Лабораторная диагностика
Анаэробных инфекций
(Часть I)
Патогенные анаэробы (за исключением возбудителя некробактериоза)
принадлежат к порядку Eubacteriales, семейству Васасеае, роду Clostridium.
Для получения культур анаэробов применяют специальные жидкие и
плотные питательные среды: Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, глюкозо-
кровяной агар, молоко, желатину, среды с углеводами и индикатором,
сывороточные среды, мартеновский бульон и агар.
Возбудители злокачественного отека
Возбудители. Злокачественный отек - заболевание полимикробной
этиологии. В развитии инфекционного процесса основную роль играют
следующие виды бактерий из рода Clostridium: C. septicum, C, perfringens, С.
novyi, C. histolyticum и C. sordellii.
У сельскохозяйственных животных возбудителем болезни чаще
является C. septicum, нередко наблюдается смешанная инфекция. В
пораженных тканях иногда обнаруживают протеолитическую бактерию С.
sporogenes, которая способствует гнилостному распаду тканей, в результате
чего осложняется течение болезни.
Злокачественный отек (газовая инфекция, раневой газовый отек,
газовая гангрена) - острая неконтагиозная раневая инфекция, вызываемая
группой патогенных клостридий.
Характеризуется быстро распространяющимся болезненным отеком Мягких тканей, их разрушением, образованием в пораженных тканях газа и интоксикацией организма.
Встречается в виде спорадических случаев повсеместно. Обычно
болезнь развивается после обширных и глубоко проникающих ранений.
Поражает животных и человека. У крупного рогатого скота злокачественный
отек может наблюдаться - после отелов, особенно тяжелых, сопровождающихся повреждениями и ранениями родовых путей, а также
после абортов.
Морфология. C. perfringens (C. welchii) - крупная (4-8 мкм)
полиморфная палочка с закругленными концами. Неподвижная,
грамположительная. В объектах окружающей среды находится в споровой
форме. При культивировании споры образуются в средах, бедных
углеводами и богатых белками. В инфицированном организме образует
капсулу.
C. Septicum - это полиморфная палочка величиной 3-8 мкм, в диаметре
0,6-0,8 мкм. Располагается в виде длинных нитей как в инфицированном
макроорганизме (особенно на серозных поверхностях внутренних органов),
так и на питательных средах.
Подвижная, перитрих. Окрашивается грамположительно. Образует центрально расположенную спору как в организме, так и вне его.
C- novyi - это крупная грамположительная полиморфная палочка с
закругленными концами длиной 5-14 мкм. Располагается одиночно и в виде
коротких цепочек. Окрашивается грамположительно. Образует спору,
расположенную субтерминально.
C. histolyticum - это грамположительный палочковидный подвижный
микроб. Образует спору. Продуцирует протеолитический фермент, который
обусловливает расплавление тканей инфицированного организма. Длина
микробной клетки 2-5 мкм.
Лабораторная диагностика
Материал для исследования. Для диагностики используют воспалительный экссудат и кусочки пораженной ткани из очага воспаления.
Если материал нельзя быстро доставить в лабораторию, его консервируют в
40% -ном водном растворе глицерина или же полоски пораженной ткани в
марлевом мешочке (защита от мух) высушивают на воздухе. Перед исследованием материал растирают в ступке с добавлением физраствора, а
затем пастеровской пипеткой высевают в среду Китта-Тароцци, Вильсона-Блера. Выросшие колонии на плотной среде пересевают в молоко, среды с
углеводами. Культуры в среде Китта-Тароцци пересевают на кровяной агар, с
которого типичные колонии вновь пересевают в жидкую печеночную среду.
Бактериологическое исследование
Микроскопирование. Препараты-мазки готовят из исследуемого
материала и колоний полученных культур, окрашивают по Граму.
Выделение чистой культуры.
