Федеральное образовательное учреждение
Высшего профессионального образования
«Санкт-Петербургского» государственного аграрного университета
Калининградский филиал
Контрольная работа
По дисциплине: Акушерство и биотехника размножения сельскохозяйственных животных
На тему: «Замораживание и транспортировка спермы»
Выполнила: студентка V курса
зооинженерного факультета
заочной формы обучения
Пирожок Юлия Викторовна.
Полесск 2011
Замораживание и длительное хранение спермы быка
Широкое применение нашел метод замораживания и длительного хранения спермы быков в жидком азоте (-196°). Замороженную сперму можно доставлять в хозяйства 1—2 раза в год и использовать ее по мере надобности. Один раз в месяц сосуды, в которых содержится сперма, необходимо пополнять жидким азотом. На племпредприятиях (станциях) по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных сперму замораживают при помощи специального оборудования (приборов, аппаратов и т. д.) и хранят в стационарных емкостях, находящихся в хранилищах станций (филиалов). Отсюда ее отправляют в обслуживаемые хозяйства.
Для замораживания спермы на племпредприятиях (станциях) применяют следующие методы: Метод двухмоментного разбавления и трехступенчатого режима замораживания спермы быков при помощи специальных аппаратов (АХК-4, ПЗСС и др.). К замораживанию допускают сперму с подвижностью спермиев не ниже 8 баллов и их концентрацией не менее 0,8 млрд. в 1 мл. Затем сперму разбавляют глюкозо-цитратно-желточной средой (35—37°) двухмоментно: сначала без глиперина, а спустя 4 ч после охлаждения к разбавленной сперме путем подслаивания добавляют такую же среду, имеющую температуру плюс 2—5° и содержащую 16% глицерина. Сперму в глицеринизированной среде выдерживают в бытовом холодильнике 6—12 ч при температуре 2—5°. После эквилибрации (уравновешивания) проверяют подвижность спермиев (она должна быть не ниже 7 баллов), расфасовывают в стеклянные или полиэтиленовые ампулы по 1—1,2 мл. Ампулы запаивают и вкладывают в емкости, которые помещают в аппараты для замораживания. Замораживают сперму по трехступенчатому режиму со следующей скоростью: от 0 до 15° по 0,5° в 1 мин, от 15 до 50° по 2—3° в 1 мин и от 50 до 80° по 5—7° в 1 мин, после чего емкости (канистры) переносят в жидкий азот для хранения.
|
|
Метод одномоментного разбавления и быстрого замораживания спермы в форме гранул. В качестве разбавителей используют синтетические среды № 1 и №2. К разбавителям добавляют нетоксичный стрептомицин из расчета 1 г на 1000 мл жидкости. Свежеполученную сперму (после оценки) разбавляют средой № 1 в отношении 1:1, при этом концентрация глицерина в разбавленной сперме будет 3,5%; если качество спермы позволяет, ее дополнительно разбавляют средой № 2. При определении степени разбавления спермы для замораживания учитывают, что в одной грануле объемом 0,1 мл после оттаивания должно содержаться не менее 20—25 млн. подвижных спермиев. После разбавления сперму помещают в ванночку с водой, температура которой равна температуре спермы, и переносят на 30 мин в холодильник. При этом следят, чтобы сперма и вода охлаждались не быстрее 1° в минуту. Затем сперму при температуре 5° эквилибрируют в течение 5—6 ч. Для приготовления гранул берут блок сухого льда (двуокись углерода) и на его поверхности специальным нагревательным прибором (к электроутюгу прикрепляется пластина с выступами) делают лунки диаметром 5—7 мм. В каждую лунку 2-миллиметровым шприцем вносят по две капли спермы. Величина гранул должна быть 0,1 мл. После 5—10-минутной выдержки на поверхности сухого льда гранулы высыпают в сосуд (кружку) с жидким азотом. Гранулы со спермой разных быков высыпают в отдельные емкости. Сперму быков (замороженную) в гранулах можно расфасовывать в специальные трубочки из белой жести с продольным разрезом или в алюминиевые тубы, на которых записывают специальным карандашом кличку быка, дату получения спермы и название племпредприятия (станции). Кроме замораживания спермы на сухом льду, в настоящее время широкое применение нашел метод замораживания спермы в форме гранул в жидком азоте при помощи специальных пластин.
