Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал сильную реакцию при типировании I ТР или 100 ТР. Стафилококковые штаммы чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для каждого штамма характерную для него фагомозаику. В зависимости от фагов, входящих в эту мозаику, штамм стафилококка относят к тем или иным фагогруппам.
МЕТОДЫОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ
а) Метод дисков. Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, помещают на газон исследуемой бактериальной культуры в чашке Петри, Посевы инкубируют в течение 16-24 часов, после чего учитывают результаты опыта по образованию зон задержки роста бактерий.
По диаметру зон задержки роста ориентировочно судят о степени чувствительности бактерий к антибиотикам (рис. 2). Зона задержки роста до 15 мм указывает на слабую, до 25 мм - на среднюю и свыше 25 мм - на высокую чувствительность. Более точные результаты получают при использовании метода серийных разведений.
б) Метод серийных разведений. Этот метод позволяет определить минимальную задерживающую концентрацию антибиотика для данного микроорганизма (МЗК) как на жидких, так и на плотных питательных средах.
МПБ разливают по 2 мл в серию пробирок. Готовят основной раствор антибиотика, для чего берут навеску антибиотика и растворяют в дистиллированной воде из расчета 1 мг антибиотика на мл растворителя.
Левомицетин предварительно растворяют в 96° этиловом спирте из расчета 0,25 мл спирта на 1 мг антибиотика; после полного растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы раствор содержал в 1 мл 1 мг антибиотика.
Тетрациклин и окситетрациклин растворяют в сантинормальном растворе соляной кислоты из расчета 1 мл на 1 мг антибиотика.
Эритромицин сначала растворяют в чистом метиловом спирте из расчета 1 мл на 10 мг эритромицина. После растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы получить раствор, содержащий в 1 мл 1 мг антибиотика.
Исходный раствор антибиотика в количестве 2 мл вносят в первую пробирку с МПБ, перемешивают и получают определенную его концентрацию.
Из первой пробирки 2 мл разведенного антибиотика переносят во вторую пробирку и после перемешивания переносят 2 мл в третью пробирку и т.д. до предпоследней, откуда 2 мл выливают. Последняя пробирка является контролем, в ней нет антибиотика и она свидетельствует о пригодности среды для роста культуры.
После разведения антибиотика во все пробирки вносят по 0,1 мл испытуемой бульонной культуры. Для этого используют 3-4-часовые или 18-часовые культуры, разведенные МПБ в 50 раз.
Пробирки помещают в термостат на 12-18 часов, но предварительные результаты можно учитывать через 6-8 часов.
По истечении необходимого срока инкубации определяют максимальное разведение антибиотика, которое еще подавляет рост культуры. Концентрация антибиотика в последней пробирке с видимой задержкой роста и представляет собой минимальную задерживающую концентрацию антибиотика (МЗК) или минимальной подавляющей концентрацией (МПК).
Штамм считается чувствительным к антибиотикам, если МЗК препарата для данного штамма соответствует концентрации этого препарата, создаваемой в организме. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис.1).
Минимальная подавляющая концентрация (МПК) - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.
Рис. 7. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде.
в) Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис.9). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
| 
|
| Рис. 8. Зоны задержки роста при дисковом методе определения чувствительности к антибиотикам | Рис. 9. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов |
Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.
МЕТОДЫМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
Менингококк чувствителен к колебаниям температуры, поэтому необходимо быстро посеять на среду не допуская охлаждения материала. Если время доставки материала в лабораторию превышает 3 ч., его помещают в 3 мл среды обагощения (0,1 % агар-агара, 20 % сыворотки, 20ЕД/мл ристомицина).
А. Бактериоскопический
Микроскопия позволяет выявить наличие менингококков. Если спиномозговая жидкость имеет незначительную мутность, перед приготовлением мазка ее ценрифугируют, если в виде гноя сразу готовят мазок. При менингококцемии из крови готовят толстый мазок и без фиксации окрашивают 2-3 мин водным растворм метиленовой сини, промывают сушат на воздухе и микроскопируют
| Материал: кровь, спинномозговая жидкость | |
По Граму
|
Метиленовым синим
|
Б. Бактериологический
| Материал: спинномозговая жидкость, кровь, экссудат, гной, слизь из зева и носоглотки | ||||
|
Микроскопия
Окраска по Граму
| 
Сывороточный агар
+ ристомицин,
+ мальтоза,
+водный голубой
|
Сывороточный агар
|
Полужидкий 20%-ный сывороточный агар
| |
Сывороточный агар
|
Сывороточный агар
| |||
Микроскопия
| 
Среды Гисса
| 
Чувствительность к антибиотикам
| 
Реакция агглютинации с сыворотками А, В, С, D, X, Y, Z, E29, W135
|
Бессывороточный агар
|