Лабораторные методы диагностики




Кровь для исследования на микрофилярии желательно брать вечером. При подозрении на дирофиляриоз кровь (при отсутствии микрофилярий в первой пробе) исследуют 2-3 раза с 1-2-х недельными интервалами. С целью более эффективной постановки диагноза и выявления микрофилярий в крови в большем количестве, особенно при слабой интенсивности инвазии или в период сезонной диапаузы (зимой) или суточной периодичности (днем), рекомендуется за 30-60 минут до исследования крови вводить дексаметазон в дозе 4 мг на голову (Архипова Д.Р., 2003). Применение дексаметазона вызывает провокацию микрофиляриемии в крови собак в первые 30-60 минут после его введения.

Микрофилярии в крови животных можно обнаружить следующими лабораторными методами:

1. Микроскопией капли свежей цельной крови.

2. Исследованием сыворотки крови.

3. Проверкой гемолизированной крови с использованием

А) уксусной кислоты,

б)2%-ного формалина (модифицированный метод Кнотта).

1. Микроскопия капли свежей крови под малым увеличением микроскопа (х 10) является наиболее легким и быстрым, но не всегда надежным методом. Этот метод можно использовать при высокой степени инвазии, но при слабом заражении собак использование этого метода не всегда дает положительные результаты. Кровь для исследования берут в вечернее время из периферических сосудов, разводят физиологическим раствором 1:1 и помещают на предметное стекло, сверху накрывают покровным стеклом. Подвижные микрофилярии заметны по активному движению их между эритроцитами.

2. Для исследования сыворотки крови несколько миллилитров венозной крови от собакиберут в пробирку. Кровь свертывается, а микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов. После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки со дна пробирки или в месте соприкосновения сыворотки со сгустком крови. Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие подвижных микрофилярий. Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность. С целью облегчения обнаружения личинок препарат можно окрасить. Для этого под покровное стекло заливают 1 каплю водного раствора метиленового синего (1: 1000). Препарат можно положить в чашку Петри со смоченными водой кусочками ваты и хранить в холодильнике (при температуре 0оС - 2 оС) - при этом личинки сохраняют жизнеспособность до нескольких дней, их двигательная активность восстанавливается после выдерживания препарата некоторое время при комнатной температуре.

3. Исследование гемолизированной крови.

Метод с применением уксусной кислоты. К 1 мл венозной крови добавляют 5 мл 2%-ного раствора уксусной кислоты. Смесь центрифугируют при 100 об/мин в течение 3-5 минут. Надосадочную жидкость выливают и осадок микроскопируют для обнаружения микрофилярий. При этом методе личинки погибают и их часто трудно обнаружить в исследуемом материале.

Модифицированный метод Кнотта дает наилучшие результаты при практической постановке диагноза на наличие микрофилярий у собак (эффективность 85-95%). Метод заключается в следующем: к 1 мл венозной крови добавляют 10 мл 2%-ного раствора формалина. Получившийся раствор хорошо перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок смешивают с равным объемом метиленового синего в разведении 1:1000 и оставляют для окрашивания на 5 мин. Окрашенный осадок микроскопируют для обнаружения фиксированных окрашенных микрофилярий (рис. 2).

Достоинством модифицированного метода Кнотта является то, что микрофилярии равномерно окрашиваются. Это позволяет дифференцировать микрофилярии на видовом уровне, поскольку только Dirofilaria immitis является высоко патогенным видом. Dirofilaria repens умеренно патогенна. Микрофилярии видов Dipetalonema reconditum и Dipetalonema dracunculoides, также паразитирующие у собак, слабопатогенны. Половозрелые особи Dipetalonema reconditum паразитируют у собак в полости тела, соединительной ткани и почках; Dipetalonema dracunculoides - в брыжейке. Оба этих вида нематод распространены в основном в Италии, США и Африке.

Дифференциальная диагностика микрофилярий по морфологическим признакам представлена в таблице 1.

Для фиксации и окрашивания микрофилярий можно также применять метод окрашивания тонких мазков крови по Романовскому-Гимзе (рис. 3). Для этого берут кровь из периферических сосудов, готовят тонкие мазки (от одного животного желательно сделать 3-4 мазка), которые высушивают на воздухе. Высушенные мазки фиксируют в метиловом спирте (5 минут) или в этиловом спирте 90-96о (15 минут). После фиксации мазки вновь высушивают на воздухе. Для приготовления рабочего раствора краски необходимо взять 1-3 капли фабричного раствора краски Романовского-Гимзе и 1 мл дистиллированной воды. Окрашивают мазки в течение 20-30 мин, после чего их промывают дистиллированной водой, высушивают и просматривают под микроскопом.

Также для этих целей можно применять метод окрашивания толстой капли крови: каплю периферической крови наносят на предметное стекло и добавляют 2-3 капли дистиллированной воды. При этом эритроциты гемолизируются. Затем делают толстый мазок, который высушивают, фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Для дифференциации личинок D. immitis от личинок Dipetalonema reconditum предложен следующий метод: 1 мл крови смешивают с 9 мл 2%-ного раствора формалина; смесь центрифугируют 5 минут. Осадок помещают на предметное стекло, добавляя 1 каплю метиленового синего в разведении 1:1000. При просмотре под микроскопом обращают внимание на хвостовые концы обнаруженных личинок: у микродирофилярий хвост прямой, а у личинок D. reconditum он изогнут в виде крючка.

Таблица 1.



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2019-04-30 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: