Контроль качества дезинфекции по м и к о б а к т е р и я м.
Из кислотоупорных сапрофитов рода микобактерий готовят нефиксированные мазки (тестобъекты) на предметных стеклах, которые раскладывают в различных местах помещения до дезинфекции. После окончания дезинфекции и срока экспозиции тестобъекты собирают обрабатывают в нейтрализующем растворе и помещают в микрокультиватор Н.М. Колычева, который заполняют жидкой средой Сотона и культивируют при 37°С в течение 48 часов. По окончании этого срока тестобъекты извлекают, промывают от среды, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают методом Циль - Нильсона.
Если в процессе дезинфекции тестмикробы не погибли на стекле образуются микроколонии, которые можно обнаружить под микроскопом.
2 метод – ускоренного выделения санитарно-показательных микроорганизмов с поверхностей обьектов для контроля качества дезинфекции.
Подготовка материалов для исследования. Для исследования используют предметные стёкла размером 2,5 х 7,5 см. Предварительно стёкла кипятят в 2% растворе моющего порошка, затем поверхность с двух сторон натирают с помощью зубной щётки или ерша тем же порошком, слегка увлажнённым водой. Промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной и подсушивают на воздухе. Хранят в сухом виде в банке с притёртой крышкой.
Обработка пробирок, предназначенных для размещения, транспортировки и инкубирования проб отпечатков.
При взятии проб используют бактериологические пробирки, закрытые резиновыми пробками. Моют и стерилизуют общепринятым способом. Перед стерилизацией на дно пробирки помещают небольшой ватный тампон.
Подготовка предметных стёкол для отбора проб.
В стерильном боксе на предметные стёкла наносят тонкий слой расплавленной элективной питательной среды. Для выделения группы бактерий кишечной палочки используют агар Эндо, для стафилококков – 8,5 %-ный солевой мясопептонный агар (рН 7,2-7,4). Количество нанесённой среды должно соответствовать 0,15 мл (4 капли) для узкого предметного стекла и 0,33 мл (8 капель) – для широкого.
Техника нанесения питательной среды на стекло заключается в следующем. Прогретые над пламенем горелки предметные стёкла раскладывают на ровной, строго горизонтальной поверхности стола. Среду, находящуюся в пробирке, расплавляют на водяной бане; в расплавленную среду погружают стерильную пастеровскую пипетку; воду в бане в течение всего периода нанесения среды подогревают до температуры 80-90 градусов. На захваченные корнцангом и слегка подогретое предметное стекло пастеровской пипеткой наносят питательную среду на среднюю часть 1\3 поверхности стекла.
Застывшую на стекле массу подсушивают при комнатной температуре до появления вокруг неё сухой полосы шириной 0,5-1 мм, после чего широкие стёкла помещают в пластмассовы ванны (применяемые для окраски мазков крови на предметном стекле (ТУ 64-1), узкие – в пробирки. Ванны и пробирки предварительно увлажняют путём нанесения на дно 1 мл и 0,1 мл стерильной и водопроводной воды соответственно. Срок хранения подготовленных предметных стёкол для отбора проб при температуре 4 градуса до 10 суток.
Приготовление нейтрализующих растворов.
Для нейтрализации щелочных растворов химических дезинфицирующих средств на стерильной воде 0,01%-ный раствор уксусной кислоты, для нейтрализации формалина – нашатырный спирт (1-2%). Щелочной раствор формальдегида нейтрализуют вначале раствором уксусной кислоты, а затем нашатырным спиртом в тех же концентрациях. Химические дезсредства, в которых отсутствуют специфические нейтрализующие растворы, разбавляют в 3-4 раза стерильной водой.
Методика исследований.. На месте дезинфекции в животноводческих помещениях пробы берут с поверхностей 10-20 различных участков: пола, кормушек, перегородок и т.д.
Через 2-3 часа после проведения профилактической дезинфекции или по истечении определённой экспозиции при текущей дезинфекции контролируемые участки смачивают нейтрализующим раствором или стерильной водой.
Предметные стёкла извлекают изогнутым корнцангом из ванн или пробирок, не касаясь участка с застывшей питательной средой, и накладывают на исследуемый обьект таким образом, чтобы питательная среда соприкасалась с его поверхностью. Через 2 минуты пробы отпечатки отделяют от контроируемого обьекта и помещают в прежние ванны и пробирки. При взятии проб с труднодоступных или вертикальных поверхностей время контакта слоя питательной среды с обьектом сокращают до 30 секунд.
Ванны и пробирки с пробами-отпечатками доставляют в лабораторию и помещают в термостат при 37 С на 16 часов.
После инкубирования пробы просматривают невооружённым глазом и в случае отсутствия роста макроколоний сомнительные пробы-отпечатки выборочно высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по методу Муромцева и под микроскопом выявляют микроколонии.
Оценка результатов.
Дезинфекцию признают удовлетворительной, если в исследуемых пробах нет роста санитарно-показательных микробов; при профилактической и заключительной – во всех, при текущей дезинфекции – не менее чем в 90% проб.
При оценке качества обеззараживания животноводческих помещений новый способ позволяет получить обьективные данные и по чувствительности не уступает общепринятому методу контроля качества дезинфекции. При его использовании время исследования проб сокращается в 3 раза. В 20 раз сокращается расход питательной среды, в 10 раз – количество пипеток, полностью исключается использование пробирок.
Вопросы для самоконтроля.
1.От чего зависит качество проведенной дезинфекции?
2.Что служит критерием для оценки качества дезинфекции?
3.Техника определения качества дезинфекции по 1 методу.
4.Техника определения качества дезинфекции по 2 методу.