ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ
Существуют две группы методов диагностики гельминтозов - прижизненные и посмертные. Кроме того, надо уметь дифференцировать гельминтозы и другие инвазионные, а также инфекционные заболевания.
Прижизненная диагностика гельминтозов
Диагноз на гельминтозы при жизни животных ставят на основании результатов лабораторных методов исследований и диагностических дегельминтизаций (прямых методов), а также иммунологических реакций (косвенных методов). Подсобную роль в диагностике гельминтозов играют результаты исследований промежуточных хозяев (при биогельминтозах), клинические симптомы и эпизоотологическне данные.
Основные методы диагностики - лабораторные исследования, позволяющие часто обнаруживать возбудителей гельминтозов или их яйца и личинки в экскретах (фекалиях, моче, мокроте), секретах (желчи), тканях (крови, мышцах), органах (кусочках кожи), в содержимом пунктатов и абсцессов.
Лабораторные методы диагностики гельминтозов животных легко выполнимы и достаточно точны, поэтому их широко применяют в производственных условиях (в ветеринарных лабораториях и в других ветеринарных учреждениях). В зависимости от целевого назначения лабораторные исследования подразделяют на гельминтоовоскопическне, гельминтоларвоскопические и гельминтоскопические методы исследований.
- Гельминтоовоскопические методы исследований позволяют выявлять в экскретах, секретах и соскобах яйца многих паразитических червей. Широко применяется в ветеринарной практике исследование проб фекалий по Фюллеборну, последовательного промывания и др.
- Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктпокаулов, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий методами Бермана - Орлова, Вайда и др.
- Гелъминтоскопические, или макрогельминтоскопические, исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых наружу гельминтов или их фрагментов (члеников цестод). В практических условиях этим способом диагностируют аскаридоз свиней, цестодозы (мониезиоз жвачных, дрепанидотениоз гусей, тениндозы плотоядных).
Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют:
- а) гельминтокопрологические исследования (исследование фекалий),
- б) исследование выделений других органов и др.
Гельминтокопрологические исследования
Большинство гельминтов, паразитирующих у животных, выделяют во внешнюю среду через желудочно-кишечный тракт яйца, личинок и фрагменты тела (членики). Поэтому гельминтокопрологические исследования являются основными методами прижизненной диагностики гельминтозов. Плановые гельминтокопрологические обследования животных в хозяйствах проводят два раза в год: первый раз в марте - апреле и второй в ноябре - декабре.
Пробы фекалий берут от двух-трех возрастных групп. Например, на свиноферме обследуют копрологически 3-4-месячных поросят, 5- 7-месячных подсвинков и взрослых свиноматок. От каждой возрастной группы берут по 15-25 проб фекалий. Результаты гельминтокопрологических исследований во многом зависят от правильности отбора и упаковки проб и своевременной доставки их и ветеринарную лабораторию. Для упаковки фекалий используют кульки и пакетики из целлофана и плотной бумаги. Жидкие фекалии можно пересылать в небольших баночках (бактериологические пробирки непригодны). Для исследований пригодны только свеже выделенные фекалии. Их берут у крупных животных из прямой кишки рукой в резиновой перчатке; от свиней, телят, овец и коз фекалии следует брать средним и указательным пальцем в напальчниках.
У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки. Иногда допускается брать фекалии с пола, если они свежие и известно от какого животного. От одного животного берут не менее 10-20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).
Все пробы фекалий этикетируют:
- по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) пишут номер пробы (кличку коров).
- К пробам фекалий прилагают опись, где указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых - кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб.
- В сопроводительной следует указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации против фасциолеза).
Необходимо как можно быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре через 16- 20 ч из яиц кишечных стронгилят выходят личинки, что затрудняет диагностику диктиокаулеза жвачных. Результаты исследования регистрируют в специальном журнале, в котором, кроме порядкового номера, вида, клички (номера) животного, метода и результатов исследования, обязательно отмечают возраст животного и интенсивность инвазии (количество яиц и личинок в препарате или в трех каплях взвеси).
Гельминтоовоскопические методы.
В ветеринарных лабораториях пробы фекалий животных наиболее часто исследуют гельминтоовоскопическими методами. Их делят
- на простые (метод нативного мазка) и
- методы концентрации яиц гельминтов (флотации, осаждения и комбинированные).
