Миграционная активность лейкоцитов в условиях нормы и при диффузных заболеваниях соединительной ткани
А.В.Пизов – кандидат биологических наук, ассистент кафедры методики преподавания естественно-математических дисциплин в начальной школе Ярославского государственного педагогического университета им.К.Д.Ушинского; В.Н.Левин – доктор медицинских наук, профессор, зав.кафедрой МБОС Ярославского государственного педагогического университета им.К.Д.Ушинского.
В последние годы внимание специалистов всё больше привлекает изучение функциональных свойств таких клеток крови как лейкоциты, к которым относятся гранулоциты, моноциты и лимфоциты. Лейкоциты играют главную роль в развитии воспаления (C. Rosales et al., 1995). Воспаление может быть острым или хроническим, однако в процессе развития воспалительной реакции, как правило, наблюдаются признаки обоих форм воспаления.
Несмотря на то, что роль лейкоцитов в защите организма известна ещё со времен работ И. И. Мечникова в 1892 году, а каждый вид лейкоцитов имеет свои характерные особенности и свою уникальную роль в защите, детали и механизмы исполнения лейкоцитами, их функций пока изучены неполно.
Ценность любой фагоцитарной реакции в её скорости, опережающей развитие микробного или иного повреждения. Перемещение лейкоцитов в пространстве относится к числу наиболее характерных признаков белых клеток крови. У лейкоцитов достаточно хорошо выражены обе основные формы клеточного движения – ненаправленная, или случайная миграция, и направленная, или хемотаксис.
В литературе встречаются работы о целенаправленном движении фагоцитов – хемотаксисе (N.D.Tan et al., 1995). Первыми были работы S. Boyden (1962), показавшего способность лейкоцитов к активной миграции. Активное перемещение в пространстве характерно для большинства клеток белой крови, однако наиболее характерно для нейтрофилов (А.Н.Маянский и соавт., 1989; R.A.Erger et al., 1995).
Двигательная активность лейкоцитов изменяется при различных заболеваниях. Так, выявлено значительное нарастание миграционной способности белых клеток крови у больных в острой фазе воспаления, а при таких состояниях, как агранулоцитоз, отмечено снижение двигательной активности. Нарушение хемотаксиса происходит при ряде врожденных заболеваний фагоцитарной системы: синдроме Чедиака-Хигаси, синдроме Швахмана-Диамонд, болезни накопления гликогена, дефиците специфических гранул нейтрофилов; а также вторичных (приобретенных) иммунодефицитных состояниях, развивающихся при ожоговой болезни, диабете, злокачественных заболеваниях, у больных с хроническими вирусными (СПИД, грипп, герпес и др.) и грибковыми инфекциями.
Изучение миграционной способности белых клеток крови способствует расширению знаний об активных свойствах лейкоцитов и отражает их функциональные возможности при протекающих в организме патологических процессах.
Материал и методы исследования
Объектом исследования служила кровь из локтевой вены, взятая у 36 больных с диффузным заболеванием соединительной ткани. Все больные – женщины в возрасте от 30 до 44 лет. Средний возраст на момент обследования составил 37 лет.
Оценка степени активности болезни (обострение – ремиссия) у пациентов СКВ проводилась согласно критериям В.А.Насоновой (1972; “Ревматические болезни”, 1997) в соответствии с выраженностью клинических симптомов и уровнем лабораторных показателей.
Контрольную группу составили 10 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту.
Миграционную активность лейкоцитов оценивали в тесте миграции на стеклянных пластинках под агаром (Т.Ф. Соколова и соавт., 1983; T.E.Clausen, 1971; R.D.Nelson et al., 1975).
Суспензию клеток вносили в две лунки агарового геля (из расчёта 7-10х105 клеток в каждую лунку), который предварительно готовили следующим образом: 15 мг агарозы добавляли в стерильную воду (5 мл), кипятили в течение 20 минут на водяной бане, охлаждали до 45 С. Пять миллилитров питательной среды № 199, предварительно нагретой до 45 С, смешивали с агарозным гелем и полученную агаровую среду заливали на стеклянные пластинки. После застывания агара в нём пробойником делали 3 одинаковые лунки диаметром 2,5 мм и глубиной – 2,-2,5 мм: две, контрольную и опытную, для суспензии лейкоцитов, третью - для хематтрактанта. После этого стеклянные пластинки помещали во влажную камеру, где клетки культивировали в течение 18 часов при 37 С в атмосферном воздухе с 5% содержанием СО2. Затем препараты фиксировали 1,5 часа 2,5% раствором глутарового альдегида. После этого агар удаляли, клетки окрашивали азур II-эозином. Делали микрофото и определяли площадь миграции лейкоцитов. В качестве хематтрактанта использовали аутологичную сыворотку крови, малый фрагмент сывороточного комплемента которой (С5а) является сильным хемотаксическим фактором для лейкоцитов.
Определяли следующие величины: А - площадь миграции лейкоцитов в контрольной лунке (спонтанная двигательная активность); Б - площадь перемещения белых клеток крови в опытной лунке (стимулированная миграция). Кроме этого, вычисляли следующие показатели: Б-А – хемотаксическая разница.