Этот метод наиболее простой, но окрашивание эластических волокон менее интенсивное, чем другими красителями.
Приготовление красителя
1 г орсеина растворяют в 100 мл 98 % или 100 % спирта и добавляют 1 мл крепкой (молекулярная масса 1,15 — 1,19) соляной кислоты. Краситель можно хранить 1 — 2 мес.
Или 1 г орсеина на 100 мл 70 % спирта нагревают до 60 С, после охлаждения добавляют 1 мл крепкой соляной кислоты и фильтруют.
Методика окраски
1. Ополаскивают в 70 % спирте.
2. Окрашивают орсеином в течение 30 — 80 мин при 37 С (в термостате) или 18 — 24 ч при комнатной температуре.
3. Дифференцируют в 1 % солянокислом спирте (под контролем микроскопа) до просветления фона и выявления эластических волокон, обычно от нескольких секунд до 2 — 3 мин.
4. Промывают водой, проводят через спирты и ксилол.
Результат
Эластические волокна буро-красные, коричневые, остальные структуры - слабо-розовые. Иногда коллагеновые волокна окрашиваются слишком интенсивно, а при дифференцировке ослабляется окраска эластических волокон. В этих случаях следует уменьшить концентрацию орсеина (растворяют до 0,4 г на 100 мл спирта) и РН раствора путем добавления нескольких капель соляной кислоты, что позволяет усилить избирательность окрашивання.
Метод окраски Шморля
Метод выявления остеоцитов путем окраски препаратов костной ткани тионином с пикриновой или фосфорно-вольфрамовой кислотой после декальцинации кости.
Этапы
· Фиксация материала в формалине, заливка парафином и получение срезов в микротоме.
· Депарафинизация.
· Промывание срезов в дистиллированной воде.
· Помещение срезов на 5 — 20 мин в реакционную смесь.
· Промывание срезов в проточной воде.
· Окраска по Ван Гизону (противоокраска).
· Быстрое обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации, проведение через ксилол, заключение в канадский бальзам.
Краситель – раствор тионина - основной тиазиновый краситель, хорошо растворимый в спирте, хуже в воде; применяется для окраски нервной ткани по Нисслю, для выявления клеточных ядер.
Результат
Стенки костных полостей и канальцев (выстланные сетью коллагеновых волокон) окрашиваются в тёмно-коричневый цвет, остальной фон - светло-коричневый.
Окраска клеточных структур
Окрашивание мазков по Романовскому
В красящих смесях Романовского и сходных с ним прописей Гимзы, Райта, Лейшмана в качестве ядерных краси телей используют тиазины. В их ряду - тионин-анилиновый краситель и его моно-, ди-, три- и тетраметилпроизводные азур С, азур А и азур В, метиленовый синий - широко применяются в цитологических исследованиях как ценные ядерные красители со свойством метахромазии для эксфолиативной и пункционной цитологии, для клеток крови, костного мозга, окрашивания бактерий. Сочетание тиазинов с красителями эозиновой группы дает известную много вариантность методов. Красители типа Романовского, названные по именам авторов, которые стремились добиться стабильности состава тиазинов (Гимза, Лейшман, Дженнер, Май-Грюнвальд, Мак Нил, Райт и др.), в принципе дают сходные результаты окрашивания.
Краситель: азур 2 - эозин
Фиксацию мазков проводят чистым метанолом, окрашивание продолжают всего 30-45 мин, для заключения под покровное стекло используют кедровое масло.
Результаты
Цитоплазма лимфоцитов окрашивается в светло-синий цвет, их ядра - в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового, ядра моноцитов в более светлый пурпурно-красный, их цитоплазма в мутный голубовато-серый, грануломеры тромбоцитов в красный, гиаломеры - в голубой, гранулы базофилов - в интенсивный сине-фиолетовый цвет, гранулы эозинофилов - в оранжево-розовый, а нейтрофильных лейкоцитов - в цвета от пурпурного до фиолетового.
Референтным признается метод Романовского, состоящий из азура В и эозина Y. Азур-эозиновые красители позволяют четко определять ранние некробиотические изменения в клетках, поскольку обычный светло-голубой оттенок цитоплазмы резко меняется на светло-розовый. В синий цвет обычно окрашиваются ядра, бактерии, риккетсии, тигроид и рибонуклеопротеиды, в голубовато-фиолетовый - гранулы тучных клеток и базофилов, цитоплазма зрелых клеток - от голубого до фиолетового и бледно-лилового цвета. цитоплазма клеток в состоянии некроза и некробиоза - ярко-розовая, секреторные гранулы ацинарных клеток (под желудочной железы, слюнных желез) от розового до красного. Амилоид, фибрин окрашиваются в розовый цвет, цитоплазма мышечных волокон, коллоид щитовидной железы - в серовато-синий, кератин - ярко-голубой. Эритроциты оранжево-красного цвета. Методы на основе азур-эозина широко используются для идентификации клеток воспалительного экссудата.
Заключение
На данный момент известно огромное количество методов окраски. Я рассказал в своем реферате об основных методах (по ван Гизону, по Маллори, импрегнация серебром, орсеином, по Шморлю, азур2 – эозином и по Романовскому). Остальные, являются их модификациями, заключающихся в замене того или иного красителя на более современный, что позволяет лучше окрасить определенные структуры или же ускорить время приготовления препарата.
Список литературы
· “Руководство-атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии” - С. Л. Кузнецов, Н. Н. Мушкамбаров, В. Л. Горячкина
· Википедия – свободная энциклопедия
· Книга – “Микроскопическая техника”