Тема 15. Анализ лекарственного растительного сырья, содержащего флавоноиды

Химический анализ лекарственного растительного сырья, содержа­щего флавоноиды

Цель занятия __________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Задание 1. Проведите выделение флавоноидов из лекарственного растительного сы­рья.

Методика, 3-5 г измельченного растительного сырья заливают 30-50 мл 70 % спирта в кол­бе с обратным холодильником и проводят экстракцию на водяной бане в течение 20-30 минут. Из­влечение охлаждают, фильтруют через 4 слоя марли или фильтровальную бумагу. Полученный фильтрат наносят на колонку диаметром 1 см, заполненную 1,0 г полиамидного сорбента, промы­вают 50 мл воды и элюируют флавоноиды с колонки 70 % этанолом, отбирая фракцию, окрашен­ную в желтый цвет. Полученный фильтрат упаривают до 1/2 объема и используют для проведения качественных реакций и хроматографического обнаружения флавоноидов.

Задание 2. Проведите качественные реакции на флавоноиды. В качестве образца сравнения используйте 0,1 % спиртовый раствор рутина. Запишите результаты ре­акций в таблицу и сделайте выводы.

1. Цианидиновая реакция. К 1 мл извлечения прибавляют 2-3 капли концентрированной хло­-
ристоводородной кислоты и 1-2 стружки металлического магния. Наблюдают образующуюся ок­-
раску.

2. Реакция со щелочью. К 1 мл извлечения прибавляют 1-2 капли 10 % спиртоводного раствора
калия или натрия гидроксида.

3. Реакция с алюминия хлоридом. К 1 мл извлечения прибавляют 1 мл 2 % спиртового рас­-
твора алюминия хлорида.

4. Реакция с железа (III) хлоридом. К 1 мл извлечения прибавляют 2-3 капли 1 % спиртового
раствора железа хлорида.

5. Реакция Вильсона. К 2 мл извлечения прибавляют 1 мл 2 % раствора кислоты борной и 1 мл
2 % спиртового раствора кислоты лимонной (или щавелевой).

6. Реакция с ванилином в концентрированной хлористоводородной кислоте. К 1 мл
прибавляют несколько капель 1 % раствора ванилина в кислоте хлористоводородной концентри­-
рованной.

Результаты качественных реакций на флавоноиды

Выводы:_____________________________________________________________

_______________________________________________________________________

Задание 3. Проведите качественную реакцию идентификации корней стальника, основанную на флюоресценции изофлавоноидов в УФ-свете. Запишите наблюдения и сделайте выводы.

Методика. Около 0,2 г порошка корней стальника помещают в колбу со шлифом вместимо стью 25 мл, прибавляют 5 мл 70 % спирта и нагревают с обратным холодильником на кипяще! водяной бане при слабом кипении в течение 20 минут. После охлавдения раствор фильтруют че рез бумажный фильтр. На полоску фильтровальной бумаги наносят микропипеткой 0,05 мл извле­чения и просматривают в УФ-свете.

Наблюдения:__________________________________________________________

Выводы:________________________________________________________________________________________________________________________________________

Задание 4. Изучите ход хроматографического анализа флавоноидов в лекарственном растительном сырье. Зарисуйте схемы хроматограмм, рассчитайте величины Rf. Сделайте заключение о составе флавоноидов в извлечении.

Методика, 5 мл очищенного экстракта (задание 1) упаривают досуха на водяной бане в вы­парительной чашке. Остаток растворяют в 0,5 мл этилового спирта, наносят его на две пластинки, покрытые слоем силикагеля. В качестве свидетелей используют растворы рутина и кверцетина. Пластинки помещают в камеры с системами растворителей:

а) для агликонов: этилацетат-муравьиная кислота-вода (70:15:17);

б) для гликозидов: метанол-уксусная кислота-вода (18:1:1) или хлороформ-метанол-вода (20:14:3).

После продвижения фронта растворителей на 10-11 см хроматограмму высушивают в вы­тяжном шкафу, отмечают пятна флавоноидов в видимом и УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида.

Система растворителей:____________________________________________________

Реактив проявления:______________________________________________________

Выводы:________________________________________________________________

________________________________________________________________________

Задание 5. Определите количественное содержание флавоноидов в траве зверобоя по ГФ XI, ст. 52. Сделайте заключение о соответствии образца сырья требованиям АНД (не менее 1,5 %).

Методика. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл 50 % спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Вату по­мещают в колбу для экстрагирования и прибавляют 30 мл 50 % спирта. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, фильтруя извлечение в ту же мерную колбу. После ох­лаждения объем извлечения доводят 50 % спиртом до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 3 мл раствора А, 1 мл раствора алюминия хлорида в 95 % спирте и доводят объем раствора 95 % спиртом до метки. Через 40 минут измеря­ют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 415 нм в кювете с тол­щиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл извле­чения, 1 капли кислоты уксусной разведенной и доведенный 95 % спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца (ФСО) рути­на, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье X, %_? вы­числяют по формуле:

Х=D• m₀• 100 • 100• 100/D₀•m•l00• (100-W)=

где D - оптическая плотность испытуемого раствора; Do - оптическая плотность раствора ФСО ру­тина; m - масса сырья, г; то - масса ФСО рутина, г; W - потеря в массе при высушивании сырья,

%.

Примечание. Приготовление раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина. Около 0,05 г (точная навеска) ГСО рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135^иС в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 95 % спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.

Выводы:________________________________________________________________

_______________________________________________________________________

Макро- и микроскопический анализ лекарственного растительного сырья, со­держащего флавоноиды

Цель занятия __________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Объекты для лабораторного исследования: бутоны и плоды софоры японской, цветки василька синего, плоды аронии черноплодной, трава пустырника, трава гор­ца перечного, трава горца почечуйного, трава горца птичьего (спорыша), трава су­шеницы топяной, цветки бессмертника песчаного, цветки пижмы, цветки боярыш­ника, плоды боярышника, трава череды, цветки бузины черной, трава эрвы шерсти­стой, трава хвоща, корни солодки, корни стальника.

Объекты для самостоятельного изучения: трава фиалки, цветки гибискуса, цветки ноготков, трава зверобоя, корни шлемника байкальского, листья гинкго, трава аст­рагала шерстистоцветкового, трава астрагала серпоплодного, трава десмодиума канадского, цветки липы, виды леспедецы, трава датиски коноплевой, трава золотар­ника канадского, трава мелколепестника канадского, створки и трава фасоли.