ОЦЕНКА ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА
-ДИАГНОСТИКА И КЛИНИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ИММУНОДЕФИЦИТОВ
(ПЕРВИЧНЫХ И ВТОРИЧНЫХ)
-ДИАГНОСТИКА И КЛИНИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ
МОНОКЛОНАЛЬНЫХ ГАММАПАТИЙ
-ДИАГНОСТИКА И КЛИНИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
В основном в клинической иммунологии определяют иммуноглобулины основных классов
Иммуноглобулин G - является активным против грамотрицательных микробов, токсинов и вирусов.
С помощью Ig G антител микробы и чужеродные клетки лизируются и агглютинируются. С помощью CH 2 и CH 3 доменов Ig G взаимодействуют с Fc рецепторами макрофагов, моноцитов, нейтрофилов, натуральных киллеров и клеток плаценты. Комплемент взаимодействует с CH 1 и СH 2 доменами Ig G
У новорожденного ребенка уровень IG G равен материнскому или понижен при патологии плаценты. Нижняя концентрация Ig G наблюдается в 3-4 месяца. Уровень взрослого достигается в 7-8 лет жизни. Период полужизни равен 23 дня. Он состоит из 4 подклассов - G 1, G 2, G 3, G 4.
- Иммуноглобулин A нейтрализует вирусы и бактериальные токсины, может активировать систему комплемента. В секретах находится в димерной форме
Секреторный Ig A имеет 2 вида Н цепей - µ1 и µ2. Выявляется в слюне, выделениях трахеобронхиального, урогенитального, пищеварительного трактов, в молозиве, грудном молоке. Секреторный IG A защищен от протеолиза секреторным компонентом.
Концентрация Ig A у новорожденных и детей раннего возраста очень низкая, к 10-14 годам приближается к уровню взрослых.
Иммуноглобулин М с эволюционной точки зрения является старейшим. Образуетс на ранних этапах имунного ответа и совместно с комплементом лизирует бактерии и чужепродные клетки.
При первом контакте с антигеном синтезируются сначала Ig M, а затем Ig G антигела. При повторном введении того же антигена Ig G антитела синтезируются в большем количестве, чем Ig M. Ig M в сыворотке находится в виде пентамера и имеет наибольший молекулярный вес.
Ig M снижение
Транзиторная младенческая гипогаммаглобулинемия, врожденная гипо, агаммаглобулинемия и другие иммунодефициты, новообразования иммунной системы, лечение цитостатиками и иммунодепрессантами, состояние после спленэктомии, хроническая вирусная инфекция, кишечные и почечные синдромы потери белка
Ig G снижение
Транзиторная младенческая гипогаммаглобулинемия, врожденная гипо-, агаммаглобулинемия и другие иммунодефициты, новообразования иммунной системы, лечение цитостатиками и иммунодепрессантами, состояние после спленэктомии, хроническая вирусная инфекция, кишечные и почечные синдромы потери белка, гемоглобинопатии
Ig A снижение
Транзиторная младенческая гипогаммаглобулинемия, врожденная гипо-, агаммаглобулинемия, селективный дефицит IgA, новообразования иммунной системы, лечение цитостатиками и иммунодепрессантами, состояние после спленэктомии, острая вирусная, хроническая бактериальная инфекция, кишечные и почечные синдромы потери белка, аутоиммунные заболевания с локализацией в легких и кишечнике, IgA- нефропатия
Ig M увеличение
Острые инфекции, аутоиммунные заболевания, ревматоидный артрит, цирроз печени, эндотелиомы, остеосаркомы, миеломная болезнь, макроглобулинемия Вальденстрема, муковисцидоз, бронхиальная астма, моноклональная гаммапатия, лимфолейкозы
Ig G увеличение
Острые инфекции, аутоиммунные заболевания, ревматоидный артрит, заболевания печени, миеломная болезнь, макроглобулинемия Вальденстрема, муковисцидоз, саркоидоз, моноклональная гаммапатия, хронический лимфолейкоз, инфекционный мононуклеоз, реконвалесценция первичной бактериальной инфекции, острый период повторной инфекции, СПИД
Ig A увеличение
Острые и хронические инфекции, особенно респираторного и желудочно-кишечного тракта, аутоиммунные заболевания, заболевания печени, эндотелиомы, остеосаркомы, миеломная болезнь, макроглобулинемия Вальденстрема, муковисцидоз, бронхиальная астма, моноклональная гаммапатия, лимфолейкозы
До настоящего времени наибольшее распространение получили методы иммунопреципитации в геле, которые подразделяются на метод простой линейной иммунодиффузии, метод двойной иммунодиффузии, метод радиальной иммунодиффузии, рокиммуноэлектрофорез.
