Тема «Проведение диагностических исследований животных на гельминтозы»
Цель технологической практики: формирование умений и навыков:
- по отбору проб фекальных масс у различных видов животных и оформлению
сопроводительного документа,
- по лабораторной диагностике гельминтозов животных,
- по лечению животных, больных гельминтозными заболеваниями.
Материально-техническое обеспечение:
- методические указания по выполнению заданий;
- микроскопы;
- лабораторная посуда: баночки Флоринского, сливные чашки, ступки с пестиками, чашки
Петри;
- стеклянные палочки; проволочные петли; металлические ситечки; марлевые салфетки;
- предметные стекла;
- эмалированные кюветы;
- пробы фекалий различных видов животных (крупного рогатого скота);
- колбы с водопроводной водой;
- колбы с насыщенным раствором поваренной соли;
- колбы с насыщенным раствором аммиачной селитры;
Содержание и методические указания по выполнению заданий
Задания для выполнения.
1. Отбор проб фекальных масс у различных видов животных и оформление
сопроводительного документа для отправки в ветеринарную лабораторию.
2. Исследование фекалий животных гелиминтоовоскопическими методами и постановка
диагноза на гельминтозные заболевания.
3. Исследование фекалий животных гелиминтоларвоскопическими методами и
постановка диагноза на гельминтозные заболевания.
4. Лечение животных, больных гельминтозными заболеваниями.
Методические указания к выполнению задания 1.
Пробы фекалий берут рукой, одетой в тонкую резиновую перчатку. Берут примерно 100 г. Фекалий из прямой кишки животных. Допускается отбор проб из только что выделившихся фекалий при испражнении животных. В данном случае берут пробу из верхней части экскрементов, не соприкасавшихся с полом или почвой. Руку после каждого взятия пробы тщательно моют.
При исследовании животных на гельминтозы берут пробу от 10% поголовья, но не менее чем от 25-30 голов.
Каждую пробу помещают в чистые стеклянные баночки, пакетики из плотной бумаги или целлофановые, нумеруют и отправляют в ветеринарную лабораторию с описью в сопроводительном документе. В нем указывают хозяйство, отделение или владельца животных, вид и количество их в стаде, дату взятия проб и цель исследования.
В лабораторию отправляют пробы не более суточной давности со времени их взятия. При исследовании на диктиокаулез и стронгилоидоз пробы следует доставлять в лабораторию не позже 4 часов после взятия.
При взятии проб фекалий у животных необходимо строго соблюдать меры личной гигиены. После взятия каждой пробы следует тщательно мыть руки с мылом.
Методические указания к выполнению задания 2.
Для выявления яиц гельминтов применяют гельминтоовоскопические методы исследования:
- флотационные методы - метод Фюллеборна, метод Котельникова - Хренова, Дарлинга;
- методы седиментации (осаждения) - метод последовательных промываний, модификация метода по Т.Г.Никулину;
- комбинированные методы - метод Н.В. Демидова.
Метод Фюллеборна. В стакане емкостью 200мл размешивают 8-Юг свежих фекалий с 20-ти кратным объемом насыщенного раствора хлорида натрия. После тщательного размешивания смесь фильтруют через металлическое ситечко (марлевую салфетку) в другой чистый стакан и оставляют на 45-60 минут. Затем проволочной петлей с поверхности взвеси берут 3-6 капель и наносят на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют. Метод Котельникова - Хренова. В стакане емкостью200мл размешивают 8-10 г свежих фекалий с 20-ти кратным объемом насыщенного раствора аммиачной селитры. После тщательного размешивания смесь фильтруют через металлическое ситечко (марлевую салфетку) в другой чистый стакан и оставляют на 10-15 минут. Затем проволочной петлей с поверхности взвеси берут 3-6 капель и наносят на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют.
Метод Дарлинга. Пробу фекалий массой 5г смешивают в стакане с водой в соотношении 1:10 и фильтруют через металлическое ситечко (марлевую салфетку) в другой чистый стакан и оставляют на 5 мин. Затем верхний слой сливают, а осадок с небольшим количеством оставшейся жидкости (10мл) переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 2 мин при скорости 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку приливают жидкость Дарлинга (глицерин, смешанный с насыщенным раствором хлорида натрия в равных частях). Пробу размешивают стеклянной палочкой и повторно центрифугируют 2 мин при скорости 1500 об/мин. Затем гельминтологической петлей берут 3-4 капли с поверхности взвеси, наносят на предметное стекло и микроскопируют.
Метод последовательных промываний. Пробу фекалий 3-5г кладут в стаканчик, заливают небольшим количеством воды и, размешивают стеклянной палочкой, добавляют воду до 50-100мл. смесь фильтруют через металлическое ситечко (марлевую салфетку) в другой чистый стакан и оставляют на 3-5 мин. Затем верхний слой сливают, а к осадку добавляют такое же количество воды и процедуру повторяют до тех пор, пока надосадочный слой не будет прозрачным. Верхний слой сливают, а осадок порциями разливают в чашки Петри и микроскопируют.
Модификация метода по Т.Г.Никулину. Учитывая, что при последовательном сливании надосадочной жидкости происходит взмучивание, осадок, и часть яиц трематод могут быть слиты, Т.Г. Никулин предложил отсасывать надосадочную жидкость грушей, на наконечник которой надевают кружок из картона (ограничитель).
Метод Н.В.Демидова. Пробу фекалий 3-5г кладут в стакан, заливают доверху насыщенным раствором хлорида натрия и размешивают стеклянной палочкой. Взвесь отстаивают 15-20 минут, затем совочком удаляют всплывшие грубые частицы. Жидкость отсасывают грушей, оставляя 20-30 мл ее над осадком, к осадку доливают воду до полного объема стакана и размешивают стеклянной палочкой. Взвесь фильтруют через металлическое ситечко (марлевую салфетку) в другой чистый стакан и отстаивают 5 мин. Затем жидкость из стакана отсасывают, оставляя 15-20 мл осадка. Осадок перемещают в конические стаканы, большие стаканы прополаскивают водой и выливают смыв в конические стаканы и отстаивают 5 мин, а жидкость отсасывают. Процедуру повторяют до тех пор, пока надосадочный слой не будет прозрачным. Верхний слой сливают, а осадок порциями разливают в чашки Петри и микроскопируют.