|
|
Замораживание спермы в гранулах в жидком азоте на фторопластовых пластинах. После получения и оценки сперму быков разбавляют лактозо-желточной средой с глицерином следующего состава: вода дистиллированная — 100 мл, лактоза — 11,5 г, желток куриных яиц —20 мл, глицерин —5 мл. Для предупреждения развития микрофлоры в сперме к среде добавляют препарат спермосан-3. Перед разбавлением среду подогревают до 30—35°. Этой средой сперму быков разбавляют в 2, 10 раз и более, в зависимости от объема гранул. Если применяют концентрированные гранулы спермы объемом по 0,1— 0,2 мл, то для них требуются меньшие степени разбавлении. Для замораживания спермы в гранулах объемом 0,5—1,0 мл сперму разбавляют в 10 раз и более. Такие гранулы перед осеменением коров не требуют дополнительного разбавления. Для замораживания сперму после разбавления охлаждают до температуры 2—4° в течение 4—5 ч, а затем разливают градуированными пипетками, шприцем или разливочной машиной в лунки (0,1—0,2 или 0,5 мл) охлажденной в жидком азоте фторопластовой пластины. Пластину со спермой выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 5—10 см в течение 1,5—2 мин, а затем погружают ее в жидкий азот на 1—2 мин. После замораживания спермы пластину вынимают из жидкого азота, гранулы спермы собирают в сачок или контейнер, а затем пересыпают их в охлажденные чашки. На пунктах искусственного осеменения гранулы спермы хранят в сосудах Дьюара. Уровень азота в них должен быть значительно выше чашек с замороженной спермой в гранулах.
|
|
Метод замораживания спермы в облицованных гранулах. По этому методу для замораживания используют свежеполученную сперму, разбавленную средами следующего состава:
Среда № 1. 11%-ный раствор лактозы или сахарозы 63 мл
Желток куриных яиц 30 мл
Глицерин 7 мл
Среда № 2. Вода дистиллированная 100 мл
Лактоза или сахароза 6 г
Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный 1,4 г
Глицерин 5 мл
Приготовленные среды наливают в стерильные полиэтиленовые емкости по 200—400 мл, которые подсоединяют к специальному устройству для разбавления спермы. После получения спермы ее разбавляют средой № 1 в соотношении 1: 1 и выдерживают при комнатной температуре 5—10 мин. Затем проводят дополнительное разбавление спермы средой № 2 до требуемой концентрации (20—25 млн. в дозе). Сперму разбавляют с помощью специального устройства, позволяющего дозирование вводить среды в отделенную часть одноразового полиэтиленового спермоприемника со спермой. Спермоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой и выдавливают в нее разбавленную сперму. Заполненную спермой трубку разделяют с помощью автомата АРС-2 на отдельные дозы по 0,33 мл с их герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контейнеры, которые закрывают пробками. Контейнеры закрепляют в обоймы специального устройства для эквилибрации и замораживания спермы. Это устройство помещают в холодильник для охлаждения до 2—5°. После 5—6-часовой выдержки при такой температуре обойму аппарата с контейнерами погружают в емкости с жидким азотом на 8—10 мин.
Замораживание спермы в соломинках (пайеттах). При замораживании используют полипропиленовые или поливинилхлоридные трубочки длиной 100 мм с внутренним диаметром 2,4 мм, одни конец которых предварительно закрывают специальным герметизирующим составом: парафин ГОСТ 13577—12,0, пентаэритритовый эфир канифоли — 44,8, тальк — 10,1, каучук натуральный — 1,5, глицерин ГОСТ 6259—71—8,0, краситель — 0,1. Сперму разбавляют трисбуферной средой, содержащей 6,056 г трисбуфера (трисгидрооксиметиланометан), 3,4 г лимонной кислоты, 2,5 г фруктозы, 166,3 мл бидистиллированной воды. Раствор делят на две равные части, к первой добавляют 15,8 мл бидистиллированной воды, 25 мл свежего яичного желтка, 100 тыс. ЕД антибиотиков, ко второй— 19,7 мл глицерина, желток и антибиотики в тех же количествах. Первый разбавитель добавляют к эякуляту, предварительно доведенному до температуры 25°. Вторую среду медленно добавляют к предварительно разбавленной сперме с таким расчетом, чтобы в соломинке (пайетте) содержалось 20—25 млн. подвижных спермиев. После разбавления сперму расфасовывают по 0,4 мл в стерильных условиях вакуумным способом. Для этого необходимое количество промаркированных соломинок (от 100 до 500 шт. в зависимости от количества спермы) ставят открытыми концами вниз в стеклянную плоскодонную посуду со спермой помещают в анаэростат, из которого насосом вначале откачивают воздух до давления 0,95 атм., а затем впускают его. Воздух нагнетает сперму в соломинку. Заполненные спермой пайетты зажимают в специальном держателе, при температуре 25° погружают в герметизирующий состав и закрывают второй конец. После герметизации соломинки помещают на медное сито (корзинку) и переносят в пары жидкого азота стационарного хранилища. Корзинку с соломинками опускают в хранилище до соприкосновения с поверхностью азота. Вскипание азота образует ток холодного газа, который охлаждает и замораживает сперму до 100—130° в течение 5 мин. Соломинки с замороженной спермой переносят в стаканчики, помещают в канистры и закладывают в хранилище с жидким азотом. Замороженную в соломинках сперму перед использованием оттаивают в стерильном полиэтиленовом мешочке, помещенном в теплую воду (38—40°) в течение 12—14 с. Независимо от метода замораживания сперму оттаивают и проверяют на подвижность спермиев сразу после замораживания, второй раз — через сутки, третий — через 7—10 дней и четвертый раз — через 14—20 дней. Замороженная сперма для дальнейшего хранения допускается при подвижности спермиев не ниже 4 баллов. Для оценки оттаянной спермы в пайеттах (выборочно) производят смешивание ее из одной соломинки с равным количеством изотонического раствора лимоннокислого или бикарбоната натрия. Для этого один конец соломинки обрезают ножницами и опускают в раствор, а затем этими же ножницами обрезают и второй ее конец. Полученную смесь спермы и раствора перемешивают соломинкой и с ее помощью берут каплю для оценки. Для осеменения используют сперму не раньше 14—20 дней после замораживания. Оттаявшую сперму вновь замораживать нельзя.