Основа этих методов состоит в том, что при встрече антигена и антител в агаре происходит их взаимодействие, образуется преципитат, который выпадает в виде визуально определяемых зон или полос. Подобное взаимодействие обязательно происходит при условии эквивалентности соотношения антигена и антител, при котором оба компонента обязательно включаются в преципитат.
При вариантах линейной иммунодиффузии преципитат имеет вид линии с соответствующей зоной помутнения в сторону антигена, при радиальной иммунодиффузии преципитат имеет форму кольца, при рокэлектрофорезе антиген перемещается в одном направлении концентрация антигена резко уменьшается латерально от этого направления и по окончании электрофореза преципитат имеет вид ракеты. Метод рокэлектрофореза является ценным методом для опрелделения концентрации моноклональных Ig.
Метод Манчини- вариант радиальной иммунодиффузии, до сих пор остается распространенным методом иммунологической диагностики. Его Преимущества
-Относительно прост
-Хорошо воспроизводим
-Легко доступен практически всем лабораториям клинической иммунологии
Недостатки
-Имеет ошибку 15 %
-Нижний предел чувствительности 10 мг/л
В последнее время получают все большее распространение нефелометрия и турбидиметрия.
Нефелометрия основана на регистрации светового потока, который рассеивается комплексом антиген антитело, взвешенным в оптически прозрачной среде.
Турбидиметрия основана на регистрации света поглощаемого образовавшимся комплексом антиген-антитело. Большим преимуществом методов является быстрота получения результатов -несколько минут. Для Манчини – для Ig G и Ig A 24 часа Ig M 48 часов.
- Имеются нефелометры предназначенные как для потоковых исследований, так и для небольших лабораторий
Фирмы “Bering”, “Beckman”
Для определения иммуноглобулинов широкое распространение нашел и твердофазный ИФА.
Он применяется чаще для определения минорных концентраций иммуноглобулинов –Е и D, для определения Ig в супернатантах культур лимфоцитов периферической крови.
Определяют также и наличие антител к ряду патогенных и условно-патогенных бактерий и вирусов- стафилококкам, кишечной палочке.
Определение антител образующихся в результате вакцинации (АКДС)
Исследование комплемента
Исследование гемолитической активности комплемента- функциональный показатель, снижается при недостатке хотя бы одного из компонентов.
Принцип метода состоит в лизисе активированным комплементом (его мембраноатакующим комплексом (С5-С8) иммунных комплексов, которыми в данном случае являются эритроциты нагруженные антиэритроцитарными антителами. В присуствии С происходит их лизис. Активность выражают в условных гемолитических единицах. За гемолитическую единицу принимают такое количество С, которое вызывает 50 % гемолиз стандартного числа сенсибилизированных эритроцитов (СН 50).
Определение компонентов С-С 3 и С4 проводят с помощью нефелометрии или иммунодиффузии.
По их исследованию определяется преимущественный путь активации комплемента- С 4 расходуется при активации по классическому пути, С 3 учавствует в активации классического и альтернативного пути.
При активации альтернативного пути уровень С 3 снижается более значительно, при СКВ с поражением почек, ЦНС и гемолитической анемией. При РА исследуют гемолитическую активность и компоненты С также и в синовиальной жидкости, где она обычно снижается.
Большую роль в оценке иммунного статуса приобретает оценка системы фагоцитирующих клеток – нейтрофилов, моноцитов и макрофагов. В клинической иммунологии при оценке иммунного статуса принято оценивать эти клетки как эффекторы фагоцитоза, однако с современных позиций эти представления серьезно пересмотрены
Как известно фагоцитарный процесс состоит из ряда последовательных стадий, взаимосвязанных и взаимообусловленных.
Движение
Адгезия
Поглощение
Дегрануляция