Исследуемый материал (см. метод А)

В. Аллергический

(для ретроспективной диагностики) – проба с пестином.

Г. Серологический

Применение иммунологических реакций для обнаружения антигенов возбудителя (РПГА и ее модификации, ИФМ, РИМ).

ВОЗБУДИТЕЛИ ИЕРСИНИОЗОВ (Yersinia pseudotuberculosis; Y. enterocolitica)

Эти два вида иерсиний играют значительную роль в патологии человека. Бактерии представляют собой полиморфные, не образующие спор грамотрицательные палочки, имеющие часто овоидную форму. Клетки в старых культурах окрашиваются неравномерно. Бактерии псевдотуберкулеза, взятые с влажного агара, могут иметь биполярную окраску, образуют капсулу, но с различной степенью выраженности. Оба вида бактерий обладают подвижностью, обусловленной наличием перитрихиальных жгутиков. Подвижность выявляется посевом в столбик полужидкого агара уколом, но только при 18-20ºC, при 37°C подвижность отсутствует.

Иерсинии неприхотливы к питательным средам, хорошо растут на обычных универсальных средах, способны активно размножаться в почве и воде. Оптимальная для роста температуре 30ºС, верхняя и нижняя границы роста составляют 43°С и 0-2°С соответственно, оптимум рН 6,6-7,8. На среде Эндо колонии имеют диаметр 0,1-0,2 мм, круглые выпуклые, блестящие с ровными краями, бесцветные (не ферментируют лактозы). Колонии возбудителя псевдотуберкулеза, находящиеся в R-форме, почти не отличаются от колонии возбудителя чумы (пигментированный центр и фестончатый "кружевной" край). Биохимические различия трех видов иерсиний представлены в таблице.

Все три вида иерсиний отличаются и по своим антигенным свойствам.

Возбудитель псевдотуберкулеза по O-антигенам разделяется на восемь групп (1-8) с 20 O-факторными антигенами (1-20). По O- и Н-антигенам (а-е) этот вид подразделяют на 13 сероваров и подсероваров (la, 1в, 2а, 2в, 2с, 3, 4а, 4в, 5а, 5в, 6, 7, 8).

Y. enterocolitica характеризуется антигенной неоднород­ностью по 0-антигену. В настоящее время различают более 30 сероваров этого вида. Большинство из них адаптированы к некоторым видам животных или широко распространены во внешней среде. Подавляющее большинство штаммов, выделенных от человека, принадлежат к сероварам 03 и 09, реже встречаются серовары 08, 05в и очень редко - серовары 01, 02, 06, 07, 010, 011, 013, 014, 015, 016, 017.

От людей, больных псевдотуберкулезом, чаще всего выделяются штаммы, относящиеся к серовару 1, реже 3 и 4.

В ходе эволюции у иерсиний закрепилась необходимость существования в двух средах обитания - внешней (сапрофитическая фаза жизни) и в организме теплокровных животных и человека (паразитическая фаза). Для осуществления паразитической стадии иерсинии должны проникнуть в организм теплокровного животного. Заражение возбудителем псевдотуберкулеза чаще всего происходит при употреблении в пищу инфицированных иерсиниями продуктов, хранившихся при пониженной температуре (4-12ºС) в холодильниках и овощехранилищах. В этих условиях бактерии в силу своей психрофильности могут размножаться и накапливаться в пищевых субстратах.

Иерсинии при пониженной температуре обладают высоким потенциалом клеточной и тканевой инвазивности и способны сохранять высокий уровень вирулентности, однако возбудитель может проникнуть в организм человека и через любые слизистые оболочки, вероятно, за счет неспецифических механизмов.

Основным источником иерсиниозов являются дикие и синантропные грызуны, домашние и сельскохозяйственные животные. Возможно заражение человека от человека. Штаммы Y. pseudotuberculosis выделены от 175 видов млекопитающих, 124 видов птиц, 7 видов рыб. Зараженные грызуны, животные и люди выделяют возбудителя с испражнениями и мочой, загрязняя воду, растения и другие объекты внешней среды. Таким образом, пищевой путь в передаче возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза является ведущим. Заражение происходит в результате употребления в пищу сырых или недостаточно термически обработанных продуктов (мяса, мясных продуктов, молока, овощей, фруктов, зелени). Оба вида возбудителя способны существовать внутри растений (салата, гороха, овса и т.п.).

Заболевания, вызываемые иерсиниями, характеризуются полиморфностью клинических проявлений, поражением желудочно-кишечного тракта, тенденцией к генерализации, септикопиемии и поражению различных органов и систем.

Патогенные свойства иерсиний обоих видов, как и возбудителя чумы, во многом определяются наличием у них плазмид с молекулярной массой 42-48 МД и 82 МД. Плазмиды контролируют такие свойства возбудителей, как зависимость роста от наличия в среде кальция, способность синтезировать антигены вирулентности (v-w), пили адгезии, способность вызывать кератоконъюнктивит у морской свинки и т.п.

Микробиологическая диагностика иерсиниозов включает использование бактериологического метода и серологических реакций.

При бактериологическом методе исследуемый материал от больных (испражнения, кровь, слизь из зева), а также подозрительные продукты или воду засевают на среды Эндо, Плоскирева, Серова (индикаторную и дифференциальную) и инкубируют при 37°C в течение 48-72 часов.

Подозрительные колонии (мелкие бесцветные на средах Эндо и Плоскирева и окрашенные колонии двух различных форм на средах Серова) пересевают для получения чистых культур, которые идентифицируют по биохимическим признакам и окончательно типируют с помощью диагностических агглютинирующих сывороток.

Для серологической диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза используют развернутую реакцию агглютинации (по типу реакции Видаля) с соответствующими диагностикумами или реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Положительными считают реакции при титре антител 1:400 и выше. Реакции рекомендуется ставить с парными сыворотками (с интервалом в несколько дней). Нарастание титра антител будет свидетельствовать о специфичности инфекционного процесса.

Таблица 1.Дифференциальные признаки биоваров Y. рestis

Отечественная классификация вида Yersinia pestis (Саратов, 1985)

Y. pestis subsp. рestis - основной подвид

Y. pestis subsp. аltaica - алтайский подвид

Y. pestis subsp. сaucasica - кавказский подвид

Y. pestis subsp. hissarica - гиссарский подвид

Y. pestis subsp. ulegeica - улэгейский подвид

Особенности генетического контроля факторов

патогенности у возбудителя чумы

Контроль наиболее важных факторов патогенности возбудителя чумы осуществляется плазмидами, на которых локализованы гены вирулентности. Известны три плазмиды, контролирующие важнейшие факторы патогенности возбудителя: рYР (м.м.6 МД); рYТ (м.м. 60 МД) и рYV (м.м. 47 МД).

Плазмида рYР (6 МД) несет гены, определяющие синтез пестицина. фибринолизина и плазмокоагулазы.

Плазмида рYТ (60 МД) несет детерминанты, контролирующие синтез антигена фракции I и "мышиного" токсина.

Плазмида рYV (47 МД) ответственна за синтез антигенов v и w и термоиндуцибельных белков внешней мембраны, а также зависимость роста чумной палочки от наличия в среде ионов Са⁺⁺.

Основные различия между возбудителями чумы,

псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза

МЕТОДЫМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

А. Бактериологический

Б. Биологический

Материал: загрязненный или с низким содержанием бруцелл
Вводится морской свинке по 1,0 мл подкожно в паховую область
Через 30 дней	Посев материала из органов и лимфатических узлов на питательные среды для выделения чистой культуры
Проба Бюрне	Реакция Райта

В. Серологический

Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.