Культуральные свойства. C. perfringens в жидких питательных средах
вызывает равномерное помутнение бульона с обильным образованием газа
вследствие разложения углеводов; затем микробная масса оседает на дно
пробирки, а среда просветляется. На кровяном агаре колонии круглые,
выпуклые, сочные, с ровными краями зеленого (оливкового) цвета, с
обширной зоной гемолиза. На среде Вильсона-Блера (и на мозговой среде) С.
perfringens образует черные колонии. Чистую культуру микроба засевают в
молоко, желатину (столбиком) и среды с углеводами. Посевы помещают в
микроанаэростат и выдерживают 16-18 ч термостате при 37°С.
C. Septicum на среде Китта-Тароцци отмечают равномерное
помутнение среды с обильным газообразованием. Затем бациллы оседают на
дно пробирки, и среда просветляется. Оптимальная температура 37°C,
pH 7,6. На глюкозо-кровяном агаре появляется характерный рост в виде
кружевного узорчатого сплетения с большой зоной гемолиза.
C- novyi.Строгий анаэроб. Оптимальная температура роста 35-38°C,
pH 7,8. Хорошо растет в среде Китта-Тароцци, образует равномерное
помутнение. На глюкозно- кровяном агаре образуются шероховатые колонии
с неровными краями в виде бахромки, вокруг которых небольшая зона гемолиза.
C. histolyticum На кровяном агаре растет в виде мелких росинчатых
гладких колоний без зоны гемолиза.
Биохимические свойства. C. perfringens в молоке рост микроба
сопровождается сильным газообразованием и формированием губчатого (ноздреватого) сгустка казеина. Желатину разжижает медленно; лактозу,
сахарозу, мальтозу и крахмал ферментирует с образованием кислоты и газа.
C. Septicum Медленно разжижает желатину, выделяет сероводород и
аммиак. Интенсивно ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу,
лактозу и салицин. Медленно свертывает молоко. Продуцирует токсины,
обладающие некротизирующим, летальным, гемотоксическим действием, и
ферменты: коллагеназу и гиалуронидазу.
C- novyi Медленно разжижает желатину, вызывая ее почернение.
Молоко свертывает с образованием мелких хлопьев казеина. Ферментирует с
образованием кислоты и газа глюкозу, глицерин.
C. histolyticum Молоко пептонизирует. Сахаролитическими свойствами
не обладает.
Биопрооба. Для биопробы лучше использовать чистую культуру
каждого выделенного возбудителя. Видовую принадлежность выделяемых
вышеназванных микробов определяют в соответствии с характеристикой
каждого из них.
Для биопробы C. perfringens внутримышечно заражают морских свинок
или голубей, кроликов и белых мышей - гибель через 16-24 ч..
C. Septicum для биологической пробы лучше использовать морских
свинок, которые при внутри-брюшинном заражении погибают через 16-20 ч.
C. novyi продуцирует сильнодействующий экзотоксин. При введении
лабораторным животным (кролику, морской свинке, голубю) на месте
инъекции образуется студенистый экссудат (отек). В естественных условиях
помимо злокачественного отека вызывает брадзотоподобное заболевание с геморрагическими поражениями слизистой сычуга, кишечника,
некротическими поражениями печени и скоплением газа в желудочно-кишечном тракте.
C. histolyticum патогенен для всех лабораторных животных. При
заражении животных на месте инъекции образуется язва.
Биопрепараты. Поливалентная концентрированная вакцина против
брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и
дизентерии ягнят: состоит из смеси нативных токсических бульонных
культур, обезвреженных прогреванием и формалином, сорбированных на
геле гидроксида алюминия и затем концентрированных. Содержит
C. perfringens типов В и D и C. septicum.
Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец. Содержит анатоксины C. perfringens типов С и В и C. septicum, сорбированные на геле
гидроксида алюминия. К готовым анатоксинам C. perfringens добавляют 25%
вакцины C. septicum.
Антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят и
инфекционной энтеротоксемии овец: получают иммунизацией волов-
продуцентов анатоксинами C. perfringens типов С и D. Иммунную сыворотку
проверяют на активность в РН: 1 мл препарата должен содержать не менее 10
МЕ антитоксинов каждого типа.
Антитоксические сыворотки C. perfringens типов А, С, D и Е для
диагностики болезней животных, вызываемых C. perfringens.