Смыв с поверхности
Для определения количества микроорганизмов на поверхности продукта пользуется проволочными мерками или металлическими шаблонами с ручкой разной площади /2х2см, 5х10см, 10х10см./. Мерку или шаблон опускают в спирт и затем обжигают над огнем для стерилизации. Приложив мерку или шаблон к исследуемой поверхности, стерильным влажным марлевым или ватным тампоном тщательно протирают ограниченную площадь. После этого тампон помещают в колбочку с определенным/мерным/количеством стерильной воды. Вторым сухим тампоном обтирают вновь ту же площадь и сбрасывают тампон в ту же колбочку.
Смыв с посуды
В посуду определенной емкости наливают 1л стерильной воды. Наклоняя посуду в разные стороны, обмывают этой водой всю внутреннюю поверхность в течение 5-10мин. После этого производят посев 1мл смывной воды в чашку и заливают его остуженным до 45*(градусов) мясопептонным агаром. Посев помещают в термостат на 48час. При температуре 30-37*. После этого подсчитывают выросшие колонии. Для перевода полученной величины на 1мл нормального наполнения посуды надо число колоний разделить на емкости посуды.
Смыв с рук
Заранее заготовляют и стерилизуют пробирки с опущенными в них на деревянной палочке или алюминиевой проволоке ватным тампонами. В пробирках должно быть 2-3мл воды и точно 10мл… Для определения общего количества микроорганизмов в 10мл стерильной воды опускают стерильный ватный тампон и скачивают его. Затем тампон вынимают, обмывают им пальцы, ладони и тыльные части обеих рук и помещают его обратно в стерильную пробирку с оставшейся стерильной водой. Ополаскивают тампон водой в течение 5мин. и отжимают.
Питательные среды
По форме различают жидкие и твердые(плотные) питательные среды. Твердые среды приготовляют из жидких путем добавления к ним 1,5-3% агара или 10-15% желатина.
Агар – коллоидное вещество, получаемое из некоторых морских водорослей. Представляет собой смесь углеводов (полисахарид). В водной среде агар плавится при температуре 90-100* и застывает при 40*. При застывании дает плотный гель, но выделяет конденсационную воду. Агар бактериологически индифферентен, однако чувствителен к кислотности среды. При стерилизации агара с рН ниже 5 происходит его частичный гидролиз и получается слабый гель.
Желатин – смесь белковых веществ животного происхождения. Его получают из кожи, сухожилий, костей. При нагревании с водой желатин образует коллоидный раствор, застывший при 18-20* в гель. При 25-37* гель переходит в золь. Желатин бактериологически не индифферентен. Микроорганизмы, обладающие протеолитическими ферментами, гидролизуют его (разжижают). Стерилизуют желатин дробной стерилизацией, так как высокая температура и повышенное давление вызывает его гидролиз и он теряет способность переходить из состояния золя в состояние геля.
Мясопептонный бульон (МПБ).
В 1 л мясной воды растворяют при подогревании и помешивании 10 г пептона (1%) и 5 г (0,5%) хлористого натрия. Рекомендуется брать 3 части хлористого натрия и 2 части двузамещенного фосфорнокислого натрия. Смесь вводится в количестве 0,5%. Фосфорнокислый натрий стабилизирует реакцию среды и служит дополнительным источником фосфора. Устанавливают рН среды до 7,6—7,8, кипятят 30—45 минут до выпадения осадка.
Охлаждают, фильтруют через бумажный ф+ильтр, доливают водой до первоначального объема, проверяют рН.
Разливают по пробиркам, флаконам и стерилизуют 15— 20 минут в автоклаве при 120°С.
Концентрированный мясо-пептонный бульон готовят на особой мясной воде (1 кг мяса заливают 1 л воды). Такой бульон служит для выращивания анаэробных и других микробов.
Мясопептонный желатин (МПЖ) - среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Это плотная питательная среда, для приготовления которой используют сухой желатин. Желатин - вещество белковой природы, кислый азотсодержащий продукт, добываемый путём вываривания костей, хрящей. Для приготовления МПЖ к 1 л МПБ добавляют 100- 150 г желатина, настаивают несколько часов для набухания желатина и затем нагревают до его полного растворения. Используют щелочь для доведения реакции среды до слабощелочной. Фильтруют горячую среду через складчатый бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют дробно текучим паром в аппарате Коха. Применение МПЖ ограничено в связи с тем, что он разжижается под действием протеолитических ферментов, выделяемых многими микроорганизмами. Кроме того, образуемый желатином гель плавится уже при 23-25 ºС и застывает при 20 ºС и ниже, а большинство микробов развивается при 30-37 ºС. Используют для выявления культуральных и биохимических признаков идентифицируемых микроорганизмов.