Приготовление микропрепаратов и окраска по Граму, Бури – Гинсу, Нейссеру, Цилю – Нильсену, простым способом. Микрокопирование в иммерсионной системе.
Метод Грама. 1) на фильт бумагу карб р-р генцианвиолет-1-2 м; сним бумагу, 2. раствор Люголя (1 м), обесцв спирт 96% (30сек). П. 4)Фуксин (1-2)
Окрака по Бури-Гинсу. Обнаружение капсул бактерий. В каплю туши вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметном стеклу. Мазок высушивают, фиксируют. окрашивают карболов фукчином 3-5мин. Промыв водой, высушивают. На темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокрг красных бактерий.
Окраска по Нейссеру. При этом методе гранулы валютина- сине-черные, а бактерия- желтая. При этом мазок: 1) окрашивают 1 мин уксуснокислым метиленовым синим, сливают краситель, промывают водой, 2) наливают раствор Люголя на 30 сек.3) окрашивают 1-3 мин везувином, промывают водой и высушивают.
Окраска по Цилю-Нильсену. Применяется для выявления кислото- и спиртоустойчивых, споры. 1) полоской фильтрованной бумаги карб фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров, подливая краситель. Далее бумагу снимают, обрабатывают 5% раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают раствор метиленового синего, спустя 3-5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой. В светло-синий цвет.
2. Посев исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды. Культуральные свойства микроорганизмов.
| Пит.среды: По происх: ест, иск, синт По конс: тверд, жидк, полужидк По сост: прост, сложн | Культур признаки: По велич кол:круп, ср, мал По форме:кругл, розеткообразн, многолопастн Цветзавис от выработки пигмента Консистсухие, влажные,сочные Пов-ть гладк, шерохов, исчерч Хар-р роста:диффузн, придонный, пристен, обр пленки, осадка |
Методы культивирования анаэробов.
I этап — обогащение на среде Китт — Тароцци, предварительно прокипяченной в течение 30 минут для удаления пузырьков воздуха. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются. II этап — получение изолированных колоний На средах Китт — Тароцци обнаруживается помутнение с пузырьками газа. Выделение чистой культуры проводится по одному из следующих методов:
А) по Цейсслеру — каплю материала со среды Китт — Тароцци засевают в чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же шпателем производят посев во второй и третьей чашках;
Б) по Вейнбергу: каплю материала со среды Китт — Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем под струю холл воды и инкубируют в термостате.
Ш этап — выделение чистой культуры на среде Китт — Тароцци.
Определение ОМЧ воздуха по методу Коха.
Седиминтационный метод. чашку Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 5 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при 37°С 2 сут. Результаты оценивают по суммарному числу колоний.на 100см2 за 5 мин – 10 л возд
Аспирационный метод - Посев воздуха осуществляется с помощью прибора Кротова
Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просачивается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
Стерилизация и дезинфекция лабораторной посуды.
В микробиологической практике применяют различные дезинфицирующие вещества: 0,2% раствор жавель-солида, 3-5% растворы фенола, 5-10% растворы лизола, 1-5% растворы хлорамина, 3-6% растворы перекиси водорода, 1-5% растворы формалина, растворы сулемы в разведении 1:1000 (0,1%), 70% спирт и др.
Загрязненные патологическим материалом или культурами микроорганизмов пипетки, стеклянные шпатели, предметные и покровные стекла опускают на сутки в стеклянные банки с 0,2% раствор жавель-солида, 3% раствором фенола или перекиси водорода. Препаровальные иглы, бактериальные петли после употребления немедленно прокаливают на огне.
Поверхность рабочего стола протирают кусочком ваты, смоченным 3% раствором фенола. Руки дезинфицируют 1% раствором хлорамина.
Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутылки, матрацы, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажный колпачек. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-5 штук или в пеналах.Пастеровские пипетки по 3-5-10-15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты.
Лабораторную посуду стерилизуют:
а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180?С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.
б) в автоклаве при давлении 1 атм. В течение 20-30 минут