Цель: определение а/т к вирусу гриппа в сыворотке крови и их нарастание в парных сыворотках.
Компоненты: сыворотка крови, антиген вируса гриппа (гемагглютинин) и эритроциты.
Ход: РТГА это вариант РН, основана на нейтрализации гемагглютинирующих свойств вирусов специфическими а/т находящимися в сыворотки больного, что проявляется отсутствием агглютинации эритроцитов с формированием на дне лунки компактного осадка (точечка, а не зонтик). Сыворотки крови обрабатывают периодатом калия для устранения неспецифических ингибиторов агглютинации, затем к разным разведениям сыворотки добавляют равное кол-во известных вирусных частиц (антигенов) и инкубируют. После чего добавляют, равны объем 1,0% взвеси эритроцитов, инкубируют и читают результат. Диагностическим титром считают наибольшее разведение, в котором тормозится гемагглютинация.
Выявление вируса гепатита А при иммунной электронной микроскопии:
Цель: выявление обнаружение вируса в материале и идентификация:
Компоненты: материал от больного, противовирусной сыворотки, контрастирующее вещество.
Ход: материал содержащий вирусов обрабатывают противовирусной сывороткой содержащей антилела к HAVAg, затем добавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту для контрастирования. Смесь наносят на пленку и высушивают. Затем микроскопируют в электронном микроскопе и находят скопление вирусных частиц.
Экспресс-Ds-ка ротавирусной инфекции в реакции гемадсорбции на твердой основе (РГагТО):
Цель: определение антигенов ротавируса вируса в материале.
Компоненты: противоротавирусная сыворотка (а/т), материал от больного с вирусом и его а/г, сенсибилизированные иммуноглобулином эритроциты.
|
|
Ход: лунки полистироловых планшетов обрабатывают противоротавирусной сывороткой, затем вносят в них исследуемый вируссодержащий материал и через 30-60 минут лунки промывают буферным раствором, после чего добавляют взвесь сенсибилизированных специфическим иммуноглобулином эритроцитов и через 30-60 минут читают результат. Если в материале был вирусный антиген, он соединяется с антителами сыворотки адсорбированными на поверхности лунки, а затем с иммуноглобулином на поверхности эпитроцитов и происходит гемагглютинация.
Выявление антигенных маркеров вируса бешенства при помощи РИФ:
Цель: выявление а/г вируса бешенства.
Компоненты: культура клеток инфицированная материалом от больного (с а/г), антирабического иммуноглобулина или моноклинальных антител, меченных флюорохромом (флюорисцином).
Ход: культуру клеток обрабатывают меченым иммуноглобулином и микроскопируют. При наличии вируса в клетке а/т адсорбируются на клетке и наблюдается ее свечение.
Идентификация вируса гриппа в аллантоисной жидкости РКЭ в РТГА:
Цель: идентификация вируса гриппа по известным антителам.
Компоненты: аллантоисная жидкость инфицированного вирусом РКЭ, противогриппозные диагностические сыворотки типа А, В, С и эритроциты кур.
Ход: Р-я основана на нейтрализации гемагглютинирующей активности вируса различных типов вируса гриппа А, В, С соответствующими сыворотками. Смесь соответствующей сыворотки и аллантоисной жидкости смешивают с эритроцитарный взвесью. Отсутствие гемагглютинации с одной из сывороток, указывает на тип вируса.
|
|
Идентификация вируса гриппа в аллантоисной жидкости РКЭ в РГА:
Цель: определение вируса или его а/г в материале.
Компоненты: Аллантоисную жидкость РКЭ инфицированного материалом от больного, эритроциты кур.
Ход: Аллантоисную жидкость титруя разводят от 1:10 до 1:52 и вносят по 0,5 мл в лунки планшета, и добавляют по 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов кур, инкубируют 40 минут и читают результат. Гемагглютинация говорит о наличии вируса в аллантоисной жидкости.
Серологическая диагностика кори при помощи РНГА:
Цель: выявление а/т к вирусу кори в сыворотки крови и нарастание их титра.
Компоненты: сыворотка крови больного, эритроцитарный коревой диагностикам.
Ход: Основана на способности эритроцитов с адсорбированными на их поверхности а/г к вирусу кори взаимодействовать с а/т в сыворотке крови и образовании на дне луки в виде фестончатого осадка (зонтик с неровными краями).
Серологический метод диагностики клещевого энцефалита при помощи РСК:
Цель: определение а/т в сыворотки крови и нарастание их титра.
Компоненты: парные сыворотки крови больного, а/г клещевого энцефалита для РСК, гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.
Ход: 1 фага – антитела в сывороточных разведениях взаимодействуют с а/г диагностикума, в результате чего происходит связывание комплимента. 2 фаза – индикаторная – определение в смеси наличия свободного комплемента путем добавления гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка), если комплимент свободен, то происходит гемолиз эритроцитов (РСК отрицательная), а если комплимент связан, то гемолиз не наступает (РСК положительная).
|
|
Определение антител к вирусу ВИЧ при помощи ИФА:
Цель: определение а/т в ВИЧ.
Компоненты: антигены ВИЧ, сыворотка крови больного, антиглобулиновую человеческую сыворотку меченую ферментом пероксидазой хрена субстрат для фермента.
Ход: сыворотку крови добавляют в лунки планшета с адсорбированными а/г ВИЧ и инкубируют. Затем лунки отмывают и добавляют антиглобулиновую сыворотку меченую ферментом., затем снова отмывают и добавляют субстрат для фермента с индикатором. Если в сыворотке а/т нет, то адсорбция последующих компонентов реакции и разложение субстрата не наблюдается.
Определение маркеров вируса гепатита В при помощи ИФА:
Цель: выявление а/г HBsAg в сыворотки крови больного.
Компоненты: сыворотка крови, антитела к HBsAg.
Ход: смори выше.
Иммуноблотинг:
Цель: выявление а/т в ВИЧ.
Компоненты: сыворотка крови больного, полоски с «блотами» антигенов, полученные электрофорезом а/г в акриловом геле, меченная ферментом антиглобулиновая сыворотка человека.
Ход: на полоски наносят сыворотку крови и инкубируют, затем отмывают и наносят меченую антиглобулиновую сыворотку. Образовавшийся комплекс а/г-а/т-анти-а/т выявляют добавлением субстрата, изменяющего окраску при действии фермента.