Средства измерения, оборудование

Контроль качества средства проводится по данным параметрам

7.1. Определение внешнего вида.

Внешний вид и цвет средства определяют визуальным осмотром пробы.

7.2. Измерение массовой доли бродифакума.

Методика измерения массовой доли бродифакума в средстве основана на методе обращеннофазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектированием, хроматографированием раствора пробы в изократическом режиме после экстракционной очистки, количественная оценка методом внутреннего стандарта.

Средства измерения, оборудование

- аналитический жидкостной хроматограф, снабженный УФ-детектором (254 нм), изократическим насосом, инжектором с объемом дозы 10 мкл, интегратором или компьютерной системой обработки хроматографических данных;

- хроматографическая колонка длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная сорбентом Зорбакс ODS 5 мкм, или другая с аналогичной разрешающей способностью;

- весы лабораторные общего назначения 2 класса, по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г;

- цилиндр 100 см³;

- колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2 ГОСТ 1770;

- пипетки 1-2-2-10 ГОСТ 29228;

- бродифакум – аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,4% (импорт, фирма "Лифа", Франция) или технический продукт с точно установленным содержанием действующего вещества;

- 1,3,5-трифенилбензол – ("ч") внутренний стандарт, МРТУ 6-09-4580-67;

- метиловый спирт (метанол) градации для жидкостной хроматографии;

- кислота муравьиная – "ч.д.а", ГОСТ 5848;

- кислота уксусная ледяная – "ч.д.а.", ГОСТ 61-75;

- вода очистки на оборудовании "Миллипор" или бидистиллированная;

- гелий газообразный по ТУ 51-940-80 марки Б, сжатый в баллоне;

- делительная воронка ВД-3-250 ХС; ВД-2500 ХС ГОСТ 25336;

- ротационный испаритель ИР-1 М, ТУ 25-11-917-76 или аналогичный;

Допускается использовать импортную посуду и реактивы, обеспечивающие точность измерений.

7.2.2. Подготовка к выполнению измерений.

Подготовка хроматографа.

Приготавливают подвижную фазу (элюент): в цилиндре вместимостью 100 см³ смешивают метанол (94,2 см³), воду (5 см³) и ледяную уксусную кислоту (0,8 см³), раствор дегазируют потоком гелия в течение 5-7 минут или другим известным способом.

Устанавливают хроматографическую колонку в термостат и, прокачивая подвижную фазу, проверяют герметичность системы. Кондиционируют колонку до получения стабильной нулевой линии.

Условия работы хроматографа:

- длина волны 254 нм;

- объемная скорость подвижной фазы 1 см³/мин.;

- объем вводимой пробы 10 мкл;

- чувствительность устанавливают такую, чтобы высота хроматографических пиков составляла 60-80% полной шкалы.

Примерное время удерживания бродифакума 6,2 мин., 1.3.5.-трифенил-бензола 11,7 мин.

Условия выполнения измерений подлежат проверке и при необходимости корректировке.

7.2.3. Приготовление раствора для разбавления и раствора для экстрагирования.

- Раствор для разбавления:

в цилиндре вместимостью 100 см³ смешивают 60 см³ метилового спирта и 40 см³ хлористого метилена.

- Раствор для экстрагирования (экстрагент) – хлористый метилен, насыщенный муравьиной кислотой:

в делительной воронке тщательно смешивают 1000 см³ хлористого метилена и 55 см³ муравьиной кислоты, после расслоения фаз в течение 1-2 минут сливают и отбрасывают мутный слой и добавляют еще 80 см³ хлористого метилена.

7.2.4. Приготовление градуировочных растворов

- Градуировочный раствор внутреннего стандарта: в мерной колбе вместимостью 250 см³ растворяют в 100 см³ хлористого метилена, 0,05 г 1,3,5-трифенилбензола, добавляют объем раствора до метки метиловым спиртом и перемешивают.

- Основной градуировочный раствор бродифакума:

в мерной колбе вместимостью 50 см³ растворяют в 20 см³ хлористого метилена, 0,05 г бродифакума, добавляют объем раствора до метки метиловым спиртом и перемешивают.

- Рабочий градуировочный раствор с внутренним стандартом:

дозируют в мерную колбу вместимостью 50 см³ по 10 см³ основного градуировочного раствора бродифакума и градуировочного раствора внутреннего стандарта и добавляют объем раствора до метки раствором для разбавления.

Рабочий градуировочный раствор с внутренним стандартом хроматографируют не менее четырех раз до получения стабильной площади хроматографических пиков бродифакума и внутреннего стандарта. Из полученных хроматограмм вычисляют значение относительного градуировочного коэффициента бродифакума по 1,3,5-трифенилбензолу.

Градуировочные растворы бродифакума используются свежеприготовленными и не могут сохраняться более одних суток.

7.3. Выполнение измерений.

В делительную воронку вместимостью 250 см³ помещают 3 г средства, добавляют 50 см³ водного раствора гидроксида натрия и тщательно перемешивают, добавляют 10 см³ метилового спирта и вновь перемешивают. Экстрагируют раствор 20 см³ хлористого метилена и отстоявшийся слой сливают в круглодонную колбу. Экстракцию повторяют еще тремя порциями хлористого метилена. Из объединенного экстракта отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 50^оС. Охлажденный до комнатной температуры осадок растворяют в 10 см³ раствора внутреннего стандарта и добавляют 40 см³ раствора для разбавления. Смешивают 10 см³ полученного раствора с 50 см³ раствора для разбавления и хроматографируют.

Рекомендуется следующий порядок введения проб: в хроматограф вводят последовательно четыре аликвоты градуировочного раствора, затем две аликвоты раствора испытуемого образца средства.

Из полученных хроматограмм вычисляют массовую долю бродифакума в испытуемом образце средства.

7.4. Обработка результатов измерений.

7.4.1. Вычисление относительного градуировочного коэффициента.

Из каждой хроматограммы градуировочного раствора с внутренним стандартом вычисляют относительный градуировочный коэффициент Кi по формуле:

где: S_ДВ (S_вн.ст.) - площадь (или высота) хроматографического пика бродифакума (1,3,5-трифенилбензола), мм²;

М_дв (М_вн.ст.) – масса бродифакума (1,3,5-трифенилбензола), внесенного в градуировочный раствор, мг;

а – массовая доля бродифакума в аналитическом стандарте.

Вычисляют среднее значение относительного градуировочного коэффициента К.

7.4.2. Вычисление массовой доли бродифакума в средстве.

Массовую долю бродифакума в средстве вычисляют по формуле:

где:

S _i (S _вн.ст.) – площадь хроматографического пика бродифакума (1,3,5-трифенилбензола) в i–м растворе испытуемого образца;

m_пр. (m _вн.ст.) – масса пробы образца (1,3,5-трифенилбензола) в испытуемом растворе, г;

К – установленное значение относительного градуировочного коэффициента.

За результат измерений принимают среднее арифметическое двух параллельных измерений, абсолютное расхождение между которыми не превышает допускаемое, равное 0,003%, границы интервала допустимой абсолютной суммарной погрешности результата измерений ±0,002% при доверительной вероятности 0,95.