Гемолитическая система (эритроциты, барана, гемолитическая сыворотка)

Индикатором в РСК, то есть показателем результата исследования, служит реакция гемолиза. В этой реакции в присутствии комплемента участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка.

В РСК используют эритроциты барана, которые, по сравнению с эритроцитами других животных, не столь хрупкие и более стойкие, не подвергаются быстрому гемолизу при отмывании и при хранении в изотоническом растворе натрия хлорида.

Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Ее инактивируют в течение 30 минут при температуре 56°С.

Результаты РСК оценивают в зависимости от наличия или отсутствия гемолиза в опытных пробирках. Наличие гемолиза объясняется тем, что ввиду отсутствия в испытуемой сыворотке сифилитических антител реакция антиген-антитело не происходит, и весь комплемент идет на реакцию бараньи эритроциты-гемолизин. В то время как при наличии специфических антител комплемент полностью уходит на реакцию антиген-антитело, что приводит к задержке гемолиза.

Максимальная позитивность реакции Вассермана обозначается 4+ (резко положительная реакция) и соответствует полной задержке гемолиза, 3+ (положительная реакция) - соответствует значительной задержке гемолиза, 2+ (слабоположительная реакция) - частичной вдержке гемолиза, 1+ (сомнительная реакция) - незначительной вдержке гемолиза. Отрицательная реакция Вассермана характеризуется полным гемолизом во всех пробирках опыта.

Качественная РСК дает только некоторое представление о количестве реагинов и антител. Обозначение 4 + остается постоянным независимо от различного максимального их количества.

Количественное определение реагинов и антител имеет значение при оценке результатов противосифилитического лечения. Количественный метод постановки РСК оказывает помощь при дифференциальной диагностике свежего и рецидивного вторичного сифилиса, раннего и позднего скрытого сифилиса, при выявлении неспецифических ложноположительных реакций, но ценность его в данных случаях не абсолютна. Обычно при свежем вторичном сифилисе РСК бывает в высоком, титре, а при рецидивном вторичном сифилисе - в низком. Однако в некоторых случаях наблюдают и обратную зависимость. Низкие титры неспецифических ложноположительных реакций отличают их от специфических реакций. Но это не является правилом, в отдельных случаях отмечается противоположное явление, отмечено очень высокие - 1:320 и даже 1:5120 - титры неспецифических серологических реакций при некоторых заболеваниях несифилитической этиологии.

Количественная методика постановки РСК заключается в использовании уменьшающегося количества испытуемой сыворотки, а в остальном методика реакции остается обычной. Испытуемую сыворотку разводят изотоническим раствором натрия хлорида в следующих пропорциях: 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, а при необходимости — и далее. Титром реагинов исследуемой сыворотки крови является последнее разведение, при котором наблюдается задержка гемолиза.

Таблица 1. Учет результатов реакции Вассермана

4. Промикроскопировать мазки из гнойного отделяемого уретры больного гонореей окрашенных по Граму и метиленовой синькой

Познакомиться с морфологией и тинкториальными свойствами гонококкка, зарисовать микропрепараты. Основным лабораторным методом для диагностики гонореи является – микроскопия мазка.

У женщин материал берут одновременно из уретры, влагалища и шейки матки, иногда из прямой кишки спустя 3-4 часа после опорожнения кишечника путём смыва физ. раствором, который затем центрифугируют, получают осадок, высушивают на предметном стекле и окрашивают.

У мужчин – материал берут из уретры, утром до первого мочеиспускания, кроме того исследуют и мочу, собранную утром после длительного воздержания от мочеиспускания.

У девочек – из уретры, влагалища, прямой кишки путём смыва.

Из полученного материала необходимо приготовить тонкие мазки, высушить их на воздухе и окрасить по общепринятой методике.

Методы окраски мазков: принято окрашивать мазки по Граму и метиленовой синькой, метод быстрый, но в данном случае не информативен, так как все клеточные элементы окрашиваются в синий цвет и гонококки легко спутать с изменёнными клетками.

