Крымский государственный медицинский университет
Им. С. И. Георгиевского
Практические задания
По медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии
«Морфология и физиология микроорганизмов.
Общая вирусология»
(учебно-методическое пособие для студентов лечебного факультета)
Ф.И.О. ________________________________________________________
Факультет ____________________________________________________
Курс __________________________________________________________
Группа ________________________________________________________
Симферополь – 2015 г.
Дата __________________
Занятие №1
Тема: Организация микробиологической лаборатории. Правила работы. Выполнение требований биологической безопасности. Методы микробиологического исследования. Методы микроскопического исследования. Техника микроскопии. Методы окраски. Морфология микробов (бактерий и грибов).
Вопросы для обсуждения:
- Микробиологическая лаборатория.
- Типы лабораторий: бактериологическая, паразитологическая, микологическая, вирусологическая, иммунологическая, специальная (особо-опасных инфекций).
- Структура бактериологической лаборатории.
- Оборудование бактериологической лаборатории.
- Правила работы в микробиологической лаборатории.
- Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней.
- Микроскопия и её методы:
| 1) световая; | 4) люминесцентная; |
| 2) в тёмном поле; | 5) электронная. |
| 3) фазовоконтрастная; |
- Основные формы бактерий
- Методы окраски бактерий.
- Морфология грибов.
Практические задания:
1. Ознакомиться с организацией и правилами работы кафедры микробиологии как микробиологической лаборатории.
2. Изучить методы микроскопии и правила работы с иммерсионным объективом.
3. Записать методы микробиологического исследования:
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4. Микроскопировать окрашенный препарат Sarcina flava. Зарисовать.
| Рис. 1. Sarcina flava |
5. Микроскопировать окрашенные препараты с бактериями различной формы:
а) кокки (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes);
| 
| |||
| Рис. 2. Стафилококк _______________________ | Рис. 3. Стрептококк _______________________ |
б) палочковидные (Escherichia coli, Bacillus anthracis);
|
| |||
| Рис. 4. Кишечная палочка _______________________ | Рис. 5. Возбудитель сибирской язвы __________________________ |
в) извитые (Treponema pallidum).
| Рис. 6. Возбудитель сифилиса ___________________________ |
6. Микроскопировать окрашенные препараты дрожжеподобных грибов (Candida spp.) и плесневых грибов (Mucor spp.).
|
| |||
| Рис. 7. Мукор ________________ | Рис. 8. Кандида ________________ |
Подпись преподавателя _________________
Дата__________________
Занятие №2
Тема: Прокариоты и эукариоты. Классификация прокариот. Структура бактериальной клетки. Капсулы. Жгутики. Споры. Методы их выявления. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.
Вопросы для обсуждения:
- Отличия прокариотов от эукариотов.
- Классификация прокариотов.
- Ультраструктура бактериальной клетки и методы выявления элементов ультраструктуры.
- Нуклеоид, его функция.
- Цитоплазма, органоиды, включения.
- Цитоплазматическая мембрана и мезосомы.
- Клеточная стенка бактерий, ее строение.
- Жгутики. Строение, функция, методы обнаружения.
- Капсула, значение, методы выявления.
- Споры. Методы окраски спор.
- Сложные методы окраски бактерий.
- Метод Грама, его практическое значение.
- Окраска по Цилю-Нильсену, её практическое применение.
Практические задания:
1. Окрасить по Граму фиксированный препарат, приготовленный из смеси бактерий (Escherichia coli и Bacillus cerеus), микроскопировать.
| Рис. 1. Препарат из смеси бактерий ______________________________ ______________________________ Окраска_____________________ |
2. Микроскопировать препарат Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного, окрашенный по Цилю-Нильсену.
 | |||
 |
| Рис. 2. Возбудитель туберкулёза ____________________________ Окраска_____________________ |
3. Выявить гранулы волютина в окрашенных по Нейссеру/Лёффлеру мазках из Corynebacterium diphtheriae, зарисовать.
| Рис. 3. Гранулы волютина Окраска ________________________ |
4. Приготовить препарат-мазок из культуры Klebsiella pneumoniae, окрасить по Бурри-Гинсу, микроскопировать, зарисовать.
| Рис. 4. Капсулы Окраска ________________________ |
5. Микроскопировать препараты, приготовленные из спорообразующих бактерий (бациллы и клостридии), окрашенных по Пешкову/Ожешко, зарисовать.
| Рис. 5. Споры бацилл и клостридий Окраска ________________________ |
6. Наблюдать подвижность микроорганизмов в препарате «раздавленная капля» из сенного настоя.
7. Определить тип строения клеточной стенки и отметить основные её структурные компоненты.
8. Написать обязательные и непостоянные элементы бактериальной клетки:
Обязательные элементы Непостоянные элементы
__________________________ ___________________________
__________________________ ___________________________
__________________________ ___________________________
__________________________ ___________________________
__________________________ ___________________________
__________________________ ___________________________
Подпись преподавателя _________________
Дата__________________
Занятие №3
Тема: Физиология прокариот: питание бактерий. Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.
Вопросы для обсуждения:
- Метаболизм бактерий: конструктивный и энергетический.
