Схема постановки развернутой реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке крови больного и определения их титра




Ингредиенты Номер пробирки
          Контроль сыворотки Контроль диагностикума
0,85% р-р NaСl, мл 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 - 1,0
Сыворотка крови больного в разведении 1:50, мл 1,0 → 1,0 → 1,0 → 1,0 → 1,0 → 1,0 → -
Полученное разведение сыворотки крови больного 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600    
Диагностикум, в каплях           1:100  

Инкубация при 37º С в течение 2 часов, затем при комнатной температуре 18-20 часов.

Выводы: титр антител к О-антигену Salmonella typhi в сыворотке крови больного составляет 1:___.

6. Ознакомиться с методом постановки реакции кольцепреципитации для выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы. Зарисовать полученные результаты.

а б

Рис. 2. Реакция кольцепреципитации:

а – контроль, отрицательный результат; б – опыт, положительный результат.

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №17

 

Тема: Серологические реакции, типы, механизмы. Использование в диагностике инфекционных заболеваний. Иммунопрофилактика и иммунотерапия.

Вопросы для обсуждения:

1. Реакция связывания комплемента (РСК). Практическое применение.

2. Иммунные реакции с метками: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), иммунный блоттинг (ИБ). Практическое применение.

3. Вакцины. Группы вакцин по способу приготовления.

4. Гомологичные и гетерологичные иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Получение. Серотерапия и серопрофилактика инфекционных болезней.

 

Практические задания:

1. Ознакомиться с учетом результатов РСК (демонстрация отрицательной и различной степени интенсивности положительной реакции (табл. 3).

Таблица 1.

Интенсивность реакции оценивают следующим образом:

“ ++++ “ - полная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами не окрашена, эритроциты в осадке;
“ +++ “ - неполная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами слабо-розового цвета, значительный осадок эритроцитов;
“ ++ “ - частичная задержка гемолиза: жидкость красная, небольшой осадок эритроцитов;
“ + “ - слабая задержка гемолиза: жидкость интенсивно красная, осадок эритроцитов незначительный;
“ – “ - полный гемолиз (лаковая кровь).

Таблица 2.

Схема основного опыта реакции связывания комплемента

Первая система Вторая система
Ингредиенты (в мл) Пробирки Ингредиенты (в мл) 4-я пробирка
1-я опытная 2-я контроль сыворотки 3-я контроль антигена
Исследуемая сыворотка, разведенная 1:5 0,5 0,5 - Гемолитическая сыворотка в тройном титре 2,0 мл
Антиген в рабочей дозе 0,5 - 0,5
Комплемент в рабочей дозе 0,5 0,5 0,5 3% взвесь эритроцитов барана 2,0 мл
0,85% раствор NaCl - 0,5 0,5 Пробирки ставят в термостат при t 37ºС на 30 минут
Пробирки ставят в термостат при t 37ºС на 1 час
  1,0 1,0 1,0 ← смешивание ингредиентов

После смешивания ингредиентов 1-й и 2-й систем, пробирки ставят в термостат при tº 37ºС на 1 час. Результат учитывают предварительно после извлечения пробирок из термостата и окончательно после пребывания их в течение 18-20 часов в холодильнике.

 

 

5. Нарисовать схемы постановки РИФ, ИФА.

А. Схема прямой РИФ  

 

Б. Схема непрямой РИФ  

 

Нарисовать схемы твердофазного ИФА:

А. Схема прямого ИФА  

 

Б. Схема непрямого ИФА  

6. Изучить схему постановки иммуноблоттинга.

Рис. 3. Схема иммуноблоттинга.

 

 

Подпись преподавателя ________________

Занятие №18

 

Зачет



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-03-31 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: