянки MYCHOTA (SCHYSOBIONTA) подразделяется на два подцарства: Bacteriobionta и Cyanobionta. Бактерии - наиболее широко распространенная в природе группа микроорганизмов, размеры которых не превышают 100 мкм. Все бактерии представлены особым типом клеток, лишенных истинного ядра, окруженного ядерной мембраной. Аналогом ядра у бактерий является нуклеоид - ДНК-содержащая плазма, не отграниченная от ядра мембраной. Кроме того, для бактериальных клеток характерно отсутствие митохондрий, хлоропластов, а также особое строение и состав мембранных структур и клеточных стенок.

Бактерии распространены повсюду. Они населяют все среды обитания, существующие на планете. Бактерии способны осваивать самые экстремальные экотопы: скалы, полярные льды и снега, пустыни, глубокие слои почвы, абиссальные зоны Мирового океана, горячие источники.

Широкая экологическая пластичность бактерий обусловлена тем, что в результате биохимической эволюции у них сформировались различные типы метаболизмов. Благодаря этому бактерии способны осваивать и перерабатывать самые разные субстраты: органические и неорганические. По типу питания бактерии могут быть как автотрофами, так и гетеротрофами. В зависимости от типа субстрата, который разные группы бактерий используют в качестве источника питания, источника энергии, их делят на группы:

• хемоавтотрофы;

• хемогетеротрофы;

• фотоавтотрофы;

• фотогетеротрофы.

Лабораторно-практическое занятие №1

Цель занятия: изучить основные положения и приемы работы на лабораторно-практических занятиях по микробиологии и освоить методику приготовления микробиологического препарата.

Общая часть:

• Правила работы при выполнении микробиологического практикума.
• Обработка и стерилизация лабораторной посуды.
• Правила работы с питательными средами.
• Методы микроскопического исследования микроорганизмов.

Основные положения изученных методик записать в тетрадь.

ОПЫТ № 1

Методика приготовления микробиологического препарата «Флора зубного налета».

Оборудование: микроскоп, предметные и покровные стекла, препаровальная игла, салфетки, деревянная зубочистка, краситель меимленовый синий, тушь чертежная черная или синяя, спиртовка, спирт, колба с водой и пипеткой.

Приготовление негативного препарата

Ход работы:

1. Приготовить микроскоп и стекла к работе.
2. Зубочисткой снять осторожно налет с поверхности зубов у шейки.
3. Тщательно эмульгировать в капле воды.
4. Поместить рядом на стекло каплю туши и тщательно перемешать обе капли.
5. Из этой смеси приготовить мазок наподобие мазка крови.
6. Микроскопировать.

Приготовление фиксированного препарата.

Ход работы:

1. см. пп.1,2,3.
2. Приготовить мазок, для чего тщательно распределить материал по стеклу.
3. Высушить при комнатной температуре или высоко над пламенем спиртовки.
4. Фиксировать препарат, для чего большим и указательным пальцем держать стекло и насколько раз проводить через горячую часть пламени спиртовки, препарат подвергается действию пламени не более 2 сек., но неоднократно.
5. Окрасить препарат, для чего нанести на мазок одну или несколько капель красителя. Держать краситель 1-1,5 мин.
6. Смыть краситель тонкой струей воды. Высушить при комнатной температуре или осторожно вблизи пламени спиртовки..
7. Микроскопировать.
8. В тетради сделать рисунок и обозначения к нему. Сделать выводы. Коротко охарактеризовать флору зубного налета.

Контролирующие вопросы:

1. Какие методы стерилизации лабораторной посуды применяются на занятиях?
2. Какие питательные среды применяют для изучения микрофлоры воздуха помещений?
3. Какие морфотипы бактерий присутствуют в микрофлоре зубного налета?
4. в чем заключаются функции бактерий в ротовой полости?

Лабораторно-практическое занятие №2

Цель занятия: освоить метод элективной накопительной культуры на примере методики приготовления культур сенной и картофельной палочек.

ОПЫТ № 2

Методика приготовления элективной накопительной культуры сенной палочки Bacillus subtilis и картофельной палочки B. mesentericus.

Накопительными элективными культурами называются такие, в которых создаются условия для роста микроорганизмов одного вида и подавляется рост других видов. В данной работе кипячение является фактором, убивающим неспороносные формы, вследствие чего Bacillus subtilis и

B. mesentericus, имеющие устойчивые споры, получают преимущественные условия для размножения. Этому способствует и специфика используемых сред.

Оборудование и материалы: колба термостойкая на 250 мл, стеклянная палочка, ватно-марлевая пробка, сенная труха или солома, толченый мел, электроплитка или водяная баня, кипяток, стеклограф, ножницы, клубни картофеля, чашки Петри.

Ход работы:

Получение культуры сенной палочки

1. Простерилизовать посуду.
2. Отвесить навеску 10-15 г сена или соломы.
3. Поместить в колбу. Залить кипятком, так, чтобы солома была полностью покрыта водой.
4. Засыпать 0,5 ч.л. мела. Кипятить 15 мин.
5. Закрыть пробкой и поставить в термостат на 7-10 суток при температуре 25⁰.
6. По окончании микроскопировать.

На поверхности сенного отвара появляется сероватая пленка, состоящая из особей грамотрицательной сенной палочки. Сделать рисунок в лабораторной тетради.

Ход работы: