ЛАБОРАТОРНО – ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 2
Протокол № 2
Тема: Освоение алгоритма микроскопического метода исследования микроорганизмов.
Цель: Освоить этапы алгоритма микробиологического исследования микроорганизмов
Задачи:
1. Изучить этапы алгоритма МБИ;
2. Приготовить мазки из культуры, выросшей на плотной питательной среде
3. Окрасить препараты простым способом и по Граму,
4. Произвести микроскопию препаратов иммерсионным способом.
5. Обеспечить инфекционную безопасность при проведении работы.
Задание 1. Освоить этапы алгоритма микробиологических исследований.
Лабораторная работа № 1.
«Изучение алгоритма микробиологических исследований»
Ход работы:
1. Ознакомиться с этапами алгоритма микробиологических исследований
2. Составить схему работы по алгоритму микробиологических исследований, заполнив таблицу 2.1. Этапы алгоритма микробиологических исследований
3. Заполнить графу «Оснащение» в таблице 2.2. I этап алгоритма микробиологических исследований
Алгоритм МБИ состоит из 4-х этапов:
I этап – Предварительное исследование. Отбор пробы или прием и регистрация пробы. Предварительная окраска по Граму (по возможности).
II этап – Изучение культуральных свойств микроорганизмов.
III этап – Исследование биохимических свойств.
IV этап – определение чувствительности к антибиотикам.
Таблица 2.1
Этапы алгоритма микробиологических исследований
| 1 этап | Предварительное микробиологическое исследование | 1. | 2. | 3. |
| 2 этап | Изучение культуральных признаков колоний | 1. | 2. | 3. |
| 3 этап | Изучение биохимических свойств | 1. | 2. | 3. |
| 4 этап | Определение антибиотикочувствительности диско – диффузионным методом | 1. | 2. | 3. |
Таблица 2.2
I этап алгоритма микробиологических исследований
| Манипуляция | Навыки | Оснащение |
| Прием пробы | оценить внешний вид и целостность тары, оценить правильность заполнения сопроводительной документации | |
| Регистрация пробы | заполнять журнал регистрации проб | |
| Предварительное окрашивание по Граму | Приготовления микробиологического мазка окрашивания по Граму | |
| Посев на питательные среды | навыки приготовления питательных сред, выбор питательных сред навыки посева на питательные среды |
Задание 2. Изготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать с иммерсией мазок колоний бактериальной культуры, выросших на плотной питательной среде
Лабораторная работа № 2
«Приготовление мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде»
Ход работы:
1. Со стороны дна чашки Петри отметьте восковым карандашом участок с интересующей вас колонией бактерий.
2. Поставьте чашку перед горящей спиртовкой слева от вас.
3. Обезжирьте предметное стекло с помощью кусочка мыла и марлевой салфетки. Проведите несколько раз обезжиренную сторону через пламя спиртовки. Положите стекло на подставку перед спиртовкой обезжиренной стороной вверх.
4. Бактериальной петлей нанесите на стекло каплю дистиллированной воды (на обезжиренном стекле капля растекается).
5. Прокалите бактериальную петлю, держа её вертикально в пламени до покраснения.
6. Осторожно приоткройте чашку Петри, введите петлю.
7. Остудите петлю о крышку или стенку чашки.
8. Осторожно коснитесь петлей колонии.
9. Аккуратно выньте петлю, закройте чашку.
10. Размешайте культуру в капле на стекле. Сделайте мазок размером с двухрублевую монету.
11. Высушите мазок при комнатной температуре или в теплом воздухе над пламенем горелки (на высоте 50-60 см).
12. Зафиксируйте мазок путём трехкратного проведения над пламенем горелки.
13. Мазок окрасьте простым способом или по Граму.
14. Промойте водой.
15. Высушите фильтровальной бумагой или на воздухе.
Окраска препарата по Граму
1. Нанесите на мазок раствор генцианвиолета на 5 минут.
2. Тщательно промойте дистиллированной водой пастеровской пипеткой или промывалкой.
3. Нанесите 2-3 капли раствора Люголя на 1 минуту. Слейте.
4. Нанесите несколько капель спирта до отхождения фиолетовых капель, но не более, чем на 30 секунд.
5. Мазок тщательно промойте водой (сливая воду на ребро стекла).
7. Докрасьте мазок фуксином – 0,5 – 1 минуту.
8. Промойте водой.
9. Высушите фильтровальной бумагой.
Окраска препарата простым способом
1. Нанесите на препарат 2-3 капли фуксина Пфейфера на 1-2 минуты или метиленовый синий на 3-5 минут.
2. Смойте краситель водой (сливая воду на ребро стекла).
3. Высушите фильтровальной бумагой или на воздухе.
Задание 3. Изучить устройство микроскопа. Приобрести навыки микроскопирования с иммерсией
Лабораторная работа № 3.
«Микроскопирование препаратов иммерсионным способом. Определение морфологической группы бактерий»
Ход работы:
1. Изучить устройство микроскопа
2. Заполнить таблицу 2.3. Устройство микроскопа
3. Настроить микроскоп для работы с иммерсионным объективом
4. Изучить препараты под иммерсией
5. Зарисовать полученные результаты
Таблица 2.3
Устройство микроскопа
| Механическая часть | Оптическая часть | Осветительная часть |
Настройка микроскопа:
1. Поставьте микроскоп штативом к себе, на расстоянии ладони от края стола.
2. Поместите препарат на предметный столик.
3. Вращая револьвер, поставьте в рабочее положение объектив с малым увеличением (×8).
4. Глядя в окуляр, настройте четкость поля зрения.
5. Переместите револьвер на большее увеличение (объектив ×90).
Работа с иммерсионным объективом (×90):
1. Нанести на препарат каплю иммерсионного масла.
2. Объектив погрузить в каплю масла почти до упора (смотреть сбоку на предметный столик).
3. Глядя в окуляр, очень медленно вращать макровинты до появления изображения.
4. Микровинтами настроить резкость изображения.
5. Зарисовать полученные результаты:
 | |||
 | |||
_____________________________ _______________________________ _____________________________ _______________________________