Транспортировка спермы
Для перевозки спермы в хозяйства используют различной конструкции емкости - сосуды Дьюара СДС-5 и др., термосы для ее сохранения и разные виды транспорта. Обычно со станции искусственного осеменения сперма производителей доставляется в хозяйства на пункты автотранспортом. Сперма высокоценных производителей нередко транспортируется в различные зоны страны авиа- и железнодорожным транспортом.
Основные требования к транспортировке спермы в термосах и емкостях — предохранить их от тряски (прокладки из поролона или других материалов), не допускать повреждения и нарушения температурного режима. Доставка спермы должна производиться в возможно короткие сроки. Вместе со спермой в хозяйство направляют ордер-накладную (2 экз., один возвращают на станцию), в которой указывают качество спермы. При транспортировке по железной дороге или самолетом термосы, упаковки со спермой пломбируют и снабжают этикетками с указанием места назначения и адреса отправителя. Для перевозки спермы производителей в хозяйства и хранения ее на колхозных и совхозных пунктах при температуре 0—4 и 5—20 °С пользуются термосами разной конструкции (термосы-ящики, бытовые сумки-холодильники). Чаще применяют пищевые термосы — это двустенные стеклянные колбы с безвоздушным пространством между стенками, помещенные в пластмассовый или жестяной футляр. Колбу закрывают корковой пробкой - крышкой. Эти термосы хорошо сохраняют температуру, но они очень хрупкие. Их удобнее использовать для стационарного сохранения спермы на пунктах, а для перевозки спермы лучше использовать более прочные термосы.
Сперму быков и баранов-производителей при температуре хранения 0—5°С перевозят в широкогорловых пищевых или пластмассовых термосах. Полиэтиленовый термос (конструкции ВИЖ и др.) — двустенный сосуд из полиэтилена с порошково-вакуумной термоизоляцией; емкость его 3,7 л. Температура 2— 4°С поддерживается в нем в течение 72 ч. Пробирки, ампулы, флаконы со спермой укладывают в вату или специальные поролоновые амортизаторы, которые с ордером помещают в прозрачные полиэтиленовые мешочки, и запаивают их, затем укладывают на лед термоса и сверху кладут небольшое количество льда или снега, имеющего температуру 0°С (лед или снег, взятый со двора во время сильных морозов, необходимо подержать в помещении до начала таяния и проверить температуру термометром). При температуре ниже 0°С спермии погибают.
При транспортировке спермы зимой следует учитывать, чтобы окружающая температура воздуха была не ниже минус 5°С, если она ниже, то принимают меры для утепления термоса.
В южных зонах страны для перевозки спермы быков и баранов, разбавленной специальными средами при температуре 10—18°С, используют те же термосы, но заполняют их прохладной водой, а для поддержания указанной температуры добавляют кусочки льда.
Разбавленную сперму хряков транспортируют в термосах различных типов («Харьков ТС-3», поролоновый термос, термос-ящик «Полтавский» или бытовые сумки холодильники и др.). При транспортировке спермы хряка в условиях температуры 10—20°С колбы (бутылочки, флаконы) со спермой плотно закрывают пергаментной бумагой или целлофаном и помещают в термос. После доставки ее на место необходимо снять с колбы резиновое кольцо и хранить сперму негерметически закрытой.
Сперму жеребцов после разбавления транспортируют при температуре 0—5 °С в баночках (50—100 мл) или флаконах из-под антибиотиков с притертыми пробками, фиксируют их резиновым кольцом и погружают в термос со льдом (конструкции ВНИИК. и др.). Чтобы сперма охлаждалась постепенно, сосуды с ней перед этим помещают в полиэтиленовые или марлевые мешочки, предварительно обернув их тонким слоем ваты. Сверху покрывают тонким слоем льда и закрывают термос крышкой.
При перевозке спермы следует принимать меры, предупреждающие ее взбалтывание и встряхивание в пути (прокладка ветошью, поролоном и др.). Термосы и сосуды, в которых перевозят сперму, нужно помещать в переднюю часть автомашины, где они будут подвергаться меньшему встряхиванию. Особенно важно соблюдать все эти правила при транспортировке спермы по плохим дорогам.