Окраска по Грамму – метод трудоёмкий, но очень информативен, так как на голубом фоне грамотрицательные диплококки окрашиваются в красный цвет. Отчётливо видно их расположение парами в виде «кофейных зёрен», как внеклеточно, так и внутри клеточно в лейкоцитах. В 1 лейкоците может быть до 100 гонококков, которые усиленно размножаются, что в результате приводит к разрыву оболочки лейкоцита и гонококки располагаются внеклеточно.

Для выявления хронических и бессимптомных форм течения гонореи перед исследованием проводят провокационные пробы с гонококковой вакциной и алкоголем накануне взятия биологического материала. Для чего это делают? Эта провокация снижает защитный барьер клеточной мембраны, и бессимптомная форма переходит в острую.

5. Изучение морфологии возбудителя трихомониаза.

Изучить Trichomonas vaginalis в нативном препарате окрашенном по Романовскому-Гимза, зарисовать.

Лабораторная диагностика трихомониаза: исследование основано на изучении нативного препарата и окрашенного по Романовскому (можно метиленовой синькой, по Граму)

Приготовление нативного препарата: каплю отделяемого из влагалища, взятого пипеткой или петлёй, наносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и тотчас микроскопируют. Таким образом, в нативном препарате обнаруживают подвижные формы, которые распознаются по характерному движению ундулирующей мембраны. При потери движения микроорганизм распознать нельзя.

Окрашенные препараты: предложено много различных методов (метиленовый синий, по Граму, по Романовскому), но из всех перечисленных методов наиболее удобным является метод Романовского. Для этого каплю отделяемого распределяют тонким слоем на предметном стекле, высушивают и красят по методике. При этой окраске трихомонады распознаются легко – ядро фиолетовое, цитоплазма голубая, содержит бактерии, хорошо виден окружающий трихомонаду клеточный фон (нейтрофилы, эпителиальные клетки, эозинофилы). В мазках окрашенных другими способами легко спутать трихомонаду с изменёнными клетками. Например: при окраске по Граму она красная; метиленовым синим – синяя, на синем фоне, прижатая другими клетками, но особенность цитоплазмы в вакуолизации, пенистая, пористая и содержит большое эксцентричное ядро.

Контрольные вопросы

1. Какие микроорганизмы вызывают ИППП? Назовите возбудителей ИППП, нозологические формы, группы ИППП.

2. Каковы морфологические и тинкториальные свойства Treponema pallidum?

3. Каковы биохимические, антигенные и эпидемиологические свойства возбудителя сифилиса?

4. Какие особенности патогенеза сифилиса Вам известны?

5. Каковы особенности взятия материала от больного сифилисом для микробиологической диагностики?

6. Какие микробиологические методы применяют для диагностики сифилиса?

7. Какой метод при первичном и врожденном сифилисе считается основным?

8. Как проводиться микроскопический метод диагностики сифилиса?

9. Какие методы диагностики применяются при вторичном и третичном сифилисе?

10. Каковы особенности серологического метода диагностики сифилиса?

11. В чем особенности реагиновых тестов: реакции Вассермана, осадочной реакции?

12. Как ставиться трепонимальные реакции: иммунофлюоресцентный тест, микрогемагглютинационный?

13. Какой материал берут от больного для микробиологической диагностики гонореи?

14. Какие микробиологические методы применяют для диагностики гонореи?

15. Как проводиться микроскопический метод диагностики гонореи?

16. Каковы морфологические и тинкториальные свойства Neisseria gonorrhoeaе?

17. Какие микробиологические методы применяют для диагностики трихомониаза?

18. Как проводиться микроскопический метод диагностики трихомониаза?

19. Каковы морфологические и тинкториальные свойства Trichomonas vaginalis?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 12

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СИФИЛИСА

Методы микробиологической диагностики сифилиса обусловлены патогенезом заболевания. В первичной стадии болезни (реже при вторичном и третичном сифилисе) и при врожденном сифилисе проводиться бактериоскопическое исследование, во вторичном и третичном периодах применяют серологический метод.