Ориентировочная карта основ действий
Практического занятия
Тема: «Сложные методы окраски».
План:
1. Приготовление препарата из мокроты.
2. Методика окраски кислотоустойчивых бактерий по Цилю - Нильсену.
3. Методика окраски спор по Ожешко, Пешкову, Шефферу - Фультону.
4. Методика окраски капсул по: по Бурри, Гинсу-Бурри, методу Книги.
5. Методика окраски волютиновых зерен по: Леффлеру, Нейссеру.
6. Микроскопия окрашенных препаратов.
Самостоятельная работа:
Задание № 1.
Ознакомьтесь с инструкцией для проведения практического занятия.
Задание № 2.
Изучите методику окраски по Цилю - Нильсену.
Задание № 3.
Сделайте мазки из мокроты, высушите и зафиксируйте их над пламенем горелки.
Задание № 4. Окрасьте их по методу Циля- Нильсена
Методика окраски по методу Циля- Нильсена
| 1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги. | |
| 2. Наливают карболовый фуксин Циля. | |
| 3. Удерживая препарат пинцетом, медленно нагревают стекло над пламенем горелки до появления пара. | ВНИМАНИЕ! Не допускается кипение или высушивание окрашивающего раствора на предметном стекле. Если раствора недостаточно, его нужно добавить еще и нагреть второй раз. |
| 4. Мазок с прогретым раствором оставляют на 5 мин. | |
| 5. Фильтровальную бумагу удаляют пинцетом и помещают ее в бачок для сбора отходов. | |
| 6. Предметное стекло аккуратно ополаскивают (каждое отдельно!) под слабой струей воды из водопроводного крана до полного удаления | ВНИМАНИЕ! Мазок смывают ребром к струе. Не разрешается смывать и обесцвечивать одновременно несколько мазков во избежание перекрестного заражения. |
| окрашивающего раствора. | |
| 7. Стекла помещают на мостик и обрабатывают 25% р-ом серной кислоты до отхождения струи красителя. | ВНИМАНИЕ! Каждое стекло обрабатывается индивидуально. |
| 8. Смывают водой как описано выше. | |
| 9. Обрабатывают каждый мазок индивидуально 96° этиловым спиртом в течение 5 мин. | |
| 10. Промывают водой как описано выше. | |
| 11. Докрашивают 0,3% метиленовой синькой в течение 1 мин | |
| 12. Промывают водой как описано выше и оставляют сушить на воздухе. |
Результат: кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново - красный цвет, все остальные - в синий.
Задание № 5.
Изучите препараты при помощи иммерсионной системы.
Задание № 6.
Зарисуйте и подпишите морфологию микроорганизмов в альбом.
 |
Рис 1. Мазок из мокроты.
Окраска по Цилю - Нильсену
Задание № 7
Изучите методики окраски по Ожешко, Пешкову, Шефферу-Фультону.
Методика окраски по Шефферу-Фультону.
| Задание | Примечание |
| 1. На препарат фиксированный жаром, наносят 5% водный раствор малахитового зелёного. | ВНИМАНИЕ! Для предотвращения растрескивания стекла, произведите его остуживание на воздухе. |
| 2. Нагревают до появления паров 3-4 раза. | |
| 3. Промывают и докрашивают 30 с 0,5% водным раствором сафранина. |
Результат окраски:
кислотоустойчивые споры окрашиваются в зелёный цвет, а бактериальная клетка – в красный.
Методика окраски по Пешкову.
| Задание | Примечание |
| 1. На мазок, фиксированный жаром (над пламенем!), наливают синий Леффлера. | ВНИМАНИЕ! Фиксируют над пламенем горелки. |
| 2. Подогревают стекло до закипания краски. | |
| 3. Дают 15—20с покипеть | |
| 4. Остуживают стекло. | ВНИМАНИЕ! Для предотвращения растрескивания стекла, произведите его остуживание на воздухе. |
| 5. Промывают водой. | |
| 6. Докрашивают препарат 30 с 0,5% водным раствором нейтрального красного. | |
| 7. Промывают, сушат и микроскопируют. |
Результат окраски:
кислотоустойчивые споры окрашиваются в голубой цвет, а бактериальнаяклетка – в красный.
Методика окраски спор по Ожешко:
| Задание | Примечание |
| 1. На нефиксированный мазок наносят 0,5 % р-р HCI и подогревают над племенем горелки в течение 1-2 мин, после чего остатки кислоты сливают. | ВНИМАНИЕ! Подогревают до образования паров. |
| 2. Промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки. | ВНИМАНИЕ! Перед промыванием мазок обязательно охладить. |
| 3. Препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят карболовый фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще paз. | |
| 4. После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой. | |
| 5. Препарат обесцвечивают 5% р-ом серной кислоты, наливая кислоту на стекло. | |
| 6. Препарат несколько раз промывают водой. | |
| 7. Окрашивают водно-спиртовом раствором метиленового-синего в течение 3-5мин. | |
| 8. Препарат промывают водой и высушивают, промокая фильтровальной бумагой. |
Результат окраски:
кислотоустойчивые споры окрашиваются в красный цвет, а бактериальнаяклетка – в голубой (синий).
Задание № 8.
Сделайте по три мазки из чистых культур антракоидов, высушите и зафиксируйте их над пламенем горелки.
Задание № 9.
Окрасьте:
один мазок по методу Ожешко,
второй мазок по методу Пешкова,
третий мазок по методу Шеффера-Фультона.
Задание № 10.
Изучите препараты при помощи иммерсионной системы.
Задание № 11.
1. Зарисуйте и подпишите морфологию микроорганизмов в альбом.
 | |||||
 |  | ||||
Рис. 1. Окраска по Ожешко Рис.2.Окраска по методу Пешкова. Рис.3.Окраска по Шефферу-
Фультону
Задание № 12.
Сделайте мазки из чистых культур клебсиелл и пневмококков.
Задание № 13.
Изучите методику окраски капсул по Гинсу-Бурри и по методу Книги.
Данные методы окраски позволяют выявить капсулу толщиной >0,5 мкм. Микрокапсула или слизистый слой может быть определена только с помощью серологических методов диагностики.
Задание
Окрасьте препарат по методу Бурри, а затем по методу Бурри-Гинсу.
Методика окраски капсул по Бурри:
| Этапы окрашивания | Примечание |
| 1. На середину предметного стекла нанесите капельку туши в разведении 1:9 | |
| 2. В каплю туши внесите культуру | |
| 3. Ребром покровного стекла сделайте мазок | Можно сделать мазок ребром шлифованного стекла, как мазок из крови |
| 4. Высушите. | |
| 5. Промикроскопируйте. |
Результат окраски: на черном фоне видны неокрашенные микробы,
капсулы