- Типы питания бактерий.
- Ферменты бактерий и их роль в метаболизме.
- Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.
- Прототрофы и ауксотрофы.
- Питательные среды, их классификация и назначение.
- Требования, предъявляемые к приготовлению питательных сред.
- Стерилизация. Методы стерилизации.
- Дезинфекция. Методы дезинфекции.
- Дезинфектанты и антисептики.
Практические задания:
1. Изучить питательные среды и их компоненты:
а) компоненты питательных сред: пептон, агар-агар, желатин, NaCl и другие;
б) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), кровяной агар, сывороточный агар, среды Эндо и Плоскирева.
2. Заполнить таблицу:
Таблица 1.
Классификация ферментов
| Биохимическая | Генетическая | Биологическая | ||
| конститутивные ферменты(кодируются обычно генами хромосомы) | индуцибельные ферменты (чаще кодируются генами плазмид и транспозонов) | Экзо- ферменты | Эндо- ферменты | |
3. Ознакомиться с применяемой в микробиологических исследованиях лабораторной посудой (чашки Петри, пипетки, шпатели, колбы, пробирки) и правилами подготовки ее к стерилизации.
4. Ознакомиться с работой парового (автоклава) и сухожарового стерилизаторов, бактериальных фильтров.
5. Ознакомиться с наиболее часто применяемыми дезинфектантами (хлорамин, хлорная известь) и антисептиками (70% этанол, 5% спиртовый раствор йода, растворы калия перманганата, хлоргексидина, мирамистина и другие).
6. Заполнить таблицу:
Таблица 2.
| № п/п | Метод | Аппаратура | Режим стерилизации | Стерилизуемый материал |
| Прокаливание | ||||
| Горячий воздух | ||||
| Пар под давлением | ||||
| Текучий пар (дробная стерилизация) | ||||
| Щадящее прогревание (тиндализация) |
Стерилизация - __________________________________________________
________________________________________________________________
Дезинфекция - ___________________________________________________
________________________________________________________________
Асептика - ______________________________________________________
________________________________________________________________ Антисептика - ___________________________________________________
________________________________________________________________
Подпись преподавателя ________________
Дата__________________
Занятие №4
Тема: Дыхание, размножение и рост бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1-й день исследования).
Вопросы для обсуждения:
1. Дыхание бактерий, сущность процесса.
2. Типы дыхания бактерий.
3. Ферменты и структуры клетки, принимающие участие в процессе дыхания.
4. Рост и способы размножения бактерий.
5. Механизм деления бактериальной клетки.
6. Фазы размножения культуры бактерий в стационарных условиях.
7. Культивирование аэробных бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.
8. Бактериологический метод исследования, его этапы.
Практические задания:
1. Заполнить таблицу:
| Дыхательные ферменты | Наличие дыхательных ферментов у: | ||
| аэробов | факультативных анаэробов | облигатных анаэробов | |
| ДегидрогиназыНАД | |||
| Флавинзависимые дегидрогиназы ФАД | |||
| Убихиноны Co Q | |||
| Цитохромы: a, b, c (гемопротеины) |
2. Изучить технику посева исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды.
3. Приготовить мазок из исследуемого материала (смесь бактерий), окрасить по Граму и микроскопировать.
4. Посеять исследуемый материал в чашку Петри с мясо-пептонным агаром.
5. Поставить посевы в термостат.
6. Оформить протокол исследования культуры аэробных бактерий (1-ый день).
Протокол
бактериологического исследования аэробных бактерий
(1-й день исследования)
1. Приготовлен мазок из исследуемого материала (смесь бактерий).
Рис. 1. Смесь бактерий
(стрелкой указать грамположительные
и грамотрицательные бактерии).
2. При окраске по Граму выявлены ________________________________
3. Произведен посев исследуемого материала на ______________________
4. Посевы помещены в термостат при t ___ C на __________ часов.
Подпись преподавателя ________________
Дата__________________
Занятие №5
Тема: Факторы влияющие на рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (2 и 3-й дни исследования).
Вопросы для обсуждения:
1. Охарактеризивать вид, подвид, штамм, клон бактерий.
2. Культуральные свойства бактерий и способы их изучения.
3. Чистая и смешанная культура бактерий.
4. Оценка чистоты культур аэробных бактерий на 2 этапе бактериологического исследования.
Практические задания:
1. Ознакомиться с характером роста бактерий разных видов на плотных и в жидких питательных средах.
2. Изучить культуральные свойства бактерий, входящих в состав бактериальной смеси, посеянной на предыдущем занятии на чашки Петри с МПА (см. протокол, занятие № 4).
3. Выделить изолированные колонии двух типов (№1 и № 2), приготовить из них мазки, окрасить по Граму, микроскопировать.
4. Пересеять колонии культур №1 и №2 на скошенный мясо-пептонный агар (МПА).
5. Исследовать характер роста культур №1 и №2 на скошенном МПА и определить чистоту культур.
6. Пересеять чистые культуры №1 и №2 со скошенного МПА на дифференциально-диагностические среды.
7. Оформить протокол исследования культур аэробных бактерий (2 и 3 дни).
Протокол