Микроскопию окрашенных препаратов в микробиологической практике производят с иммерсионным объективом, который обладает более высокой разрешающей способностью, чем сухой. При этом обязательным условием является погружение объектива в масло, показатель которого совпадает с показателем преломления стекла (1,52). Для этих целей применяют так называемое иммерсионное масло – кедровое или терпеновое масло. В этом случае пучок света, вышедший за пределы предметного стекла, не рассеивается и лучи, не меняя своего направления, попадают в объектив. Иммерсионный объектив дает увеличение х90 (х100), а в сочетании с окуляром х10 получается увеличение в 900 (1000) раз.
Порядок работы с иммерсионным микроскопом:
1. Поднять конденсор вверх до уровня предметного столика, поставить зеркало плоской стороной.
2. Поставить объектив х8 и, глядя в окуляр, движением зеркала добиться наилучшего освещения поля зрения.
3. На предметное стекло с микропрепаратом нанести каплю иммерсионного масла, положить его на предметный столик и установить объектив х90 (х100). Под контролем глаза, глядя сбоку, осторожно опустить, пользуясь макровинтом, тубус до погружения объектива в иммерсионное масло. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может привести к повреждению фронтальной линзы. Затем, наблюдая в окуляр, при осторожных поворотах макровинта находят контуры микробных клеток и фокусируют изображение микровинтом, вращая его в пределах только одного оборота!
По окончании микроскопии поднимите тубус, снимите препарат и поместите его в дезинфицирующий раствор; осторожно сотрите масло с иммерсионного объектива, опустите конденсор и переведите револьвер на объектив х8.
|
Изучите приготовленный препарат под микроскопом. Обратите внимание на форму микроорганизмов (кокки, палочки, извитые), на их размеры, взаимное расположение и окраску. При увеличении микроскопа около 900, бактерии, имеющие размер 1 мкм, будут выглядеть равными, примерно 1 мм. Таким образом, можно приблизительно определить размеры бактериальной клетки. Зарисуйте увиденные в поле зрения микроорганизмы в протоколе, соблюдая пропорции клеток. Опишите их, сделайте вывод.
После окончания работы необходимо привести рабочее место в порядок, сдать его дежурному и вымыть руки; в случае необходимости обработать руки дезраствором.
Промикроскопировать демонстрационные препараты стрептококков, бацилл сибирской язвы, окрашенные по методу Грама и полученные результаты занести в протокол.
Ожидаемые результаты: Streptococcus spp. Препарат из бульонной культуры. Грам (+) полиморфные кокки диаметром 0,5-1,5 мкм, расположенные, в основном, цепочками.
Bacillus anthracis – возбудитель сибирской язвы, препарат из бульонной культуры. Грам (+) крупные палочки (5-10 х 1-2 мкм) с обрубленными концами, расположенные длинными цепочками в виде «бамбуковой трости».
ОБРАЗЕЦ ОФОРМЛЕНИЯ ПРОТОКОЛА ПРАКТИЧЕСКОГО ЗАНЯТИЯ
Протокол-отчет№ ____от________Ф. И. О.____________№ группы________
ТЕМА:
Цель | Метод и его содержание | Полученные результаты | Выводы |
5.4 Итоговый контроль знаний:
- Классификация царства прокариот.
- Морфология бактерий: форма, величина, взаимное расположение.
- Простые и сложные методы окраски; их информативность
- Метод Грама: методика и значение.
- Типы микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный и др.) и специальные методы микроскопии (темнопольная, фазово-контрастная).
- Устройство биологического микроскопа. Разрешающая способность микроскопа.
- Правила работы с иммерсионной системой.
|
6. Домашнее задание для уяснения темы занятия:
- вопросы для самоконтроля:
1. Назовите отличительные признаки микроорганизмов, как представителей царства прокариот.
2. Какие свойства микроорганизмов лежат в основе микроскопического метода исследования?
3. Назовите и обоснуйте какие методы окраски микроорганизмов (простые или сложные) являются более информативными.
4. Обоснуйте дифференциально-диагностическое значение метода Грама в микробиологической практике.
5. Обоснуйте необходимость использования иммерсионной системы для изучения микроорганизмов.
7. Рекомендации по выполнению НИРС:
Темы рефератов
- История открытия микроорганизмов.
- Особенности мира микробов
- Обязательные структурные элементы бактериальной клетки, выполняемые ими функции.
- Значение L-трансформации в патогенезе инфекционных заболеваний.
- Проблемы диагностики инфекционных заболеваний, вызванных L-формами.
8. Рекомендованная литература по теме занятия:
Обязательная
1. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология: Учебник / О. К. Поздеев; ред. В. И. Покровский. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 768 с.
Дополнительная
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник. в 2 т. / ред. В. В. Зверев, M. Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011 – Т. 1. – 448 с.
2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник. в 2 т. / ред. В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 2. - 480.
3. Гиллеспи, С. Х. Наглядные инфекционные болезни и микробиология / С. Х. Гиллеспи, К. Б. Бамфорд; ред.-пер. С. Г. Пак, А. А. Еровиченков. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 136 с.
4. Хаитов, Р. М. Иммунология: учебник / Р. М. Хаитов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 528 с.
5. Ярилин, А. А. Иммунология: учебник / А. А. Ярилин. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.