Задания для выполнения лабораторной работы

Занятие 8

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОБОВ КИШЕЧНОЙ ГРУППЫИ ВЫЗЫВАЕМЫХ ИМИ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШОНГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И САЛЬМОНЕЛЛЕЗА

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: знать таксономию, основные свойства возбудителей, эпидемиологию, микробиологическую диагностику', принципы профилактики и лечения

уметь: учитывать характер роста на средах Эндо, Левина возбудителей дизентерии, ста­вить реакцию агглютинации на стекле, делать пересев на среду Ресселя, учитывать их биохимические свойства и реакцию агглютинации с парными сыворотками, реакцию Видаля.

 

Таксономия: семейство - Enterobacteriaceae, трибы - Escherichieae, Kleb- sielleae, Proteae, Yersinieae, Erwinieae. Семейство - Enterobacteriaceae, род - Salmonella, вид - S.typhi (палочка Эберта-Гаффки), S.paratyphi А (палочка Бриона-Кайзера), S.paratyphi В (палочка Шотмюллера), S.paratyphi С (палочка Хиршфельдта). S. enterica, S. bongori.

 

План занятия

1. Биологические свойства возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ).
2. Методы лабораторной диагностики острых кишечных инфекций.
3. Особенности выделения возбудителя в зависимости от исследуемого мате­риала (кровь, испражнения, моча, смывы с предметов и др.).
4. Идентификация возбудителей острых кишечных инфекций.
5. Биологические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов, сальмонеллеза.
6. Патогенез брюшного тифа и паратифов, сальмонеллеза.
7. Особенности микробиологической диагностики сальмонеллеза и тифо-паратифозных заболе­ваний в зависимости от стадии заболевания. Выделение гемо- и копрокультуры.
8. Серодиагностика тифо-паратифозных заболеваний, сальмонеллеза.
9. Диагностика бактерионосительства.
10. Лечение и профилактика тифо-паратифозных заболеваний, сальмонеллеза.

 

Задания для выполнения лабораторной работы

Цель работы - изучение свойств возбудителей острых кишечных ин­фекций и методов диагностики вызываемых ими заболеваний. ИЗУЧИТЬ бактериоскопический метод, бактериологический метод при ОКИ.

1. Бактериоскопический метод: промикроскопировать и зарисовать демон­страционные препараты из чистой культуры возбудителей ОКИ, окрашенных по ме­тоду Грама. Отметить сходство их морфологических и тинкториальных признаков.

2.Бактериологический метод:

-изучить выпускаемые промышленностью и готовые к употреблению электив­ные, дифференциально-диагностические питательные среды и среды обогащения, применяемые для диагностики ОКИ;

- учесть результаты первичного посева исследуемого материала на односахар­ных средах Эндо, Левина, Плоскирева. Описать и зарисовать колонии, выросшие на данных средах и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего ис­следования;

- учесть результаты пересева подозрительных колоний на средах Ресселя или Олькеницкого. Зарисовать рост микробов, объяснить причину изменения сред (фер­ментация углеводов, разложение мочевины, образование сероводорода);

- провести идентификацию чистой культуры:

 

• по демонстрационным посевам на среды Гисса и МПБ изучить биохимические

свойства возбудителей ОКИ;

 

• рассмотреть и оценить демонстрационную ориентировочную реакцию агглю­тинации на стекле со специфическими сыворотками.

- ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препара­тами.

 

Цель работы - выделение чистой культуры возбудителя и его идентифи­кация. ИЗУЧИТЬ бактериологический метод и серологический метод при ОКИ.

1. Бактериологический метод (выделение гемокультуры):

- сделать посев крови, взятой от больного с подозрением на тифо-паратифоз- ное заболевание на среду Раппопорта в соотношении 1:10;

- отметить характер роста микробов на ранее засеянной среде Раппопорта: на­личие помутнения и изменения цвета среды, присутствие или отсутствие газообра­зования. Сделать мазок и окрасить его по Граму, приготовить препарат «висячая» капля. Произвести пересев на среду Эндо или Левина;

- изучить характер роста культуры на ранее засеянной среде Эндо или Левина. Описать и зарисовать выбранные подозрительные колонии для дальнейшего иссле­дования, произвести пересев на среду Ресселя;

- отметить характер роста культуры на ранее засеянной среде Ресселя, приго­товить мазок и окрасить его по Граму, сделать пересевы на среды Гисса и МПБ с двумя индикаторными бумажками для определения образования сероводорода и ин­дола, поставить реакцию агглютинации с агглютинирующими специфическими сы­воротками;

- по демонстрационным посевам отметить характер изменений на средах Гис- са и МПБ;

- сделать заключение по проведенным исследованиям.

2. Серологический метод:

- записать схему постановки реакции Видаля (табл. 4) и механизм реакции Vi- гемагглютинации;

- по демонстрационным реакциям оценить и записать различные варианты ре­акции Видаля: инфекционную, анамнестическую, прививочную;

- учесть по демонстрационным планшетам реакцию Vi-гемагглютинации (РИГА).

3. Записать схему микробиологической диагностики при брюшном тифе и паратифах.