Метод нативного мазка. В ветеринарной практике имеет ограниченное применение, вследствие низкой его эффективности. Яйца паразитических червей удается обнаружить только при высокой и средней интенсивности инвазии. На предметное стекло наносят каплю равных частей воды и глицерина и небольшой кусочек фекалий (с булавочную головку), тщательно перемешивают стеклянной или деревянной палочкой; после удаления твердых частиц на эту смесь кладут покровное стекло и исследуют под микроскопом. Глицерин просветляет препарат и препятствует быстрому высыханию его. Рекомендуют исследовать 5-10 препаратов (капель). Этот метод используют в качестве дополнительного к другим методам.
Методы концентрации яиц гельминтов разделяются на три группы, в зависимости от соотношения плотности яиц гельминтов и жидкости, в которой взвешены пробы фекалий животных.
Методы флотации. При методах флотации (всплывания) используют насыщенные растворы солей с более высокой плотностью (1,18-1,50), чем яйца паразитических червей. В лабораторной практике из флотационных жидкостей наиболее часто применяют насыщенный раствор натрия хлорида, или поваренной соли (плотность 1,18-1,2 при комнатной температуре). Для приготовления такого раствора в кастрюлю или ведро с кипящей водой постепенно всыпают при помешивании поваренную соль до образования на дне небольшого осадка (380-400 г на 1 л воды). Горячий раствор фильтруют через несколько слоев марли в бутыль и применяют после охлаждения (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).
При диагностике некоторых гельминтозов используют также насыщенные растворы технической (гранулированной) селитры, или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 л кипящей воды), натриевой селитры, или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли и горячей воды 1:1), английской соли, или магния сульфата с плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 л горячей воды), натрия тиосульфата, или гипосульфита натрия, плотность которого колеблется от 1,38 до 1,40 (1750 г на 1 л кипящей воды), а также нитрата свикца с плотностью 1,5 (650 г на 1 л горячей воды). В последнем растворе всплывают яйца всех паразитических червей, включая яйца трематод, но деформируется оболочка яиц фасциол и парамфистомид.
Для определения плотности насыщенных растворов солей используют денсиметр.
Метод Фюллеборна. В полистироловый, пластмассовый пли стеклянный стаканчик емкостью 75-100 мл помещают пробу фекалий массой Зги постепенно добавляют 50- 75 мл насыщенного раствора натрия хлорида порциями при тщательном размешивании взвеси стеклянной палочкой. Плотные фекалии овец (коз и кроликов) предварительно растирают с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив при помешивании необходимое количество флотационной жидкости. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют, а взвесь фекалий фильтруют в другой стаканчик через нержавеющее металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0,3-0,5 мм.
Во время отстаивания заряженной пробы яйца многих видов нематод и цестод всплывают на поверхность. Через 45 мин проволочной или спиральной петлей (диаметр 0,8- 1 си) снимают три капли поверхностной пленки и помещают их на предметном стекле. Не накрывая капли покровными стеклами, просматривают их под малым увеличением микроскопа при опущенном вниз конденсоре. Число обнаруженных яиц каждого вида гельминта в трех каплях подсчитывают. Метод Фюллеборна прост, дешев, удобен и сравнительно эффективен при многих нематодозах, поэтому его широко применяют в лабораториях и в других ветеринарных учреждениях.
Методы осаждения. При методах осаждения (седиментации) пробы фекалий смешивают с водой, плотность которой меньше яиц паразитических червей.
Метод последовательного промывания. Пробу фекалий массой 3-5 г кладут в стакан (плотные фекалии овец предварительно растирают в ступке с небольшим количеством воды) и добавляют порциями 15-кратное количество воды, размешивая взвесь до равномерной консистенции. Смесь фильтруют через ситечко в стакан емкостью 175- 200 мл, доливают воду при помешивании почти до краев стакана, после чего фильтрат отстаивают 5 мин (до образования осадка). Затем верхний слой жидкости сливают или отсасывают спринцовкой до осадка, а к осадку снова добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают 5 мин, после чего жидкость сливают или отсасывают до осадка. Такие манипуляции повторяют до просветления надосадочного слоя воды в стакане. Последний раз надосадочный слой сливают, а осадок наносят на большое предметное стекло (7X10 см) и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики трематодозов жвачных, плотоядных и птиц, а также других гельминтозов животных.
Комбинированные методы. Основаны на принципе осаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы сравнительно редко используют в ветеринарных лабораториях.
Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (1- 2 г) размешивают в стаканчике с 20-30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1-2 мин, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и натрия хлорида. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором натрия хлорида. Этот метод применяют преимущественно при нематодозах свиней.
Метод Щербовича. Техника исследования фекалий в принципе такая же, как при методе Дарлинга. Отличается от предыдущего метода тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенные растворы натрия нитрата (при метастронгилезе свиней) и натрия тиосульфата (при макраканторипхозе). Данный метод более эффективен.