Инокуляция культуры - продуцента антибиотика в жидкую ПСосуществляется с целью глубинного культивирования его и выделения антибиотика.
Все процедуры, связанные с подготовкой сред и инокуляцией продуцента проводятся в подготовленномасептическом блоке при выполнении надлежащих правил асептики. В тамбур-шлюзе асептического блока необходимо:
1. снять переходную одежду
2. вымыть с мылом руки, обращая особое внимание на околоногтевые пространства. Следует пользоваться стерильной щеткой для рук. Высушить руки с помощью электрополотенца.
3. Надеть комплект стерильной технологической одежды (халат, шапочку и четырехслойную марлевую повязку), освободив его от упаковки. Волосы тщательно убирают под шапочку.
4. Обработать руки дезинфицирующим средством «для рук». Для этого 2-3 мл средства втирать в кожу кистей и запястья до полного его высыхания. Руки НЕ ВЫТИРАТЬ и НЕ СУШИТЬ электрополотенцем.
5. Пройти в асептический блок, включить ламинарный шкаф и приступить к работе.
инокуляция культуры продуцента антибиотика в жидкую питательную среду
Осуществляется в асептическом блоке
а) Включить ламинар.
б) При работающем ламинаре подготовить все необходимое для работы.
в) Протереть поверхность стола дезинфицирующим раствором.
г) Выключить ламинар и зажечь спиртовку.
д) Взять в правую руку бактериологическую петлюи простерилизовать ее в пламени горелки.
е) Не выпуская из руки петли, левой рукой слегка приоткрыть чашку Петри с чистой культурой и ввести бактериологическую петлю.Охладить петлю, прижав ее к крышке чашки. Выбрать участок наиболее богатого роста и захватить культуру микроорганизма вместе сосредойплощадью около 1 см2. Закрыть чашку.
Если культура в чашке Петри не «чистая», можно использовать культуру в пробирке.
и) Удерживая петлю указательным и большим пальцами правой руки, захватить мизинцем и безымянным пальцем ватную пробку колбы, прижать ее к ладони и открыть колбу около пламени горелки. Опустить петлю с культурой в жидкую питательную среду. Извлечь петлю и асептически закрыть колбу.
к) Петлю обжечь в пламени горелки. Пламя горелки загасить.
л) Перемешать осторожными вращательными движениями содержимое колбы.
Колбу с посеянной культурой актиномицета подписать карандашом по стеклу и поместить в термостат при 28 °С.Продолжительность ферментации — 7 суток (170 часов).
В процессе ферментации необходимо ежедневно в асептических условиях производить аэрацию культуры и перемешивание(выполняет лаборант).
инокуляция культуры продуцента антибиотика на сыпучий субстрат
Посев микроорганизма-продуцента фермента на сыпучий субстрат осуществляют взвесью клеток и спор микроорганизма стерильнымшприцем (микробиологической пипеткой).
Взвесь клеток и спор микроорганизма готовят путем смыва их с поверхности агаризованной среды стерильной водой (физиологическим раствором). Полученную взвесь переливают в колбу, содержащую стерильный субстрат.
Порядок работы:
а) Включить ламинар, должен работать не менее 2 мин
б)Протереть поверхность стола дезинфицирующим раствором.
в) Выключить ламинар и зажечь спиртовку.
г) Асептически с помощью абразива вскрыть ампулу со стерильной водой или физиологическим раствором, провести через пламя спиртовки.
д) Стерильный шприц на 2 мл освободить от упаковки, провести через пламя спиртовки и набрать 2 мл содержимого ампулы.
е) Взять в левую руку пробирку с чистой культурой продуцента. Если культура в пробирке не «чистая», можно использовать культуру в чашке Петри.
ж) Не выпуская из руки шприца, мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижать ватно-марлевую пробку пробирки к ладони, вынуть ее из пробирки. В пробирку ввести шприц и влить в нее все содержимое шприца. Пробирку закрыть пробкой, вращательными движениями распределить жидкость по поверхности агара и осторожно перемешать, собирая клетки и споры продуцента.
з) Возле пламени горелки открыть пробирку, предварительно проведя край через пламя и набрать шприцом (также проведенным через пламя) взвесь клеток и спор продуцента. Вынуть шприц из пробирки, закрыть пробирку пробкой и поместить в штатив.
и) Удерживая шприц пальцами правой руки, захватить мизинцем и безымянным пальцем ватную пробку колбы с сыпучим субстратом, прижать ее к ладони и открыть колбу около пламени горелки. Ввести шприц в колбу и вылить его содержимое, равномерно распределяя взвесь по всей поверхности зерна. Закрыть колбу ватно-марлевой пробкой, проведя ее через пламя.
к) Шприц закрыть крышкой (далее использовать для приготовления препарата «раздавленная капля»).
л) Колбу с сыпучим субстратом осторожно потрясти для равномерного распределения культуры по всей поверхности субстрата (зерен перловой крупы), подписать и поместить в термостат для культивирования при 28°С.Продолжительность выращивания — 7—10 суток.
После осуществления посева приступайте к выполнению 3 этапа, который следует выполнять за пределами асептического блока.