1. Реакция агрегат-гемагглютинации.
2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).
3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.
4. Реакция коагглютинации.
Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.
Г. Аллергический - проба Бюрне
ЗАНЯТИЕ № 2
Дата________________
Тема: СТАФИЛОКОККИ, СТРЕПТОКОККИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ
План занятия
1. Изучение морфологии и культуральных свойств стафилококков.
2. Бактериоскопическое исследование гноя.
3. Изучение морфологии и культуральных свойств стрептококков.
4. Знакомство с морфологическими свойствами пневмококка (демонстрация).
5. Исследование флоры зева. Микроскопия и посев на кровяной агар и молочно-желточно-солевой агар.
Методические указания
1. Изучение морфологии и культуральных свойств стафилококков
Макроскопически исследовать культуральные свойства стафилококка: обратить внимание на морфологию колонии на поверхности МПА (форма, размер, прозрачность, пигмент, край колонии), характер роста на МПБ (мутность, осадок).
Промикроскопировать, окрашенные по Граму препараты основных видов стафилококков, выросших на плотных и жидких питательных средах, изучить различия во взаиморасположении кокков в зависимости от способа культивирования. Препараты зарисовать.
2. Бактериоскопическое исследование гноя
Микроскопически изучить препарат-мазок из гноя, окрашенный по Граму. Обратить внимание на взаиморасположение кокков в препаратах-мазках из гноя. Препарат зарисовать.
3. Изучение морфологии и культуральных свойств стрептококков
Обратить внимание на внешний вид культур стрептококков на жидких и плотных средах - придонно-пристеночный рост на сахарном бульоне, величину колоний и наличие зоны гемолиза или позеленения на кровяном МПА.
Промикроскопировать, окрашенные по Граму препараты-мазки из культур гемолитического и зеленящего стрептококков с кровяного МПА и сахарного МПБ. Сравнить морфологию одного и того же вида стрептококка, выращенного на жидких и плотных питательных средах. Препараты зарисовать.
4. Знакомство с морфологическими свойствами пневмококка
(демонстрация).
Изучение морфологии пневмококков в мазках-отпечатках из органов белой мыши, зараженной внутрибрюшинно мокротой больного пневмонией. Окраска по Граму.
5. Исследование флоры зева. Микроскопия и посев на кровяной агар и молочно-желточно-солевой агар.
Взять материал со слизистой зева друг у друга стерильным ватным тампоном. Для приготовления мазка материал с тампона растереть на поверхности предметного стекла, предварительно прокаленного и остуженного (стекло должно быть стерильным, чтобы не загрязнить тампон). После приготовления мазка тем же тампоном произвести посевы на половину чашек с кровяным МПА и молочно-желточно-солевым агаром. Приготовленный мазок зафиксировать, окрасить по Граму и промикроскопировать. Обратить внимание на наличие в мазке кокков и характер их взаиморасположения.
| Рис.1 на МПА | Рис. 2 на МПБ |
| Золотистый стафилококк – Staphylococcus aureus | |
| Рис.3 на МПА | Рис.4 на МПБ |
| Эпидермальный стафилококк – Staphylococcus epidermidis | |
| Рис 5 на кровяном МПА | Рис.6 на сахарном МПБ |
| Гемолитический стрептококк – Streptococcus haemolyticus | |
| Рис.7 на кровяном МПА | Рис.8 на сахарном МПБ |
| Зеленящий стрептококк – Streptococcus viridans | |
| Рис. 9. Мазок из гноя | Рис. 10. Мазок из зева |
| Рис. 11. Streptococcus pneumonia в мазке-отпечатке. Окраска по Граму. |
Контрольные вопросы
1. Чем отличается морфология стафилококков на плотных и жидких питательных средах?
2. Каков характер роста стафилококков на жидких и плотных питательных средах?
3. Какова классификация стафилококков? Какие заболевания вызывают стафилококки?
4. Перечислите и охарактеризуйте факторы патогенности стафилококков.
5. Какой материал берут от больных при различных стафилококковых заболеваниях и как его доставляют в лабораторию?
6. Какие микробиологические методы используют для диагностики заболеваний, вызываемых гноеродными кокками?
7. Как производят бактериоскопическое исследование гноя при стафилококковых заболеваниях?
8. Какова морфология стрептококков? Чем отличается их морфология на жидких и плотных питательных средах?
9. Какова классификация стрептококков по характеру роста на кровяном МПА?
10. Каково антигенное строение стрептококков?
11. Какие серологические классификации стрептококков существуют и на чем они основаны?
12. Какие заболевания вызывают стрептококки?
13. Какой материал берут от больных при различных стрептококковых заболеваниях и как его доставляют в лабораторию?
14. Как производят бактериологическое исследование при различных стрептококковых заболеваниях?
15. Какие питательные среда применяются для выращивания стрептококков?
16. Каковы особенности роста стрептококков на жидких и плотных питательных средах?
17. Какое значение имеет определение титров анти-O-стрептолизина и антигиалуронидазы?
18. Каковы отличительные признаки энтерококков?
19. Какое значение имеет М-антиген стрептококков?
20. Каким образом решается вопрос о выборе антибиотиков для лечения заболеваний, вызванных стафилококками?
21. Как и с какой целью осуществляют фаготипирование стафилококков?
22. Каковы морфология, культуральные и биохимические свойства пневмококков? На основании каких свойств можно отличить пневмококки от стрептококков?
23. Каково антигенное строение пневмококков, как они классифицируются?
24. Какие заболевания вызывают пневмококки? Какой материал используется для диагностики этих заболеваний и как производится выделение возбудителя?
