Смешать 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 5 мл 1%-ного раствора кислого фуксина. Краситель ослабевает при длительном хранении, в таком случае добавляют несколько капель свежего кислого фуксина.
Алгоритм
· Удаление парафина из срезов в ксилоле и проведение среза через спирты нисходящей крепости до 80 % этанола.
· Окраска железным гематоксилином Вейгерта в течение 3-15 минут.
· Промывание в проточной воде в течение нескольких минут.
· Промывание дистиллированной водой.
· Окраска красителем ван Гизона в течение 5 минут.
· Быстрая промывка в дистиллированной воде (5-15 с).
· Быстрая промывка в двух порциях 96 % этанола, одной порции абсолютного этанола (или карбол-ксилола), просветлить в двух порциях орто-ксилола. Время пребывания срезов в каждой порции 1-2 мин.
· Закрепление препарата нейтральным бальзамом.
Результаты
В результате окраски ядра клеток приобретают чёрный цвет, коллаген — красный, другие тканевые элементы (включая мышечные волокна и эритроциты) — желтые, фибрин — жёлтый или оранжевый.
Окраска по методу Маллори
Широко применяется при изучении соединительной ткани, как метод окраски коллагеновых волокон.
Краситель является трёхцветным: это смесь кислого фуксина, анилинового синего, оранжевогo G, а также двух кислот.
Первый метод:
1) фиксация любая, лучше алкоголь;
2) приготовление срезов, замороженных или после заливки в целлоидин или парафин;
3) погружение срезов на 30 сек. в 10%-ный водный раствор фосфорно-молибденовой кислоты;
4) промывка в воде;
5) окраска 10—20 минут в следующем растворе: 10%-ной фосфорномолибденовой к-ты 10 см3, гематоксилина кристаллич. 1,75 г, воды 200 см3, кристаллич. карболовой к-ты 5 г;
6) ополаскивание в воде;
7) обезвоживание в алкоголе; ксилол; бальзам.
Второй метод:
1) фиксация в Ценкеровской жидкости;
2) замораживание или заливка;
3) окраска 1—3 минуты в сильно разведенном водой водном 1%-ном растворе кислого фуксина;
4) споласкивание в воде;
5) обработка срезов в течение 5—15 мин. в 1%-ном водном растворе фосфорномолибденовой кислоты;
6) дважды сполоснуть в чистой воде;
7) окраска от 2 минут и больше в смеси: синего анилина — 0,5 г, Orange G - 2 г, щавелевой к-ты—2 г, воды 100 см3;
8) промывка в воде, дифференцирование в чистом 96° алкоголе и обезвоживание в абсолютном. Просветление в ксилоле. Бальзам.
Результат
Коллагеновые волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-синий цвет, многие другие структуры (ядра, мышечные волокна, эритроциты) - в оранжевый или красный цвет.
Импрегнация серебром
Рекомендован для выявления аргирофильных ретикулярных волокон в соединительной ткани.
Четкая импрегнация в данном методе происходит по двум причинам: предварительгная импрегнация с солями железа и использование в качестве источника серебра нестабильного диаминного комплекса (аммонийный раствор), который более реактивен, чем нитрат серебра.
Обработка тривалентным железом: после предварительного окисления с перманганатом калия образец обрабатывается тривалентным железом (ферро-аммоний сульфат). Ионы железа, более реактивные, чем ионы серебра, быстро связываются с аффинными функциональными группами аргирофильных веществ.
Обработка аммонийным раствором: серебро в данном растворе присутствует в виде комплексного растворимого в воде оксида - [Ag(NH3)2]2 O. Катионы серебра из данного комплекса заменяют ионы железа в образцах. Затем муравьиный альдегид путем восстановления приводит к образованию металлического серебра, обеспечивая его отложение на аргирфильных структурах и визуализацию.
[Ag(NH3)2]2 O + HCHO = 2 Ag + 4 NH3 + HCOOH
Невосстановленный комплексный катион удаляется при помощи тиосульфата натрия путем формирования растворимого комплекса, неподлежащего окислению.
Иными словами, способ импрегнации заключается в том, что ткань предварительно пропитывают солями серебра, а затем обрабатывают редуцирующими реактивами (восстановителями). Серебряные частицы могут образоваться как в микроскопических, так и в субмикроскопических порах тканевых элементов, и, откладываясь по их стенкам, чернить их. Если же субмикроскопические поры слишком узки, то отложение серебра становится невозможным. При добавлении NaOH к раствору концентрация свободного серебра в растворе повышается. Таким образом, действие избытка аммиака и NaOH на раствор противоположно. Это позволяет регулировать концентрацию свободного серебра.
Результат
Выделяющееся серебро осаждается на определённых волокнах соединительной ткани. Ретикулярные волокна приобретают чёрный цвет, коллагеновые волокна - коричневый, ядра клеток - светло-коричневый.