Б. Биологический
| Материал, сильно загрязненный, вводят внутрибрюшинно белым мышам | 
|
| Препарат-оттиск из органов (селезенка и др.) Окраска по Граму и на капсулу | Посев крови, идентификация выделенной культуры |
ЗАНЯТИЕ № 3
Дата________________
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ (стафилококки и нейссерии). МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ МИКОПЛАЗМАМИ
План занятия
1. Исследование микрофлоры зева. Макро- и микроскопия колоний, выросших на молочно-желточно-солевом и кровяном МПА.
2. Определение патогенности стафилококка. Обнаружение плазмокоагулазы, гемотоксина (демонстрация). Фаготипирование стафилококков (демонстрация). Определение чувствительности культуры к антибиотикам методом дисков и Е-тестом.
3. Менингококк. Микроскопия готовых препаратов-мазков из ликвора.
4. Микроскопический метод диагностики острой гонореи: микроскопия мазка гнойного отделяемого уретры больного острой гонореей.
5. Демонстрация лечебно-профилактических и диагностических препаратов, применяемых при кокковых инфекциях (вакцины, анатоксины, антибиотики, фаги).
6. Микоплазмы. Микроскопия мазков из мокроты больного микоплазменной пневмонией.
Методические указания
1. Исследование микрофлоры зева. Макро- и микроскопия колоний, выросших на молочно-желточно-солевом и кровяном МПА
На чашках с посевами найти колонии стафилококка: небольшие, выпуклые, с ровными краями, непрозрачные, с гладкой и блестящей поверхностью. Обратить внимание на наличие и цвет пигментаи «радужного» венчика на молочно-желточно-солевом МПА и гемолиза на кровяном МПА. Промикроскопировать мазок из колонии и зарисовать в тетрадь.
2. Определение патогенности стафилококка.
2.1. Определение гемолитической активности бактерий
Изучить на демонстрационной чашке наличие и характер гемолиза. На кровяной агар сделан посев культуры стафилококка. При оценке результатов обращают внимание на зоны гемолиза, т.е. просветление среды вокруг выросших колоний. Гемолитические свойства бактерий связаны с наличием гемолизина (экзотоксина).
2.2. Определение лецитиназа
Изучить на демонстрационной чашке с желточно-солевым агаром лецитиназную активность стафилококка. При оценке результатов учесть наличие венчиков помутнения вокруг колоний, свидетельство лецитиназной активности.
2.3. Определение фермента плазмокоагулазы
Производят посев культуры стафилококка в цитратную плазму. Инкубируют в термостате. Результаты учитывают через 2, 4, 6, 18, 24 ч. При наличии плазмокоагулазы происходит коагуляция плазмы с образованием сгустка фибрина.
3. Менингококк. Микроскопия готовых препаратов-мазков из ликвора.
Исследовать бактериоскопически микропрепарат из ликвора, окрашенные по Граму.
4. Микроскопический метод диагностики острой гонореи: микроскопия мазка гнойного отделяемого уретры больного острой гонореей.
Диагноз острой гонореи и блинореии ставят с помощью микроскопического метода исследования. Из исследуемого материала делают два мазка, фиксируют химически, один окрашивают по Граму, другой - метиленовым синим. При наличии в мазке гонококков видны грамотрицательные диплококки, расположенные внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз)
Готовые препараты-мазки из отделяемого уретры больного гонореей окрасить метиленовым синим и по Граму. При микроскопии необходимо отыскать в препарате лейкоцит с заключенными в нем диплококками, имеющими форму кофейного зерна.
5. Демонстрация лечебно-профилактических и диагностических препаратов, применяемых при кокковых инфекциях
Познакомиться с вакцинами, анатоксинами, антибиотиками и фагами, их назначением, способом применения и формой выпуска.
6. Микоплазмы. Микроскопия мазков из мокроты больного микоплазменной пневмонией.
Изучить морфологию и тинкториальные свойства Mycoplasma pneumoniae. Промикроскопировать демонстрационные препараты, окрашенные по Граму и по Рамоновскому-Гимзе
| Рис.1. Микроскопия колонии из посева зева | Рис.2.Mycoplasma pneumonia. Окраска по Граму | Рис. 3 Mycoplasma pneumonia. Окраска по Романовскому-Гимзе |
| Гонококк в отделяемом уретры больного гонореей: | ||
| Рис. 4. Менингококк Neisseria meningitides. Окраска по Граму | Рис. 5 окраска по Граму Рис.6 окраска метиленовым синим Neisseria gonorrhoeae |
Контрольные вопросы
1. По каким признакам определяют патогенность выделенной культуры стафилококка?
2. Какие методы определения гемолизина и лецитиназы Вам известны?
3. Как определяют наличие у стафилококка плазмокоагулазы?
4. Какие токсины образует стафилококк и как они обнаруживаются?
5. Каким образом решается вопрос о выборе антибиотиков для лечения заболеваний, вызванных стафилококками?
6. Как и с какой целью осуществляют фаготипирование стафилококков?
7. Какова морфология, тинкториальные и культурные свойства гонококков и менингококков? В чем отличие их биохимических свойств?
8. Какие заболевания вызывает менингококк, какой материал берется при разных формах менингококковых заболеваний и как он исследуется?
9. Как осуществляют микроскопическую диагностику гонореи? На основании каких признаков делается заключение об обнаружении гонококков в микропрепарате из гнойного отделяемого?
10. Как осуществляют бактериологическую и серологическую диагностику гонококковых заболеваний?
11. Назовите основные особенности строения клетки микоплазм.
12. Какова морфология, тинкториальные и культурные свойства микоплазм?
13. Какие факторы патогенности имеют представители семейства Mycoplasmataceae?
14. Какие заболевания вызывают микоплазмы, какой материал берется при разных формах микоплазменных заболеваний и как он исследуется?
15. Каково значение и особенности бактериоскопического метода исследования микоплазменных инфекций?
16. Как проводиться бактериологическая диагностика микоплазм, значение серологической диагностики?
17. Какие экспресс методы диагностики микоплазмозов применяються?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 3
ФАГОТИПИРОВАНИЕ СТАФИЛОКОККОВ
Фаготипирование стафилококков проводится для эпидемиологических целей, для более тонкого типирования возбудителя внутри вида, что помогает найти источник инфекции и определить пути её распространения.
Для типирования патогенных плазмокоагулирующих стафилококков используют международный набор из 23 умеренных бактериофагов. Эти фаги разделены на группы:
1 группа - фаги 29, 52, 52А, 79, 80;
2 группа - фаги ЗА, ЗС, 55, 71;
3 группа - фаги 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85;
4 группа - фаги 94,95,96; и вне групп фаг 81.
Перед работой набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (рН-7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% CaCl2. В ампулу добавляют I мл бульона и получают разведение фага 10-1. Из этого основного разведения готовят два рабочих разведения, соответствующие тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Разведение, соответствующее 1 ТР, указано на этикетке фага.
Степень лизиса культуры разными разведениями фага регистрируется по следующей схеме:
++++ сливной, полный лизис,
+++ полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне лизиса),
++ наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса),
+ от 20 до 50 колоний фага,
— полное отсутствие лизиса.
Наивысшее разведение, вызвавшее лизис эталонного штамма на +++, называется тест разведением (I TP) фага. Например, если на этикетке указано, что I ТР данной серии фага 10-3, то для получения I TP надо из разведения 10-1 сделать два последовательных десятикратных разведения, и разведение 10-3 будет соответствовать I ТР.