25. Как осуществляют выделение пневмококка биологическим методом и в чем преимущество этого метода?
26. Какие бактериальные препараты применяют для лечения и профилактики инфекций, вызываемых патогенными кокками?
27. Каковы принципы приготовления и применения лечебных аутовакцин?
28. При каких заболеваниях они могут быть использованы?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 2
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАНОСТИКА СТАФИЛОКОККОВЫХ И СТРЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ
| Материал из зева, носа, отделяемое ран, кровь, гной | |||||
| Желточно-молочно-солевой агар | Кровяной МПА | 
Сахарный МПБ
| |||
|
Стафилококк
МПА
|  Окраска по Граму
|
Стрептококк
Сахарный, кровяной МПА,
сахарный МПБ
| |||
| Реакция плазмокоагуля-ции | Гемолиз эритроцитов | Отношение к типовым стафилококковым фагам | Биохимические свойства Чувствительность к антибиотикам | Реакция агглютинации и преципитации с групповыми и типовыми сыворотками | |
| СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД(чаще всего – в диагностике ревматизма) | |||||
| 1. Определение анти-O-стрептолизина. | |||||
| 2. Определение антигиалуронидазы. | |||||
КРИТЕРИИ ПАТОГЕННОСТИ СТАФИЛОКОККОВ
| Критерии | Безусловно патогенные стафилококки | Условно патoгeнные стафилококки | Непатогенные стафилококки |
| 1. Гемолитические свойства | Резкий гемолиз на агаре с 5 % крови кролика или барана | Незначительный гемолиз | Гемолиза нет |
| 2. Некротические свойства | Некроз при внутрикожном введении кролику | При внутрикожном введении воспаление (некроза нет) | Внутрикожная проба отрицательная |
| 3. Плазмокоагулирующие свойства | Свертывание плазмы через 1-2 часа | Свертывание плазмы через 6 часов и позднее | Свертывание плазмы не происходит |
| 4. Цвет пигмента (косвенный признак) | Золотистый, палевый | Белый | Лимонно-желтый |
КЛАССИФИКАЦИЯ рода Staphylococcus
1. Коагулозоположительные стафилококки
1. S.aureusxxx
2. S.intermediusхх
3. S. hyicus a
2. Коагулазоотрицательные стафилококки
| 4. S. saprophyticus x | 12. S. sciuri | 20. S. caprae |
| 5. S. hominis x | 13. S. simulans | 2l. S. eqorum |
| 6. S. capitis | 14. S. arlettae | 22. S. lentus |
| 7. S. warneri | 15. S. auricularis | 23. S. saccharolyticus |
| 8. S. epidermidis xxx | 16. S. carnosus | 24. S. schleiferi |
| 9. S. haemolyticus x | 17. S. caseolyticus | 25. S. lugdunensis |
| 10. S. cohnii | 18. S. gallinarum | 26. S. chromogenes |
| 11. S. xylosis | 19. S. kloosii |
Примечание: х – патогенные только для человека
хх – патогенные только для животных
ххх – виды, патогенные для человека и животных
а – не все штаммы имеют плазмокоагулазу
ЭКЗОТОКСИНЫ, ПРОДУЦИРУЕМЫЕ ТОКСИГЕННЫМИ
СТАФИЛОКОККАМИ
| Тип токсина | Действие токсина |
| 1. Мембраноповреждающие α, β, γ, δ | Разрушают различные клетки (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, макрофаги, лаброциты, клетки культур тканей, протопласты и др.) |
| 2. Лейкоцидин P-V (истинный лейкоцидин Пентона-Валентайна) | Разрушает лейкоциты |
| 3. Энтеротоксины А,В,С1,С2,СЗ,D,Е | Вызывают пищевые интоксикации |
| 4. Эксфолиативные А и В | Вызывают отслоение эпидермиса (пузырчатка новорожденных) |
| 5. Экзотоксин токсического шока (ЭТШ) | Вызывает синдром токсического шока |
ОСНОВНЫЕ МЕЖВИДОВЫЕ РАЗЛИЧИЯ У БАКТЕРИЙ
рода Staphylococcus
| Признак | Вид | ||
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophyticus | |
| Наличие: плазмокоагулазы | + | – | – |
| фосфатазы | + | + | – |
| аргининдигидролазы | + | + | – |
| нитратредуктазы | + | + | – |
| Окисление и ферментация: маннита | + | – | + |
| трегалозы | + | – | + |
| галактозы | + | + | – |
| маннозы | + | + | – |
| рибозы | + | – | – |
| Устойчивость к: новобиоцину | – | – | + |
| лизостафину | – | + | + |
| полимиксину В | + | + | – |
ОСНОВНЫЕ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫА И ПРИЗНАКИ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫD
(ЭНТЕРОКОККИ)
| Признаки | Стрептококки | |
| группа А | группа D (энтерококки) | |
| 1. Форма | круглая | чаще овальная |
| 2. Взаиморасположение | цепочки | парами, короткие цепочки |
| 3. Температурные пределы роста | 25-38 °С | 10-45 °С |
| 4. Рост на средах с рН 9,6 | – | + |
| 5. Pост на средах, содержащих 6,5% NaCl | – | + |
| 6. Рост на среде с 40% желчи | – | + |
| 7. Рост на молоке, содержащем 0,1% метиленового синего | – | + |
| 8. Гиалуронидазная активность | + | – |
| 9. Терморезиствнтность (при 60°С в течение 30 мин.) | – | + |
МЕТОДЫМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ПНЕВМОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
А. Бактериологический