Учет результатов реакции Видаля начинают с контролей. Контроль сыворотки должен оставаться прозрачным. Контроль антигена - равномерно мутным. Про­сматривают пробирки в проходящем свете (лучше на темном фоне) невооруженным глазом, с помощью лупы или агглютиноскопа. При положительном результате реак­ции в пробирках видны зерна или хлопья агглютината. Диагностический титр реак­ции Видаля равен 1:200.

Однако в лабораторной практике наиболее широко используют постановку развернутой реакции агглютинации Видаля. Она ставится одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, так как содер­жание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. Раньше (конец первой не­дели) появляются О-агглютины как результат ответа организма на более сильный раздражитель, которые исчезают к моменту выздоровления («инфекционный Ви­даль»), Н-агглютины появляются в разгар заболевания, накапливаются к его концу и сохраняются у переболевших в течение длительного времени («анамнестический

Видаль»), У людей, вакцинированных против брюшного тифа и паратифов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре. В связи с этим «инфекционный Видаль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания.

Реакция непрямой Vi-гемагглютинации. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используется реакция непрямой Vi- гемагглютинации. Она позволяет обнаружить в сыворотке крови лю­дей присутствие антител к Vi-антигену. В качестве антигена используют эритроци- тарный Vi-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека I (0) группы крови, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном брюшнотифозных бактерий. Используемую сыворотку разводят от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно лунки планшета в виде диска с зазубренными краями («зонтики»), а надосадочная жидкость остается про­зрачной. При отрицательной реакции, также как и в контроле, эритроциты осажда­ются на дно лунки и имеют вид диска с ровными краями («пуговки»). Диагностиче­ское значение имеет титр непрямой Vi- гемагглютинации, начиная с разведения 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови которых дает положительный результат в РИГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство брюшнотифозных бактерий и подвергают многократному бактериологиче­скому обследованию.

 

Цель работы - выделение возбудителя из исследуемого материала при подозрение на сальмонеллез. ИЗУЧИТЬ бактериологический метод при ОКИ.

1. Бактериологический метод:

-сделать посев исследуемого материала на дифференциально-диагности- ческие среды Эндо, Левина, Плоскирева;

-учесть результаты готовых посевов на чашках, отобрать лактозоотрицатель­ные колонии;

-из выбранных колоний приготовить мазок, окрасить по Граму, сделать пере­сев на среду Ресселя;

-учесть результаты готовых посевов на среде Ресселя;

-с засеянной среды Ресселя сделать посев на пестрый ряд Гисса;

-отметить биохимические свойства исследуемой культуры по ранее засеян­ному пестрому ряду;

-провести серологическую идентификацию в реакции агглютинации с агглю­тинирующими диагностическими сыворотками.

2. Сделать заключение по проведенным исследованиям.

 

Вопросы для обсуждения

 

Общая характеристика микробов кишечной группы

1. Общие свойства заболеваний, относящихся к группе ОКИ. 2. Со­временная классификация возбудителей ОКИ. 3. Общие признаки возбудителей.

4. Антигенная структура. 5. Характеристика и механизм действия факторов пато­генности. 6. Биохимические свойства энтеробактерий, используемые для их иден­тификации и дифференциации. 7. Питательные среды, применяемые при диагностике кишечных инфекций. Их состав и особенности применения. 8. Методы лабораторной диагностики ОКИ. 9. Бактериологическое исследование как ведущий метод диагностики ОКИ. 10. Основные принципы лечения и профилактики ОКИ.

 

Возбудители брюшного тифа, паратифов

1. Основные свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов. Их сходство и различие. 2. Антигены сальмонелл, их химический состав и значение. Классифи­кация сальмонелл по Кауфман-Уайту. 3. Экология и эпидемиология тифо- паратифозных заболеваний. 4. Патогенез, клиника и иммунитет. 5. Локали­зация сальмонелл в организме на разных стадиях болезни. Значение этого явления для правильной лабораторной диагностики. 6.Ранняя диагностика брюшного тифа и паратифов. 7. Серодиагностика тифо-паратифозных заболеваний. 8. Характеристи­ка инфекционной, прививочной и анамнестической реакций Видаля. 9. Схема ис­следования на копрокультуру, ее особенности. 10. Причины формирования бакте­рионосительства при брюшном тифе. 11. Методы диагностики брюшнотифозного носительства. 12. РИГА (Vi-агглютинация) с эритроцитарным Vi-диагностикумом: механизм, значение. 13. Постановка аллергической кожной пробы с Vi-тифином. 14. Фаготипирование сальмонелл, практическое применение. 15. Специфическая профилактика и терапия-брюшного тифа и паратифов.

 

Возбудитель сальмонеллезов

1.Классификация пищевых отравлений бактериальной природы. 2. Общая ха­рактеристика пищевых токсикоинфекций. 3. Основные возбудители пищевых токсикоинфекций. 4. Современная классификация сальмонелл. 5. Биологические свой­ства сальмонелл. 6. Антигенная структура сальмонелл, классификация Кауфмана- Уайта. 7. Эпидемиология сальмонеллеза. 8. Особенности патогенеза и клинической картины сальмонеллеза. 9. Методы микробиологической диагностики сальмонелле­за. 10. Принципы профилактики и лечения сальмонеллеза.