В начале занятия проводятся тестовый контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция. Проверяется выполнение домашнего задания. Затем студенты приступают к выполнению лабораторной работы, используя при этом инструкцию.
После выполнения лабораторной работы необходимо оформить протокол,сделать выводы к работе, которые проверяет и контролирует преподаватель. В конце занятия проводится итоговый контроль, подводятся итоги занятия.
Инструкция к проведению практического занятия по теме «Исследование нормальных и патологических компонентов мочи»
Работа 1. Количественное определение белка в моче по методу Брандберга – Робертса – Стольникова
Принцип метода основан на реакции Геллера с концентрированной азотной кислотой. Установлено, что в растворах, содержащих 0,033 % белка, т.е. 0,033 г/л, через 2 или 3 минуты образуется характерное белое кольцо после наслаивания мочи на азотную кислоту.
Материальное обеспечение: моча, 50% раствор азотной кислоты, пипетки, штативы, пробирки.
Ход работы.
- Приготовьте пять пробирок с мочой, разведенной в 10, 20, 30, 40 и 50 раз. Это будет первый ряд пробирок. Объем мочи в каждой пробирке – по 1 мл.
- Приготовьте пять других пробирок, содержащих по 1 мл 50% раствора азотной кислоты. Это будет второй ряд пробирок.
- В каждую из пробирок второго ряда осторожно наслаивайте по стенке слегка наклоненной пробирки мочу определенного разведения. Моча в результате меньшей относительной плотности наслаивается на кислоту. На границе двух жидкостей при наличии белка образуется белое кольцо, толщина и быстрота появления которого зависят от концентрации белка.
- Результат учитывайте по пробирке с максимальным разведением мочи, при котором в пробирке появилось едва заметное кольцо между 2-й и 3-й минутой после наслаивания мочи на азотную кислоту. Например, кольцо появилось после второй минуты при разведении мочи в 30 раз. Следовательно, содержание белка в ней составляет: 0,033 х 30 = 0,099 г/л.
Работа 2. Обнаружение кетоновых тел (ацетона) с помощью пробы Люголя
Принцип метода. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия соединение оранжево-красной окраски, которое после подкисления уксусной кислотой приобретает вишневый цвет.
Материальное обеспечение: моча, 10% раствор гидроксида натрия, 10% раствор нитропруссида натрия, концентрированная уксусная кислота.
Ход работы.
1. Налейте в пробирку 2 мл мочи.
2. Добавьте 3 – 4 капли 10% раствора нитропруссида натрия и 2 – 3 капли раствора 10% гидроксида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание.
3. Далее добавляйте в пробирку по каплям концентрированную уксусную кислоту. Окрашивание станет вишневым. Если ацетон в моче отсутствует, то при подкислении уксусной кислотой оранжево-красное окрашивание переходит в желтое (реакция на креатинин в моче).
Работа 3. Обнаружение ацетоуксусной кислоты в моче по реакции Герхарда
Принцип метода: ацетоацетат образует с треххлористым железом соединение, окрашенное в вишневый цвет.
Материальное обеспечение: моча, 5% раствор хлорного железа (ІІІ), пробирки, пипетки, штативы.
Ход работы.
1. Налейте в пробирку 5 мл мочи.
2. Далее по каплям добавляйте в пробирку 5% раствор хлорного железа, выпадает осадок фосфатов железа.,. При наличии ацетоацетата от дальнейшего добавления хлорного железа появляется вишнево-красное окрашивание (реакция на енолы), постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты.
Работа 4. Обнаружение сахара в моче
Проба Троммера.
Принцип метода основан на способности альдегидоспиртов восстанавливать металлы.
Материальное обеспечение: моча, 30% раствор едкого натра, 7% раствор сульфата меди, водяная баня, термометр, пробирки, пипетки, штативы.
Ход работы
К 1 мл мочи добавьте 5 капель 30% раствора едкого натра и несколько капель 7% раствора сульфата меди до появления неисчезающего помутнения раствора, вызванного наличием гидроокиси меди. При нагревании до кипения выпадает красный осадок закиси меди Си2О.
Проба Фелинга.
Реакция Фелинга является модификацией реакции Троммера, но в ней вместо гидроокиси меди используются сульфат меди и щелочной раствор сегнетовой соли. Химизм реакции Фелинга тот же, что и реакции Троммера.
Материальное обеспечение: моча, 7% раствор сульфата меди, щелочной раствор сегнетовой соли, пробирки, пипетки, штативы, водяная баня, термометр.
Ход работы
1. Приготовление реактива Фелинга: к 10 каплям 7% раствора сульфата меди добавьте 10 капель щелочного раствора сегнетовой соли.
2. К полученному реактиву Фелинга добавьте 20 капель исследуемой мочи, жидкость перемешайте и нагревайте до начала кипения. В присутствии глюкозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди.
Проба Ниландера.
Принцип метода: эта реакция основана на способности сахара восстанавливать гидроксид висмута до металла. Соли висмута особенно удобны для обнаружения сахара в моче, так как, в отличие от меди, висмут не восстанавливается мочевой кислотой.
Материальное обеспечение: моча, реактив Ниландера, пипетки, штативы, пробирки, водяная баня, термометр.
Ход работы
1. В пробирку налейте 2 мл мочи и добавьте 1 мл реактива Ниландера.
2. Прокипятите полученный раcтвор около двух минут. Пронаблюдайте появление сначала коричневого, а затем черного окрашивания, вызванного образованием осадка кристаллического висмута.
ВЫВОДЫ:
Подпись преподавателя:
.
Приложение 1