Контроль смывов с одежды, рук, инвентаря, оборудования

Висячая капля

Висячая капля — метод микроскопирования живых бактерий при физиологических условиях роста; позволяет многодневно наблюдать объект. Для приготовления висячей капли берут пинцетом покровное стекло, проводят через пламя и остужают. В центр стекла наносят каплю исследуемого материала, взвешенного в изотоническом растворе хлорида натрия. Затем покровное стекло быстро поворачивают каплей вниз и кладут на стерильное предметное стекло с вышлифованной посредине лункой, края которой предварительно смазывают вазелином. Можно наложить предметное стекло на покровное и перевернуть: капля оказывается висящей в герметически изолированном пространстве (рис.). При слабом увеличении и суженной диафрагме микроскопа находят край капли, далее исследуют препарат при более сильном увеличении. Чтобы ограничить подвижность микроорганизмов, вместо изотонического раствора хлорида натрия применяют расплавленный и остуженный до t° 45° агар.

2)Раздавленная капля — способ наблюдения живых микроорганизмов в микроскоп. На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала, ее осторожно накрывают покровным стеклом, чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха.

3. Метод окраски препаратов по Граму.

Грама метод окраски

Грама метод окраски — дифференциальная сложная окраска микроорганизмов, при которой все бактерии разделяются на две группы: окрашивающиеся по Граму — грамположительные и не окрашивающиеся — грамотрицательные. Грамположительные микроорганизмы образуют прочные соединения с фиолетовой краской (генцианвиолет, метилвиолет, кристаллвиолет) и с йодом.

Техника окраски. На фиксированный препарат накладывают фильтровальную бумагу и обливают ее карболовым раствором генцианвиолета. Через 1—2 мин. краску сливают и наливают раствор Люголя (на 1 мин.). Слив раствор Люголя, помещают препарат в 96° спирт на 20—30 сек., после чего спирт смывают водой. Препарат докрашивают разведенным фуксином в течение 30—60 сек. Затем препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют. Грамположительные микроорганизмы имеют темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные — красный.

4. Классификация питательных сред.

Виды питательных сред

По назначению питательные среды подразделяют на следующие основные категории.

Универсальные — среды, на которых хорошо растут многие виды патогенных и непатогенных бактерий. К ним относятся: мясо-пептонный бульон (МПБ = мясная вода + 1% пептона + 0,5% NaCl), мясо-пептонныйагар (МПА = МПБ + 2-3% агара).

Дифференциально-диагностические — среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям. К ним относятся среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса и многие др.

Селективные (синонимы: избирательные, элективные, обогатительные) — среды, со­держащие вещества, используемые микроорганизмами определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других микроорганизмов. Се­лективные среды позволяют направленно отбирать из исследуемого материала оп­ределенные виды бактерий. Сюда относятся среды Мюллера, селенитовая, Рапопорт, 1%-наяпептонная вода и др.

Дифференциально-селективные — среды, сочетающие в себе свойства диф­ференциально-диагностических и селективных сред. Они используются, в частности, для ускорения обнаружения и идентификации бактерий, относящихся к большому числу широко распространенных видов энтеробактерий и псевдомонад (среды Сиволодского).

Специальные — среды, специально приготовленные для получения роста тех бактерий, которые не растут или очень плохо растут на универсальных средах. К ним относятся среды Мак-Коя-Чепина (для получения роста возбудителя туляремии), кровяной МПА (для получения роста патогенных стрептококков), среда Левенштейна-Иенсена (для выделения возбудителя туберкулеза) и др.

Синтетические — среды строго определенного химического состава, представляющие собой растворы неорганических солей с добавлением химических соединений, которые служат источником углерода или азота. Примером такой синтетической среды является минимальная среда М-9, в которой источником энергии и углерода является глюкоза, а азота — NH4C1. Синтетические среды могут быть и более сложного состава с включением различных аминокислот, оснований и витаминов.

Полусинтетические — синтетические среды, к которым добавляют какой-либо продукт природного происхождения, например сыворотку крови. Существует много различных вариантов питательных сред, сконструированных с учетом потребностей соответствующих видов бактерий и диагностических целей.

1. Посев микроорганизмов на питательные среды в чашки Петри и пробирки.

Посе́в (бакпосев) — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах, применяемый для культуральной диагностики в медицинской микробиологии, а также для исследования биохимических и биологических свойств в различных биотехнологических целях. В зависимости от содержания исследуемых бактерий в образце, проводят посев на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры). Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения. Различают различные методы посева

2. Правила забора средней пробы из продуктов разной консистенции.????
?

?

3. Правила смывов с поверхностей, рук, посуды.

Контроль смывов с одежды, рук, инвентаря, оборудования

4. Санитарно-бактериологический контроль смывов с одежды, рук, инвентаря, оборудования

В целях осуществления постоянного санитарно- бактериологического контроля на предприятиях общественного питания, пищевых отраслей различного профиля за поверхностью объектов, контактирующих с продукцией, применяются различные показатели. Например, определяют общую бактериальную обсемененность объекта (руки работников, спецодежда, оборудование и т.п.), наличие санитарно-показательной микрофлоры (БГКП, энтерококков), а также в отдельных случаях наличие на поверхности исследуемого объекта условно-патогенной и патогенной микрофлоры, характерной для данного производства (при использовании мясного сырья - микроорганизмов рода Salmonella, в кондитерском производстве - Staphylococcus). Общую бактериальную обсемененность объекта определяют количественно (обычно в перерасчете на 1см² поверхности- микробное число), а также, в отдельных случаях- качественно.

Данные показатели определяются как в плановом порядке в лабораториях производства и работниками СЭС, так и внепланово по эпидемическим показаниям.

Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов обихода и оборудования проводится с помощью следующих методов:

• смывов (тампонами или салфетками);

• отпечатков (контактный метод);

• агаровой заливки.

Метод смывов. Этот метод является основным при отборе проб для исследования твердых поверхностей. Смывы с крупных плоских поверхностей (столы, подоконники, полы, стулья, оборудование, инвентарь и т.д.) производят перед началом рабочего дня, либо после санитарной обработки в санитарные дни. Общая площадь поверхности крупных объектов, с которой берется смыв - 100 см². Для ограничения поверхности используют шаблон (трафарет) площадью 25 см², изготовленный из металла, накладывая его последовательно на 4 разных участка. Трафареты перед отбором смывов должны быть простерилизованы. Смывы с рук работников следует производить перед началом работы. При взятии смывов с рук протирают тампоном обе ладони рук, проводя не менее 5 раз по одной ладони и пальцам, затем протирают участки между пальцами, ногти и под ногтями. При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4 площадки по 25 см²: нижнюю часть каждого рукава и две площадки с верхней и передней части спецовки. Смывы с посуды на предприятиях общественного питания производят, протирая тампоном всю поверхность исследуемых объектов - для тарелок, рабочую поверхность - для ложек, вилок и т.д. (в количестве 2-3 штуки для мелких объектов). Смывы с мелких предметов можно получить, погрузив их непосредственно в колбу со стерильной жидкостью. В течение 10 мин их встряхивают, затем полученную смывную среду используют для посевов. В каждом случае используют стерильные ватные или марлевые тампоны,
которые перед употреблением смачивают стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, водой или питательной средой (чаще мясопептонным бульоном или средой Кесслера). При контроле жирных поверхностей пользуются сухими тампонами или салфетками.

5. Салфетки помещают в колбы с увлажняющей жидкостью и транспортируют в лаборатории с соответствующим сопроводительным документом, где проводятся соответствующие посевы: на общую обсемененность смыва или его разведения, на присутствие санитарно-показательных (БГКП, энтерококков), патогенных (сальмонелл, синегнойной палочки, протея) микроорганизмов на соответствующие среды.

6. Методы забора проб воздуха для анализа.